【摘要】：目的以兔骨髓充間質(zhì)干細胞為基礎,利用人脫細胞羊膜、豬小腸粘膜下層為支架材料體外構建組織工程骨膜。觀察兔骨髓充間質(zhì)干細胞在兩者上的生長、分化情況以及體外測定兩種組織工程骨膜的成骨活性。我們可以為尋找能夠構建理想組織工程骨膜的支架材料提供相應的實驗數(shù)據(jù)支持。方法實驗可分為三組來進行,人脫細胞羊膜搭載兔骨髓間充質(zhì)干細胞,記為HAAM組;豬小腸粘膜下層搭載兔骨髓間充質(zhì)干細胞,記為SIS組;不搭載支架材料的兔骨髓間充質(zhì)干細胞,記為空白對照組。家兔的長干骨當中提取出骨髓間充質(zhì)干細胞是實驗的第一步,經(jīng)過成骨誘導培養(yǎng),進行組織學觀察并繪制生長曲線。其次,分別將人羊膜,豬小腸粘膜下層進行脫細胞及消毒滅菌,進行大體形態(tài)學觀察并在電鏡下觀察兩者組織形態(tài),并以兩者負載第三代兔骨髓間充質(zhì)干細胞,從而體外構建出組織工程骨膜。然后電鏡下觀察兩者組織形態(tài)以及MTT法檢測兔骨髓間充質(zhì)干細胞在人脫細胞羊膜和豬小腸黏膜下層的增殖情況。最終體外測定兩者堿性磷酸酶、骨鈣素分泌量。結果1.經(jīng)過在體外成骨誘導培養(yǎng)后,兔骨髓間充質(zhì)干細胞可以存活并增殖傳代,并且具有成骨細胞的特征。2.經(jīng)過消毒滅菌處理的的人脫細胞羊膜、豬小腸粘膜下層,兩者表面均無殘留的細胞,其空間結構基本保持完整,可見清晰的纖維組織。3.在人脫細胞羊膜較豬小腸粘膜下層和空白組的細胞增殖量更多,且分泌的堿性磷酸和骨鈣素也比其余兩組多。結論1.家兔骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)過體外成骨誘導后,與成骨細胞形態(tài)相似、作用相同。2.搭載在支架材料上的細胞增殖量更多。3.人羊膜與豬小腸粘膜經(jīng)過處理后,不攜帶細胞,僅存膠原纖維,無細胞毒性,具有適宜骨髓間充干細胞生長、分化的空間結構。4.人脫細胞羊膜具體網(wǎng)狀的纖維結構較豬小腸粘膜下層的平行纖維結構更適合家兔骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及表達成骨細胞表型,分泌較多的堿性磷酸酶和骨鈣素。更適合用作支架材料來構建組織工程骨膜。
【學位授予單位】：沈陽醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R318.08;R68
【圖文】：

第３天達到８０％？９０％的融合。第１代和第３代細胞之間的粘附和生長速率沒有逡逑顯著差異，其比擬始細胞更均勻，并且細胞間距更均勻。逡逑■逡逑圖１Ａ原代細胞逡逑■逡逑圖１Ｂ第３代細胞逡逑（二）兩纟ｕｍ織工程骨膜的鑒定逡逑１．兩組支架材料的大體觀察逡逑１１逡逑

其比擬始細胞更均勻，并且細胞間距更均勻。逡逑■逡逑圖１Ａ原代細胞逡逑■逡逑圖１Ｂ第３代細胞逡逑（二）兩纟ｕｍ織工程骨膜的鑒定逡逑１．兩組支架材料的大體觀察逡逑１１逡逑

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