本文關鍵詞：重組人源膠原蛋白Ⅲ組織工程支架的制備及性能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南京理工大學》 2014年

重組人源膠原蛋白Ⅲ組織工程支架的制備及性能研究

唐啟偉  

【摘要】：膠原蛋白由于其良好的生物學特性已成為組織工程常用的載體材料。本研究所用重組人源膠原蛋白是通過基因工程法設計膠原蛋白基因序列,而后進行翻譯所生產(chǎn)的具有人膠原蛋白特征的蛋白質(zhì),與從動物體提取的膠原蛋白相比,具有親水性、無病毒隱患的優(yōu)點,且易于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn),在組織工程支架材料的研究中有良好的應用前景。但是單一成分作為生物支架時都不能滿足支架的要求,本文利用重組人源膠原蛋白Ⅲ與殼聚糖復合,采用戊二醛交聯(lián)的方法來制備重組人源膠原蛋白Ⅲ/殼聚糖三維海綿支架,并對支架理化性質(zhì)及細胞相容性進行初步研究。其相關研究結果如下。 1.本文首先利用構建的畢赤酵母基因工程菌通過高密度發(fā)酵生產(chǎn)重組人源膠原蛋白(RHSC),采用SDS-PAGE、質(zhì)譜、氨基酸組分分析及紅外光譜等方法對目的蛋白進行分析,發(fā)現(xiàn)RHSC是一種胞外分泌型產(chǎn)物,其單體分子量約56kD,二聚體分子量為單體的二倍,一級結構與所設計目的基因相符合,并與SigmaⅢ型膠原蛋白具有相似的結構特征。 2.探究重組人源膠原蛋白Ⅲ/殼聚糖支架的制備工藝。將重組人源膠原蛋白Ⅲ和殼聚糖按質(zhì)量比5：1,3：1,1：1,1：3,1：5混合,利用戊二醛進行交聯(lián),通過真空冷凍干燥法制備復合多孔支架�？疾炝酥Ъ艿男蚊蔡卣�、孔徑大小、孔隙率、吸水率、降解率、熱穩(wěn)定性等理化性質(zhì)。結果顯示,制備的支架孔徑在20-50μm,孔隙率都在93%以上,殼聚糖的加入顯著改善了支架的降解性能。綜合各項理化性能結果,按照1：1配比制備的支架孔徑分布均勻,支架內(nèi)部孔隙交聯(lián)度高,吸水率和降解率較為合適,熱分解溫度達到249.29℃,符合生物材料的基本要求。 3.利用不同濃度戊二醛交聯(lián)制備支架,發(fā)現(xiàn)用0.05%的戊二醛進行交聯(lián)制備的支架呈均勻分布的多孔結構,孔隙豐富,且交聯(lián)度高,在生理鹽水中穩(wěn)定較好�？紤]選用終濃度為0.05%的戊二醛作為交聯(lián)劑,來制備殼聚糖/重組膠原復合支架。 4.將重組人源膠原蛋白Ⅲ和殼聚糖按1：1的配比,0.05%的戊二醛交聯(lián)并制備其支架浸提液,通過AO/EB染色,MTT實驗,初步探討了其對人皮膚成纖維細胞的生物相容性。結果發(fā)現(xiàn)其支架浸提液細胞毒性小,基本不影響細胞的生長活性,從側面反映了支架具有良好的細胞相容性,有望應用于皮膚組織工程。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：南京理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

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