本文選題：小腸黏膜下層　切入點：組織工程　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景:角膜上皮的完整性是維持角膜透明及正常視功能的基礎,其穩(wěn)定性依賴于角膜緣干細胞(Limbal Stem Cells,LSCs)的不斷增殖分化及向心性移動。眼表疾病(Stevens-Johnson綜合征、化學、熱、輻射損傷、廣泛的微生物感染)和遺傳性疾病(先天性無虹膜)可以引發(fā)嚴重或完全的角膜緣干細胞缺乏(Limbal Stem Cell Deficiency,LSCD)或功能障礙,進而導致角膜上皮缺損、進行性角膜結(jié)膜化、新生血管化、慢性炎癥、角膜渾濁、甚至失明。目前LSCs移植是治療LSCD及功能障礙的最主要方法,但自體LSCs取材有限,同種異體角膜供體來源嚴重匱乏及免疫排斥反應等限制了其在臨床上的應用。因此,組織工程角膜上皮的構(gòu)建成為當前的研究熱點,理想的支架材料是其構(gòu)建的關鍵要素。目的:應用不同濃度的十二烷基磺酸鈉(Sodium Dodecyl Sulfate,SDS)脫細胞處理豬小腸黏膜下層(Small Intestine Submucosa,SIS),篩選制備脫細胞SIS的最佳濃度時間,并檢測其生物相容性及生物安全性,探討脫細胞SIS用于構(gòu)建組織工程角膜上皮載體的可行性。方法:配制濃度為0.1%、0.2%、0.3%、0.5%的SDS液體,分別脫細胞處理SIS 15min、30min、1h、2h(n=20),同時在脫細胞過程中觀察SIS的大體形態(tài)學變化,蘇木素-伊紅(Hematoxylin And Eosin,HE)和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色組織學觀察脫細胞前后SIS的生物學特性,并對脫細胞后SIS支架行基因組DNA分析(n=5)以初步評價各種濃度時間SDS液體的脫細胞效果;將篩選的脫細胞效果徹底、組織學結(jié)構(gòu)保留完整的標本進行單軸拉伸實驗測定其生物力學性能,并以正常豬SIS作對照,篩選出機械力學性能良好的脫細胞標本。應用上述篩選的脫細胞濃度時間處理SIS,并用掃描電鏡(Scanning Electron Microscopy,SEM)、透射電鏡(Transmission Electron Microscopy,TEM)觀察脫細胞SIS的超微結(jié)構(gòu);ELISA實驗對生長因子含量進行定量分析;CCK-8檢測脫細胞SIS浸提液對兔角膜上皮細胞的細胞毒性;脫細胞SIS標本大鼠皮下埋植觀察免疫排斥反應;兔角膜基質(zhì)囊袋內(nèi)植入脫細胞SIS植片及兔角膜上皮細胞接種在脫細胞SIS植片上的接種實驗驗證體內(nèi)及體外的生物相容性;細胞免疫熒光實驗檢測角膜上皮特異性標記物CK3的表達。結(jié)果:脫細胞SIS肉眼觀為乳白色、半透明的膜狀物、而且具有一定的彈性、韌性和透光性;HE和DAPI染色光學顯微鏡檢查結(jié)果顯示0.1%及0.2%濃度SDS處理30min時SIS支架材料無細胞、細胞碎片及DNA物質(zhì)殘留,膠原纖維排列規(guī)則、有序,組織大體結(jié)構(gòu)保留完整;基因組DNA檢測提示0.1%及0.2%濃度SDS處理30min的脫細胞SIS支架細胞及DNA成分去除徹底,脫細胞率可達90%以上;生物力學檢測:0.1%SDS處理30min組與正常SIS組比較,極限抗張強度無顯著性差異(P0.05),而0.2%SDS處理30min組與正常SIS組及0.1%SDS處理30min組比較均有顯著性差異(P0.05)。各組彈性模及斷裂伸長率(%)比較無顯著性差異(P0.05);SEM和TEM檢查脫細胞SIS膠原纖維排列整齊,纖維間孔隙率增加,超微結(jié)構(gòu)基本與正常SIS相似;脫細胞SIS生長因子含量與正常SIS相比無顯著性差異(P0.05);脫細胞SIS浸提液對兔角膜上皮細胞生長狀態(tài)無顯著影響;脫細胞SIS大鼠皮下埋植無明顯移植術后免疫排斥反應;兔角膜基質(zhì)囊袋移植脫細胞SIS表現(xiàn)出良好的生物相容性;兔角膜上皮細胞在脫細胞SIS呈復層生長,相鄰細胞間存在緊密連接;角膜上皮CK3表達陽性。結(jié)論:0.1%SDS脫細胞處理30min是制備脫細胞豬SIS最為理想的濃度時間;脫細胞SIS有一定的機械力學性能、良好的生物相容性及生物安全性,具備構(gòu)建組織工程角膜上皮支架材料的可行性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R318.08

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本文編號：1562923