背景:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)是顱內(nèi)最常見(jiàn)的原發(fā)性腫瘤,GBM患者的中位生存時(shí)間僅為14個(gè)月左右,因此迫切需要新的以及更有效的治療策略。由于細(xì)胞周期紊亂是腫瘤進(jìn)展和永生化的關(guān)鍵因素,因此在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中控制腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期紊亂是有巨大潛力的。我們開(kāi)始研究AQB和palbociclib的新型組合,以評(píng)估其作為新治療靶標(biāo)的潛力。方法:蛋白質(zhì)譜分析AQB處理后上調(diào)的蛋白表達(dá)情況,TCGA、CGGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析CWF19L1和膠質(zhì)瘤級(jí)別以及預(yù)后相關(guān)性,通過(guò)ChIP-qPCR實(shí)驗(yàn)分析CWF19L1啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白修飾情況,通過(guò)平板克隆以及CCK-8了解膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖情況,雙染法流式細(xì)胞周期檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期分布情況。結(jié)果:AQB和palbociclib抑制劑的組合對(duì)細(xì)胞周期具有更明顯的抑制作用,特別是在HOTAIR和EZH2高表達(dá)且CWF19L1低表達(dá)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤中。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CWF19L1受H3K27ac調(diào)節(jié),因此CWF19L1可明顯被AQB上調(diào)并導(dǎo)致CDK4/6降解,從而導(dǎo)致G1阻滯。與單一藥物相比,AQB和CDK4/6抑制劑palbociclib的組合在體內(nèi)和體外均表現(xiàn)出更有效的...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 公共數(shù)據(jù)庫(kù)
        2.1.2 細(xì)胞系來(lái)源
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)器材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 臨床樣本數(shù)據(jù)分析
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、換液、傳代及凍存
        2.2.3 質(zhì)粒的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
        2.2.4 RNA提取、實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.5 蛋白質(zhì)提取和Western Blot實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 CWF19L1 小干擾RNA的感染
        2.2.7 CWF19L1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
        2.2.8 CCK-8 細(xì)胞毒性及增殖能力檢測(cè)
        2.2.9 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 流式細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.2.11 流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.12 裸鼠顱內(nèi)原位成瘤
        2.2.13 HE染色
        2.2.14 免疫組化技術(shù)
        2.2.15 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)
    2.3 統(tǒng)計(jì)方法
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 AQB促進(jìn)抑癌基因CWF19L1 表達(dá)
    3.2 CWF19L1 功能分析提示其功能和抑癌作用相關(guān)
    3.3 CWF19L1 的表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的等級(jí)和患者的預(yù)后有關(guān)
    3.4 CWF19L1 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖中的關(guān)鍵作用
    3.5 CWF19L1 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期中的關(guān)鍵作用
    3.6 聯(lián)合應(yīng)用AQB可以增強(qiáng)palbociclib的體外增殖抑制作用
    3.7 AQB和 palbociclib聯(lián)合應(yīng)用抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移
    3.8 AQB和 palbociclib的組合在體內(nèi)抑制腫瘤形成
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：4031268