發(fā)布時(shí)間：2024-02-23 19:37

　　【目的】中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病是以腦和脊髓髓鞘缺失為主要病理特征的一組疾病,目前研究認(rèn)為,中樞神經(jīng)脫髓鞘與機(jī)體免疫系統(tǒng)有密切的聯(lián)系。小膠質(zhì)細(xì)胞是定植于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的免疫細(xì)胞,在中樞神經(jīng)脫髓鞘的病理過程中起到了十分重要的作用。Hv1是表達(dá)于細(xì)胞膜上的一種電壓門控質(zhì)子通道,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)高表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞上^[1]。本研究擬以質(zhì)子通道Hv1為靶點(diǎn),研究敲除Hv1基因后質(zhì)子通道Hv1缺失導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞自噬的變化,及其在中樞神經(jīng)脫髓鞘中的影響。【方法】實(shí)驗(yàn)將溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine,LPC)定位定量注射于Hv1基因敲除(Hv1^-/-)和野生型(WT)小鼠一側(cè)胼胝體建立中樞神經(jīng)脫髓鞘模型,兩種小鼠均設(shè)置Sham組、造模后5天、10天、28天組,通過LFB染色觀察兩組小鼠髓鞘脫失情況,并通過免疫印跡Western Blot檢測、免疫熒光染色對比兩組小鼠自噬指標(biāo)的變化,通過電鏡觀察兩組小鼠髓鞘脫失情況及自噬小體的生成情況。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過統(tǒng)計(jì)分析后,對比Hv1^-/-組與WT組在脫髓鞘嚴(yán)重程度、自噬指...

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.LFB染色示髓鞘脫失情況

第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果15第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1Hv1基因敲除改善脫髓鞘分別對Sham組、造模后5天、10天、28天組的WT、Hv1-/-小鼠腦組織切片進(jìn)行LFB染色觀察小鼠胼胝體區(qū)髓鞘脫失情況。對髓鞘脫失情況評級依據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)：0級：髓鞘形態(tài)正常；1級：髓鞘纖維紊亂；2級：髓鞘內(nèi)有空泡形成....

圖2.westernblot、免疫熒光染色顯示兩組小鼠自噬的動(dòng)態(tài)變化

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文16鼠分別取腦，并提取蛋白進(jìn)行westernblot檢測。結(jié)果顯示，與Sham組相比，手術(shù)后WT組小鼠LC3II/LC3I值明顯上調(diào)，5天時(shí)間點(diǎn)時(shí)最高；與WT組相比，5天、10天、28天時(shí)Hv1-/-組LC3II/LC3I值均下調(diào)（圖2，A、B），其中5天時(shí)間....

圖3.電鏡顯示髓鞘結(jié)構(gòu)細(xì)微改變

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文18圖3.電鏡顯示髓鞘結(jié)構(gòu)細(xì)微改變。A：造模后10天WT組、Hv1-/-組胼胝體損傷部位自噬小體生成情況，可見小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)有自噬小體生成（綠色箭頭所指）,Scalebar=1um；B：造模后10天WT組、Hv1-/-組胼胝體損傷部位髓鞘脫失情況，Scaleba....

本文編號(hào)：3907867