本文關(guān)鍵詞：朊蛋白mRNA IRES的初步確定及安徽阜陽(yáng)和浙江寧波發(fā)熱病人混合病毒感染情況調(diào)查，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：朊病毒病(prion diseases),又稱(chēng)可傳播性海綿狀腦病(transmissible spongiform encephalopathies, TSEs)。人類(lèi)朊病毒病分為散發(fā)型克雅氏病(sCJD)、新型變異型克雅氏病(nvCJD)、庫(kù)魯病(Kuru)和遺傳型朊病毒病等。朊病毒病的致病因子為一種人和動(dòng)物細(xì)胞自身基因編碼的異常折疊的不含有核酸的蛋白質(zhì)。人和動(dòng)物細(xì)胞自身基因編碼的正常蛋白質(zhì),不具有感染性,這種蛋白質(zhì)稱(chēng)之為朊蛋白(prion protein),簡(jiǎn)稱(chēng)PrP。而異常折疊的朊蛋白稱(chēng)之為PrPSc (Scrapie PrP),具有感染性。正常朊蛋白在一定條件下可以轉(zhuǎn)化成PrPSc從而引起朊病毒病的發(fā)生。在細(xì)胞翻譯的過(guò)程中存在2種啟動(dòng)蛋白翻譯的途徑：帽樣結(jié)構(gòu)和核糖體內(nèi)部進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)。IRES起始的蛋白翻譯,可導(dǎo)致細(xì)胞的同一種mRNA表達(dá)不同分子量大小的蛋白。為探討朊蛋白在細(xì)胞內(nèi)的翻譯機(jī)制是否存在內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)起始的翻譯,本研究構(gòu)建了糖基化位點(diǎn)突變、信號(hào)肽和GPI缺失的C端帶有GFP的多種PrP真核表達(dá)載體。轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞和H1-HeLa細(xì)胞檢測(cè)PrP蛋白檢測(cè)mRNA是否存在IRES,結(jié)果顯示PrP蛋白出現(xiàn)多種分子量形式,提示PRNP的mRNA存在IRES起始PrP蛋白翻譯過(guò)程。結(jié)合18S rRNA螺旋區(qū)26互補(bǔ)配對(duì)的GGG序列預(yù)測(cè)、IRES Luc-雙表達(dá)和Western Blot方法初步鑒定出PrP mRNA的IRES區(qū)域?yàn)?97-324bp、400-459bp、496-612 bp、613-636bp和637-693 bp。使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑刺激發(fā)現(xiàn)衣霉素能誘導(dǎo)PrP mRNA IRES依賴(lài)的PrP蛋白表達(dá)水平增加,且?guī)蜎](méi)有改變;而B(niǎo)refeldin A和毒胡蘿卜素誘導(dǎo)PrP mRNA IRES依賴(lài)的PrP蛋白表達(dá)水平未見(jiàn)明顯增加；通過(guò)RNAi抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的三條通路發(fā)現(xiàn)IRE1和PERK兩條通路而不是ATF6可調(diào)節(jié)PrP mRNA的IRES起始的蛋白質(zhì)翻譯。該研究為朊病毒病的發(fā)病機(jī)制的研究奠定一定的基礎(chǔ)。發(fā)熱是病毒性傳染病重要的癥狀之一,而發(fā)熱病人的血清中的病毒IgM分析是判斷發(fā)熱病因的重要手段之一。為了了解安徽阜陽(yáng)和浙江寧波發(fā)熱病人是否合并其它病毒感染及合并感染的病毒種類(lèi),我們收集2013年冬季安徽省阜陽(yáng)手足口病住院患兒45例(均伴有發(fā)熱癥狀)和浙江省寧波發(fā)熱病人105例,檢測(cè)患者血清中6種常見(jiàn)病毒IgM抗體,分析兩地發(fā)熱病人病毒感染情況。手足口病(hand foot and mouthdisease, HFMD)是流行于多個(gè)國(guó)家的一種常見(jiàn)的兒童疾病,以學(xué)齡前兒童比較常見(jiàn),尤其是3歲以下的兒童更容易感染。引起手足口病的病原體主要是柯薩奇A病毒(Coxsacklevirus A group, CVA)、柯薩奇B病毒(Coxsacklevirus B group, CVB)和�？刹《�(Echo virus)。其中,腸道病毒71型(enterovirus 71, EV71)是最常見(jiàn)的引起HFMD的病原體。為了了解安徽阜陽(yáng)2013年冬季手足口病患兒合并其他病毒感染情況。我們根據(jù)手足口病病例診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷收集2013年11月-2013年12月安徽阜陽(yáng)手足口病住院病例及資料,采集患兒血清。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)血清標(biāo)本中的細(xì)小病毒B19、Ⅰ型單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的IgM抗體。結(jié)果發(fā)現(xiàn)2013年11月-2013年12月45份手足口病患兒血清腺病毒IgM陽(yáng)性30例(67.7%),呼吸道合胞病毒IgM陽(yáng)性8例(17.8%),細(xì)小病毒B19IgM陽(yáng)性8例(17.8%),巨細(xì)胞病毒IgM陽(yáng)性3例(6.7%),單純皰疹病毒IgM陽(yáng)性1例(2.2%),血清中未檢測(cè)出現(xiàn)副流感病毒[gM抗體。同時(shí)發(fā)現(xiàn)多例病例的血清中出現(xiàn)兩種以上病毒IgM陽(yáng)性現(xiàn)象。由此推斷2013年阜陽(yáng)地區(qū)冬季手足口病存在合并腺病毒、呼吸道合胞病毒和細(xì)小病毒B19等病毒感染現(xiàn)象。為了了解寧波發(fā)熱病人的病毒混合感染情況,我們收集了2014年6月-2015年6月間浙江省寧波市的發(fā)熱病人的血清,檢測(cè)患者血清中的細(xì)小病毒B19的血清中的IgM檢測(cè),同時(shí)對(duì)B19血清IgM陽(yáng)性的病例進(jìn)行I型單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、柯薩基病毒的IgM抗體檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)2014年6月-2015年6月,共檢測(cè)出32份陽(yáng)性病例,2014年7-8月出現(xiàn)21例,隨后逐漸下降,2015年僅有3例,提示2014年出現(xiàn)B19病例暴發(fā)。通過(guò)B19病毒DNA分型檢測(cè),此次暴發(fā)為B19病毒Ⅲ型。同時(shí),檢測(cè)發(fā)現(xiàn)B19感染陽(yáng)性血清中出現(xiàn)了腺病毒、呼吸道合胞病毒、巨細(xì)胞病毒的IgM陽(yáng)性病例,提示存在多種病毒混合感染。
【關(guān)鍵詞】：PrP IRES Western Blot IREI PERK 發(fā)熱 手足口病 B19 共感染 腺病毒 呼吸道合胞病毒
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R742.9
【目錄】：

• 第一部分 朊蛋白mRNA IRES的初步確定5-41
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-16
• 材料與方法16-30
• 一、實(shí)驗(yàn)材料16-22
• 二、實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-38
• 討論38-40
• 第一部分 小結(jié)40-41
• 第二部分 安徽阜陽(yáng)手足口病病人合并病毒感染及浙江寧波發(fā)熱病人細(xì)小病毒B19感染情況調(diào)查41-61
• 摘要41-43
• Abstract43-45
• 引言45-47
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法47-52
• 一、實(shí)驗(yàn)材料47-48
• 二、實(shí)驗(yàn)方法48-52
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-58
• 一、安徽阜陽(yáng)手足口病患兒合并其他病毒感染情況分析52-55
• 二、浙江寧波B19病毒暴發(fā)情況分析55-58
• 討論58-60
• 第二部分 小結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 縮略詞對(duì)照表65-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷68-69
• 致謝69-70
• 附錄70

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本文編號(hào)：481340