本文關(guān)鍵詞：磁性聚乙撐亞胺的制備和細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：用超順磁性氧化鐵納米粒修飾聚乙撐亞胺,對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行表征,探討超順磁性聚乙撐亞胺攜帶基因的能力、轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率及對(duì)細(xì)胞活性的影響。方法：1.聚乙撐亞胺與超順磁性Fe3O4納米粒按一定比例振蕩孵育后配制成磁性聚乙撐亞胺,并對(duì)其原子排布、粒徑大小、Zeta電位等進(jìn)行表征；pAd-Track質(zhì)粒通過化學(xué)轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入感受態(tài)大腸桿菌內(nèi)并進(jìn)行擴(kuò)增和提取,將磁性聚乙撐亞胺與質(zhì)粒按不同的比例進(jìn)行結(jié)合,通過凝膠電泳探索二者最佳結(jié)合比例,并用原子力顯微鏡對(duì)復(fù)合產(chǎn)物的原子排布進(jìn)行描述,Zeta電位檢測(cè)復(fù)合產(chǎn)物攜帶電荷情況。2.將293細(xì)胞根據(jù)不同的轉(zhuǎn)染材料進(jìn)行分組：1)磁性聚乙撐亞胺+ pAd-Track,2)非磁性聚乙撐亞胺+pAd-Track,3) GoldenTransfer + pAd-Track,4) PolyMAG+ pAd-Track,每組分別設(shè)置有磁場(chǎng)和無磁場(chǎng)處理的對(duì)照,倒置熒光顯微鏡下分別于轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h觀察各組細(xì)胞熒光表達(dá)情況,流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)轉(zhuǎn)染24h后各組載體的轉(zhuǎn)染率；CCK8試劑盒檢測(cè)各組載體對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響。結(jié)果：1.(1)四氧化三鐵納米粒呈黑色或灰色粉末狀,粒徑大小為9-11nm (TEM),磁感應(yīng)強(qiáng)度(magnetization)45 emu/g;磁性聚乙撐亞胺；原子力顯微鏡檢測(cè)結(jié)果提示：磁性Fe3O4納米粒上接了一個(gè)18個(gè)碳原子的碳鏈,再用N-羥基硫代琥珀酰亞胺修飾,而聚乙撐亞胺通過氨基與磁性Fe3O4納米上的N-羥基硫代琥珀酰亞胺結(jié)合,形成磁性聚乙撐亞胺。磁性聚乙撐亞胺粒徑大小約10～30nm,攜帶正電荷約+50mV；(2)凝膠電泳結(jié)果顯示磁性聚乙撐亞胺的比例越高,結(jié)合的質(zhì)粒越多,當(dāng)二者體積：質(zhì)量比達(dá)10：1時(shí),磁性聚乙撐亞胺能夠完全結(jié)合質(zhì)粒,原子力顯微鏡提示磁性聚乙撐亞胺的結(jié)構(gòu)結(jié)尾有一個(gè)氨基連接了數(shù)個(gè)五元環(huán)結(jié)構(gòu),說明磁性聚乙撐亞胺通過氨基與質(zhì)粒結(jié)合,Zeta電位檢測(cè)復(fù)合物帶有正電荷,約+22.5mV。2.(1)轉(zhuǎn)染24小時(shí),熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),磁性聚乙撐亞胺及非磁性聚乙撐亞胺組熒光表達(dá)量與商品化的轉(zhuǎn)染試劑GoldenTransferTM-D表達(dá)量相當(dāng),而磁性轉(zhuǎn)染試劑盒PolyMAG組熒光表達(dá)量相對(duì)較低；轉(zhuǎn)染48小時(shí)磁性及非磁性聚乙撐亞胺組的熒光表達(dá)量明顯增多,而GoldenTransferTM-D組的轉(zhuǎn)染量較前兩組增加量相對(duì)較少,PolyMAG組的熒光亦有少量增加；轉(zhuǎn)染72小時(shí),磁性聚乙撐亞胺及非磁性聚乙撐亞胺組熒光表達(dá)量相當(dāng),在幾組中最高,GoldenTransferTM-D組其次, PolyMAG組熒光表達(dá)量最低；(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果提示磁性聚乙撐亞胺與非磁性聚乙撐亞胺的轉(zhuǎn)染率相當(dāng),均較其他組高(P0.05),GoldenTransferTM-D組轉(zhuǎn)染率尚可,較PolyMAG組更高,而有外磁場(chǎng)對(duì)各組材料的轉(zhuǎn)染率無顯著影響；(3)磁性聚乙撐亞胺及非磁性聚乙撐亞胺組的細(xì)胞活性的受影響較小,48h細(xì)胞活性相對(duì)較高,在50%以上,兩組細(xì)胞活性無明顯差異(P0.05),而兩種商品化的轉(zhuǎn)染試劑GoldenTransferTM-D和(?) PolyMAG對(duì)細(xì)胞活性影響較大,兩組的細(xì)胞生存率均在10～20%左右。在磁場(chǎng)處理后的細(xì)胞活性與無磁場(chǎng)處理組相比,細(xì)胞活性無明顯差異(P0.05)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)制備的磁性聚乙撐亞胺粒徑大小10～30nm,分布均勻,攜帶正電荷,能夠有效結(jié)合質(zhì)粒。磁性聚乙撐亞胺對(duì)293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率較高且細(xì)胞毒性較低。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R318.08

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本文編號(hào)：1285723