【摘要】：目的以兔骨髓充間質(zhì)干細(xì)胞為基礎(chǔ),利用人脫細(xì)胞羊膜、豬小腸粘膜下層為支架材料體外構(gòu)建組織工程骨膜。觀察兔骨髓充間質(zhì)干細(xì)胞在兩者上的生長(zhǎng)、分化情況以及體外測(cè)定兩種組織工程骨膜的成骨活性。我們可以為尋找能夠構(gòu)建理想組織工程骨膜的支架材料提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。方法實(shí)驗(yàn)可分為三組來(lái)進(jìn)行,人脫細(xì)胞羊膜搭載兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,記為HAAM組;豬小腸粘膜下層搭載兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,記為SIS組;不搭載支架材料的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,記為空白對(duì)照組。家兔的長(zhǎng)干骨當(dāng)中提取出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是實(shí)驗(yàn)的第一步,經(jīng)過(guò)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng),進(jìn)行組織學(xué)觀察并繪制生長(zhǎng)曲線。其次,分別將人羊膜,豬小腸粘膜下層進(jìn)行脫細(xì)胞及消毒滅菌,進(jìn)行大體形態(tài)學(xué)觀察并在電鏡下觀察兩者組織形態(tài),并以?xún)烧哓?fù)載第三代兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,從而體外構(gòu)建出組織工程骨膜。然后電鏡下觀察兩者組織形態(tài)以及MTT法檢測(cè)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在人脫細(xì)胞羊膜和豬小腸黏膜下層的增殖情況。最終體外測(cè)定兩者堿性磷酸酶、骨鈣素分泌量。結(jié)果1.經(jīng)過(guò)在體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后,兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以存活并增殖傳代,并且具有成骨細(xì)胞的特征。2.經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理的的人脫細(xì)胞羊膜、豬小腸粘膜下層,兩者表面均無(wú)殘留的細(xì)胞,其空間結(jié)構(gòu)基本保持完整,可見(jiàn)清晰的纖維組織。3.在人脫細(xì)胞羊膜較豬小腸粘膜下層和空白組的細(xì)胞增殖量更多,且分泌的堿性磷酸和骨鈣素也比其余兩組多。結(jié)論1.家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)體外成骨誘導(dǎo)后,與成骨細(xì)胞形態(tài)相似、作用相同。2.搭載在支架材料上的細(xì)胞增殖量更多。3.人羊膜與豬小腸粘膜經(jīng)過(guò)處理后,不攜帶細(xì)胞,僅存膠原纖維,無(wú)細(xì)胞毒性,具有適宜骨髓間充干細(xì)胞生長(zhǎng)、分化的空間結(jié)構(gòu)。4.人脫細(xì)胞羊膜具體網(wǎng)狀的纖維結(jié)構(gòu)較豬小腸粘膜下層的平行纖維結(jié)構(gòu)更適合家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及表達(dá)成骨細(xì)胞表型,分泌較多的堿性磷酸酶和骨鈣素。更適合用作支架材料來(lái)構(gòu)建組織工程骨膜。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08;R68
【圖文】：

第３天達(dá)到８０％？９０％的融合。第１代和第３代細(xì)胞之間的粘附和生長(zhǎng)速率沒(méi)有逡逑顯著差異，其比擬始細(xì)胞更均勻，并且細(xì)胞間距更均勻。逡逑■逡逑圖１Ａ原代細(xì)胞逡逑■逡逑圖１Ｂ第３代細(xì)胞逡逑（二）兩纟ｕｍ織工程骨膜的鑒定逡逑１．兩組支架材料的大體觀察逡逑１１逡逑

其比擬始細(xì)胞更均勻，并且細(xì)胞間距更均勻。逡逑■逡逑圖１Ａ原代細(xì)胞逡逑■逡逑圖１Ｂ第３代細(xì)胞逡逑（二）兩纟ｕｍ織工程骨膜的鑒定逡逑１．兩組支架材料的大體觀察逡逑１１逡逑

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