目的:探討α-Synuclein過表達(dá)對N2A細(xì)胞內(nèi)相關(guān)蛋白表達(dá)和功能的影響以及對轉(zhuǎn)基因小鼠相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。方法:(1)構(gòu)建帕金森病體外細(xì)胞模型:利用脂質(zhì)體將野生型α-Synuclein-pEGFP重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)N2A細(xì)胞,通過G418篩選獲得穩(wěn)定克隆,并通過Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定目的基因α-Synuclein-GFP在細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)(2)觀察α-Synuclein過表達(dá)對N2A細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響:分別以穩(wěn)定過表達(dá)α-Synuclein的N2A細(xì)胞株(α-Syn-N2A)作為實驗組和相同傳代次數(shù)的野生型N2A細(xì)胞株(N2A)作為實驗組和對照組,用不同的抗體標(biāo)記蛋白,通過Western blot法檢測實驗組和對照組蛋白表達(dá)量的差異(3)觀察α-Synuclein過表達(dá)對N2A細(xì)胞功能的影響:通過MTT法檢測實驗組和對照組細(xì)胞存活率的差異。觀察添加6-OHDA、NH3CL/LEUPEPTIN、AMP-Deoxynojirimycin、NMDA和MK-801對實驗組和對照組細(xì)胞存活率的影響(4)測量實驗組和對照組全細(xì)胞葡萄糖腦苷脂酶的活性;純化細(xì)胞溶酶體,測量實驗組...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

本文編號：3877582