背景帕金森病(PD)是一種常見運(yùn)動(dòng)障礙性疾病,在中老年人中高發(fā)。目前PD的治療方法與效果有限,尚未有根治的方法。隨著我國(guó)乃至全球人口老齡化日趨嚴(yán)重,PD嚴(yán)重威脅人們的健康和生活質(zhì)量。迄今為止,雖然已大量的研究表明帕金森的發(fā)病與自噬的異常有關(guān),但是其具體機(jī)制尚未完全清楚。酪氨酸激酶c-Abl和糖原合成激酶GSK3β在細(xì)胞中調(diào)控著多種信號(hào)通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),影響多種細(xì)胞活動(dòng)的進(jìn)程。在體內(nèi)外PD模型和PD患者腦標(biāo)本中均有發(fā)現(xiàn),酪氨酸激酶c-Abl和糖原合成蛋白GSK3β的活性異常增加。另外,有研究發(fā)現(xiàn)在PD模型中c-Abl與自噬的異常相關(guān),但是二者間存在何種具體聯(lián)系尚不清楚。也有研究報(bào)道GSK3β可以調(diào)控TFEB(調(diào)控大多數(shù)自噬和溶酶體相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄因子),影響阿茨海默病和胰腺癌的進(jìn)程,但是在PD尚未有報(bào)道。而在AD模型中,干擾c-Abl可影響GSK3β的活性,但沒有更多的研究探討它們的關(guān)系。因此闡明在PD中GSK3β、c-Abl與自噬相互之間的聯(lián)系以及機(jī)制具有重要的意義,為帕金森病的防治和治療藥物的開發(fā)提供理論基礎(chǔ)和新的思路。目的1.探索MPP+誘導(dǎo)神經(jīng)元死亡和抑制自噬的的機(jī)制;2.明確c-A...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑
        1.2 細(xì)胞株、質(zhì)粒、干擾片段
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 SN4741細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3 CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SN4741細(xì)胞活力
        2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增及提取
        2.5 細(xì)胞免疫熒光染色
        2.6 溶酶體熒光染色
        2.7 Western Blot(免疫印跡)
        2.8 免疫共沉淀(Co-IP)
        2.9 目的基因轉(zhuǎn)錄水平的測(cè)定
        2.10 大鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元原代培養(yǎng)
        2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1 MPP⁺導(dǎo)致SN4741細(xì)胞活力下降,并抑制自噬溶酶體途徑的功能
        1.1 MPP⁺誘導(dǎo)SN4741細(xì)胞活力下降
        1.2 MPP⁺抑制SN4741細(xì)胞的自噬水平和溶酶體生成
        1.3 MPP⁺導(dǎo)致核內(nèi)TFEB減少進(jìn)而從轉(zhuǎn)錄水平抑制自噬和溶酶體生成
    2 MPP⁺處理SN4741細(xì)胞導(dǎo)致c-Abl激活
    3 抑制c-Abl可恢復(fù)MPP⁺導(dǎo)致的自噬和溶酶體生成的抑制
    4 抑制c-Abl可恢復(fù)MPP⁺導(dǎo)致的核內(nèi)TFEB的減少
    5 MPP⁺處理下c-Abl可磷酸化GSK3β-Tyr216位點(diǎn)使其活性增強(qiáng)
        5.1 MPP⁺處理SN4741細(xì)胞導(dǎo)致GSK3 β的活性增強(qiáng)
        5.2 抑制c-Abl可減少M(fèi)PP+導(dǎo)致的GSK3β-Tyr216磷酸化
        5.3 c-Abl激動(dòng)劑DPH可誘導(dǎo)GSK3β-Tyr216磷酸化
        5.4 c-Abl可與GSk3β相互結(jié)合,MPP⁺處理使二者相互結(jié)合增加
    6 MPP⁺誘導(dǎo)的GSK3β-Y216磷酸化并非由HSP90介導(dǎo)的自磷酸化所引起
    7 MPP⁺處理下抑制GSK3β可恢復(fù)TFEB介導(dǎo)的自噬和溶酶體生成
        7.1 MPP⁺處理下抑制GSK3β可恢復(fù)核內(nèi)TFEB的水平
        7.2 MPP⁺處理下抑制GSK3β可恢復(fù)自噬和溶酶體生成
    8 MPP⁺處理下抑制c-Abl/GSK3β后所恢復(fù)的自噬和溶酶體生成對(duì)SN4741細(xì)胞有保護(hù)作用
討論
結(jié)論
    一、本文主要研究結(jié)果
    二、待深入探討的問題
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士階段發(fā)表論文



本文編號(hào)：3877380