目的神經(jīng)退行性疾病為當(dāng)前中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究熱點(diǎn),近年來的研究集中在免疫反應(yīng)和炎性機(jī)制對其發(fā)生發(fā)展的影響,特別是細(xì)胞免疫和體液免疫介導(dǎo)的炎性反應(yīng),其機(jī)制不僅涉及到神經(jīng)元細(xì)胞,更多的表現(xiàn)在中樞系統(tǒng)中的小膠質(zhì)細(xì)胞中。本文中探討使用慢病毒(LV-P2rx4)沉默P2X4基因?qū)2X4/NLRP3炎性小體通路介導(dǎo)的活化狀態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞炎性損傷的影響。方法首先進(jìn)行感染預(yù)實(shí)驗(yàn),確定慢病毒感染BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的最佳感染條件。后取處于對數(shù)生長期的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),采用脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)雙信號干預(yù),建立NLRP3炎性小體活化的模型。按照不同干預(yù)方法將BV2小膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為6組:空白對照組、活化模型組、目的基因陰性對照組、目的基因陰性對照+活化模型組、空載病毒陰性對照組、空載病毒陰性對照+活化模型組。上述細(xì)胞處理后,應(yīng)用Real time PCR和Western blots法分別檢測提取的RNA和蛋白中NLRP3、TNF-α的mRNA及蛋白的相對表達(dá)。結(jié)果如下:1.慢病毒(LV-P2rx4)感染BV2小膠質(zhì)細(xì)胞預(yù)實(shí)驗(yàn)電鏡下熒光結(jié)果顯示:加入50μg·mL^-1

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
實(shí)驗(yàn)材料與方法
    1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
    2 慢病毒感染細(xì)胞預(yù)實(shí)驗(yàn)
    3 敲除P2X4R基因的慢病毒篩選
    4 正式感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
    5 Real time PCR檢測NLRP3、TNF-α的mRNA表達(dá)水平
    6 Western blots免疫印跡分析NLRP3、TNF-α蛋白表達(dá)水平
    7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 慢病毒預(yù)感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2 敲除P2X4R基因的慢病毒篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 各組細(xì)胞NLRP3和TNF-αmRNA的相對表達(dá)量比較
    4 各組細(xì)胞NLRP3、TNF-α蛋白相對表達(dá)量比較
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號：3901983