【摘要】：[目的]觀察國產(chǎn)多孔鉭材料對大鼠軟骨細胞增殖、細胞周期及凋亡的影響,為其作為軟骨組織工程支架材料臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。[方法]選用3周齡SD大鼠雙側(cè)股骨頭、膝關(guān)節(jié)分離軟骨組織,經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化,飽和濕度培養(yǎng),傳代。倒置顯微鏡下逐日觀察細胞生長狀態(tài)。待第2代細胞生長至80%左右時,通過甲苯胺藍染色、番紅O-固綠染色以及Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色進行軟骨細胞鑒定。以F12-DMEM為浸提介質(zhì)分別制備100%、50%、25%多孔鉭浸提液,軟骨細胞加不同濃度多孔鉭浸提液作為實驗組,未加浸提液的軟骨細胞作為對照組;MTT法檢測多孔鉭浸提液對軟骨細胞增殖的影響及細胞毒性檢測。將第2代軟骨細胞接種到多孔鉭支架上進行體外三維培養(yǎng),而對照組是將軟骨細胞接種到無支架的培養(yǎng)板上,倒置相差顯微鏡觀察兩組軟骨細胞生長狀態(tài);胰酶消化復合于材料上的軟骨細胞,流式細胞儀檢測軟骨細胞的細胞周期變化及細胞凋亡。[結(jié)果]軟骨細胞接種初期大小不等,呈圓形懸浮于培養(yǎng)液中,24 h后貼壁細胞伸展呈三角形、多角形等。第7~9 d待細胞生長呈現(xiàn)融合時即可傳代。甲苯胺藍染色顯示軟骨細胞胞漿內(nèi)可見藍紫色顆粒,番紅O-固綠染色顯示胞漿呈綠色、細胞核呈紫紅色,Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色顯示陽性信號位于胞漿及部分胞膜,以上方法證實了分離培養(yǎng)的細胞為軟骨細胞;MTT法檢測顯示隨著培養(yǎng)時間的延長,各濃度浸提液組細胞生長與對照組無明顯差異,軟骨細胞形態(tài)正常,貼壁增殖良好,相同時間點不同濃度的浸提液與對照組間細胞增殖差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),提示軟骨細胞在多孔鉭浸提液中生長、增殖狀態(tài)良好且多孔鉭材料無毒性。多孔鉭支架材料外觀灰色光亮,表面及斷面可見分布均勻的蜂窩狀孔隙,孔徑針尖大,支架材料不透光,將分離培養(yǎng)的第2代軟骨細胞接種到多孔鉭支架上后,復合培養(yǎng)24 h后,倒置相差顯微鏡可見材料邊緣有少量軟骨細胞黏附,細胞呈多角形;隨著培養(yǎng)時間增加,材料邊緣及培養(yǎng)板底部細胞黏附的數(shù)量逐漸增多,邊緣軟骨細胞生長良好;流式細胞儀檢測顯示實驗組與對照組細胞均為正常二倍體細胞,兩組細胞周期分布相似,實驗組及對照組的細胞凋亡率及壞死細胞率差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。[結(jié)論]國產(chǎn)多孔鉭材料無毒性,對軟骨細胞增殖、細胞周期及凋亡無明顯影響,適合作為軟骨組織工程支架材料。
[Abstract]:[objective] to observe the effects of porous tantalum on the proliferation, cell cycle and apoptosis of rat chondrocytes, and to provide experimental evidence for clinical application of porous tantalum as scaffolds for cartilage tissue engineering. [methods] the articular cartilage was isolated from the femoral head of 3 weeks old SD rats. The cartilage was digested by type 鈪，

本文編號：2158894