本文關(guān)鍵詞：腦動(dòng)靜脈畸形內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腦動(dòng)靜脈畸形(cerebral arteriovenous malformations,cAVM)是常見的顱內(nèi)血管性病變,是由動(dòng)脈、靜脈及動(dòng)脈化的靜脈組成的畸形的血管團(tuán)。在胚胎早期,原始的動(dòng)脈及靜脈是直接溝通的,以后由于局部毛細(xì)血管發(fā)育異常,動(dòng)脈及靜脈仍然以直接溝通的形式遺留下來。臨床表現(xiàn)主要為反復(fù)發(fā)作的腦出血,其致殘率、致死率極高。在以往的研究中發(fā)現(xiàn),cAVM的病理性改變與供血?jiǎng)用}壓力、畸形團(tuán)、引流靜脈、血流速度和盜血現(xiàn)象相關(guān)。其畸形血管團(tuán)暴露在異常的高血流和剪切力下,會(huì)激活平滑肌細(xì)胞和大腦內(nèi)皮細(xì)胞的分子通路,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞增殖和血管重構(gòu)。動(dòng)物模型顯示,畸形血管團(tuán)的病理改變包括:血管壁不同程度的增厚、彈力層的斷裂,內(nèi)皮細(xì)胞層的增厚,內(nèi)皮細(xì)胞間粘附連接的缺失,內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)不完整和絲狀偽足的缺乏。血管內(nèi)皮細(xì)胞作為cAVM形成機(jī)制的首要參與者,在cAVM的形成過程中起著至關(guān)重要的作用。找到高效、簡(jiǎn)便的血管內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法,建立血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)模型,是研究cAVM的形成機(jī)制的基礎(chǔ)。方法:選取經(jīng)核磁共振(The Magnetic Resonance Imaging,MRI)、血管造影(Digital Subtraction angiography,DSA)及手術(shù)病理切片明確診斷腦動(dòng)靜脈畸形的患者10例,癲癇患者顳淺靜脈3例。以上標(biāo)本均來自于北京天壇醫(yī)院經(jīng)手術(shù)治療的患者。上述標(biāo)本首先采用組織免疫熒光進(jìn)行von Willebrand Factor(vWF)and a-smooth muscle action(a-SMA)抗體染色。剩余標(biāo)本通過膠原酶消化法進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)原代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分選,篩選出Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,(PECAM-1/CD31)及CD144雙陽性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。分選后細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài),再經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定內(nèi)皮細(xì)胞純度。將分選后的內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞免疫熒光對(duì)CD31、CD144、vWF及α-SMA染色。測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)Acetylated Low Density Lipoprotein labeled with 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindo-carbocyanine perchlorate(Dil-Ac LDL)的吞噬能力,進(jìn)一步證實(shí)經(jīng)該實(shí)驗(yàn)方法原代培養(yǎng)的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。通過內(nèi)皮細(xì)胞遷移、侵襲及成管實(shí)驗(yàn),對(duì)培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞的功能進(jìn)行評(píng)估。比較動(dòng)靜脈畸形患者內(nèi)皮細(xì)胞血管生成能力與正常內(nèi)皮之間的差異。結(jié)果:1一般資料本實(shí)驗(yàn)共統(tǒng)計(jì)分析了cAVM患者10名,其中男性7例,女性3例。以腦出血為首發(fā)癥狀者7例,合并癲癇病史者有2例。10位患者顱內(nèi)動(dòng)靜脈畸形病灶體積大小介于40~70mm之間。每位患者均采用手術(shù)治療,手術(shù)室取材后,進(jìn)行血管細(xì)胞原代培養(yǎng),通過上述培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng),該實(shí)驗(yàn)的成功例數(shù)為7例。腦動(dòng)靜脈畸形從MRI及DSA影像學(xué)可見動(dòng)靜脈畸形血管團(tuán)顯影。2測(cè)定組織的vWF及α-SMA表達(dá)。對(duì)superficial temporal vein(STV)及cAVM組織行免疫熒光學(xué)檢測(cè)vWF及α-SMA的表達(dá)水平,結(jié)果所示,在STV及cAVM組可以看出,各組取材均有vWF及α-SMA的表達(dá)。vWF定位于內(nèi)皮細(xì)胞,而α-SMA定位于血管平滑肌細(xì)胞。3原代細(xì)胞培養(yǎng)的分選。通過流式細(xì)胞分析儀對(duì)原代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行分選,獲取CD31及CD144雙陽性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。4分選后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察及流式細(xì)胞分析。分選后細(xì)胞倒置顯微鏡下可見,STV及cAVM組細(xì)胞為扁圓形或橢圓形,呈鋪路石樣排列。其中可見cAVM組細(xì)胞密度較STV組降低,呈抑制性生長(zhǎng)。流式細(xì)胞分析結(jié)果可看出,該實(shí)驗(yàn)方法得到內(nèi)皮細(xì)胞純度較高,其中cAVM組細(xì)胞CD31及CD144雙陽性比例為90.60%,STV組CD31及CD144雙陽性細(xì)胞比例為98.4%。5分選后細(xì)胞CD31、CD144、vWF、α-SMA的表達(dá)。通過細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)STV組及cAVM組細(xì)胞CD31、CD144、vWF及α-SMA的表達(dá)。從免疫熒光結(jié)果可以看出,各組原代培養(yǎng)的細(xì)胞均有CD31、CD144及vWF的表達(dá),證實(shí)內(nèi)皮細(xì)胞的純度。6分選后細(xì)胞Dil-Ac LDL吞噬實(shí)驗(yàn)。從結(jié)果可以看出,STV組及cAVM組分選后培養(yǎng)細(xì)胞均有攝取脂質(zhì)的能力,進(jìn)一步證實(shí)該實(shí)驗(yàn)中原代培養(yǎng)細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。7內(nèi)皮細(xì)胞的體外成管實(shí)驗(yàn)將cAVM和STV組內(nèi)皮細(xì)胞行體外成管實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示:cAVM組成管長(zhǎng)度明顯低于STV對(duì)照組,cAVM組原代培養(yǎng)細(xì)胞成管長(zhǎng)度為12.58±0.30 mm/mm2,STV組原代培養(yǎng)細(xì)胞成管長(zhǎng)度為22.42±0.86mm/mm2(P0.05,n=3)。8內(nèi)皮細(xì)胞體外遷移力和侵襲力差異表現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中,cAVM內(nèi)皮細(xì)胞遷移穿膜細(xì)胞數(shù)和侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)均明顯減少,與STV對(duì)照組比較,有顯著的差異(P0.05)。其中cAVM內(nèi)皮細(xì)胞遷移個(gè)數(shù)為596.50±29.07,STV內(nèi)皮細(xì)胞遷移個(gè)數(shù)為28.42±8.56。而在細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)中,可以得出cAVM內(nèi)皮細(xì)胞侵襲細(xì)胞計(jì)數(shù)為375.56±24.49,STV內(nèi)皮細(xì)胞侵襲個(gè)數(shù)為31.50±3.76。說明cAVM組的內(nèi)皮細(xì)胞遷移和侵襲能力均較正常對(duì)照組明顯下降。結(jié)論:通過膠原酶消化法及流式細(xì)胞學(xué)分選行原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)是獲取cAVM內(nèi)皮細(xì)胞的有效方法,成功率高,可靠性大,可以構(gòu)建體外研究cAVM血管內(nèi)皮細(xì)胞的模型。證實(shí)了在cAVM組內(nèi)皮細(xì)胞的成管、遷移及侵襲能力明顯降低。因此,內(nèi)皮細(xì)胞功能的下降可能是動(dòng)靜脈畸形血管團(tuán)形成的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：腦動(dòng)靜脈畸形(cAVM) 顳淺靜脈 原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) 流式細(xì)胞術(shù) 細(xì)胞鑒定
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-30
• 附表30-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述 腦動(dòng)靜脈畸形分子生物學(xué)：當(dāng)前研究現(xiàn)狀與未來趨勢(shì)的回顧38-51
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 衛(wèi)朝霞,劉永波;一種新的內(nèi)皮細(xì)胞分離方法[J];河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年03期

2 任德成;胡娟娟;張均田;杜冠華;;血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷機(jī)制研究[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;2003年10期

3 潘虹;王庭槐;;內(nèi)皮細(xì)胞caveolae,caveolin-1的生理功能[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年22期

4 殷觀梅;;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子研究進(jìn)展[J];河北醫(yī)藥;2008年12期

5 劉寶宜,陳鐵鎮(zhèn),張寶庚,宋繼業(yè);動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中內(nèi)皮細(xì)胞病變的研究(摘要)——主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞平掙,掃描電鏡及透射電鏡的觀察[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1981年S1期

6 劉寶宜,陳鐵鎮(zhèn),張寶庚,宋繼業(yè);動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化的研究(主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞平鋪技術(shù),掃描電鏡及透射電鏡的方法)[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1982年03期

7 張連元;;動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)理中平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)能[J];煤礦醫(yī)學(xué);1983年04期

8 劉懷瓊;李德馨;;內(nèi)皮細(xì)胞的功能與休克的關(guān)系[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊(cè);1985年04期

9 何澤涌;;關(guān)于內(nèi)皮細(xì)胞研究的某些進(jìn)展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年03期

10 何澤涌;;關(guān)于內(nèi)皮細(xì)胞研究的某些進(jìn)展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 應(yīng)大君;陳衛(wèi)軍;周丁華;;內(nèi)皮細(xì)胞機(jī)械感受功能的實(shí)驗(yàn)研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

2 鄧紅;李懿萍;來茂德;;高糖環(huán)境細(xì)胞間相互作用對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生活性氧和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

3 林萍章;PualJ.Pearson;RaymondCartier;KazuhiroHashimoto;HartzellV.Schaff;;內(nèi)膜再生過程中,內(nèi)皮細(xì)胞之反應(yīng)[A];海峽兩岸電子顯微學(xué)討論會(huì)論文專集[C];1991年

4 趙彭濤;李志超;董明清;賈斌;張莉莉;;LPS對(duì)培養(yǎng)的BPAECsⅠ型Na~+/H~+交換器活性的影響[A];第六次全國(guó)缺氧和呼吸病理生理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

5 熊建瓊;朱佩芳;王正國(guó);蔣建新;;髓樣分化蛋白-2在內(nèi)毒素與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合中的作用[A];第十一次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

6 王心華;甄永蘇;;烯二炔類抗生素力達(dá)霉素抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

7 李彥榮;應(yīng)晨江;易海維;衣衛(wèi)杰;孟依;劉烈剛;孫秀發(fā);;綠茶多酚對(duì)牛內(nèi)皮細(xì)胞窖蛋白-1表達(dá)的影響[A];湖北省、武漢市營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)第十一屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

8 蔡紹皙;張莉;韓亞剛;蔣稼歡;;流動(dòng)腔底面內(nèi)皮細(xì)胞圖型化研究與圖像處理[A];第十次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

9 汪毅;陳允欽;;高密度脂蛋白與內(nèi)皮功能[A];第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合心血管會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

10 馬向紅;黃體鋼;楊萬松;周麗娟;;四氫生物喋呤對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮和超氧陰離子的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)第八次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 ;中藥抗血栓機(jī)理及對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的生物醫(yī)學(xué)研究取得佳績(jī)[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

2 趙軍;耳毒性藥物對(duì)耳蝸螺旋動(dòng)脈平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞電生理特性的影響項(xiàng)目[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 華朋;熱愛老年事業(yè) 投身老年醫(yī)藥[N];中國(guó)老年報(bào);2000年

4 高國(guó)起;提升ACE2活性可消退動(dòng)脈硬化斑塊[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

5 佳愉;中藥善調(diào)理 降壓重保腎[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 劉道安;保護(hù)動(dòng)脈內(nèi)膜 減少冠心病發(fā)生[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 白云城;LPS調(diào)控靜脈內(nèi)皮細(xì)胞膜形態(tài)及通透性引發(fā)血栓形成的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

2 宋恩;內(nèi)皮細(xì)胞源性KLF15調(diào)控TM激活蛋白C抗凝血途徑及MCP-1介導(dǎo)炎性反應(yīng)影響DVT形成的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

3 宋凱;口腔癌—內(nèi)皮細(xì)胞融合的分子調(diào)控機(jī)制及潛在作用[D];武漢大學(xué);2014年

4 薛珊珊;用代謝組學(xué)方法研究DNA甲基化對(duì)花生四烯酸代謝的影響及血管內(nèi)皮激活的機(jī)制[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

5 李鑫;血瘀型脫疽血管內(nèi)皮細(xì)胞功能變化及桃紅四物湯調(diào)節(jié)作用的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2015年

6 李強(qiáng);Rho GTPases及其信號(hào)通路在1-磷酸鞘胺醇介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞功能變化中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

7 陳學(xué)軍;SUR2B/Kir6.1通道開放劑介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)分子途徑的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

8 王蘇陽;埃他卡林對(duì)體循環(huán)、腦循環(huán)、肺循環(huán)微動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞SUR2B/Kir6.1通道的激活作用及能量代謝物質(zhì)的調(diào)節(jié)作用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

9 苑t

本文編號(hào)：466977