研究背景與目的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一種常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,平均發(fā)病年齡60歲,60歲以上發(fā)病率約1%,全球已有超500萬(wàn)患者。PD的主要臨床癥狀有靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直、步態(tài)和姿勢(shì)平衡障礙等,發(fā)病后期可致殘。PD的主要病理改變是中腦黑質(zhì)部中多巴胺(DA)能神經(jīng)元死亡。PD是由多種因素引起的疾病,它與遺傳因素、環(huán)境因素、年齡、線粒體、自噬等相關(guān),但其具體的病因及其機(jī)制目前還未完全明確,有待深入研究。目前臨床上仍然沒(méi)有有效的方法進(jìn)行PD的早期診斷,因此研究PD的發(fā)病機(jī)制對(duì)于PD的診斷和治療是至關(guān)重要的。炎癥參與了PD的發(fā)病,而膠質(zhì)細(xì)胞的組織蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)參與了神經(jīng)系統(tǒng)炎癥的發(fā)生發(fā)展,所以CTSB可能參與PD的發(fā)生發(fā)展。MicroRNAs(miRNAs)是一種內(nèi)源性的長(zhǎng)度21-23個(gè)核苷酸單鏈小分子RNA,它通過(guò)與靶基因信使RNA(mRNA)的3′非翻譯區(qū)(3′UTR)結(jié)合誘導(dǎo)沉默復(fù)合體降解mRNA或阻礙其翻譯,對(duì)真核細(xì)胞的基因表達(dá)、細(xì)胞發(fā)育分化和個(gè)體發(fā)育等多方面起調(diào)控作用。有研究發(fā)現(xiàn)PD患者血清中miR-214...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略索引表
前言
第一部分 miR-214-3p可結(jié)合CTSBmRNA的3′UTR
    1.材料和方法
        1.1 主要材料
        1.2 主要溶液的配制
        1.3 主要儀器和設(shè)備
        1.4 試驗(yàn)方法
            1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.4.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            1.4.3 熒光素檢測(cè)
    2.結(jié)果
        2.1 miR-214-3p的Mimics、NC、Inhibitor及InhibitorNC的序列
        2.2 miR-214-3p調(diào)控的基因
        2.3 miR-214-3p調(diào)控的特點(diǎn)
        2.4 熒光素酶報(bào)告基因的結(jié)果
    3.討論
    4.結(jié)論
第二部分 miR-214-3p調(diào)控膠質(zhì)細(xì)胞(小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞)CTSB蛋白影響多巴胺能神經(jīng)元活力的研究
    1.材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
            1.1.1 主要材料
            1.1.2 儀器設(shè)備及廠家
        1.2 主要溶液的配制
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.3.2 細(xì)胞處理
            1.3.3 WesternBlotting
            1.3.4 BV2 細(xì)胞總 RNA 提取
            1.3.5 RNA定量及純度測(cè)定
            1.3.6 miR的cDNA第一鏈合成
            1.3.7 mRNA的cDNA第一鏈合成
            1.3.8 引物設(shè)計(jì)與合成
            1.3.9 miR的實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            1.3.10 mRNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            1.3.11 細(xì)胞活力檢測(cè)
    2.結(jié)果
        2.1 miR-214-3p對(duì)BV2細(xì)胞和U87MG細(xì)胞內(nèi)源性蛋白的調(diào)控
        2.2 MPP⁺對(duì)BV2細(xì)胞和U87MG細(xì)胞內(nèi)源性蛋白的影響
        2.3 MPP⁺對(duì)BV2細(xì)胞和U87MG細(xì)胞RNA的影響
        2.4 MPP⁺與miR-214-3pMimics共同對(duì)BV2細(xì)胞和U87MG細(xì)胞內(nèi)源性蛋白的影響
        2.5 MPP⁺與miR-214-3pMimics共同對(duì)BV2細(xì)胞和U87MG細(xì)胞RNA的影響
        2.6 MPP⁺與miR-214-3pMimics與BV2細(xì)胞和U87MG細(xì)胞共培養(yǎng)后CM對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活力的影響
    3.討論
    4. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3873350