研究背景與目的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,平均發(fā)病年齡60歲,60歲以上發(fā)病率約1%,全球已有超500萬患者。PD的主要臨床癥狀有靜止性震顫、運動遲緩、肌強直、步態(tài)和姿勢平衡障礙等,發(fā)病后期可致殘。PD的主要病理改變是中腦黑質(zhì)部中多巴胺(DA)能神經(jīng)元死亡。PD是由多種因素引起的疾病,它與遺傳因素、環(huán)境因素、年齡、線粒體、自噬等相關(guān),但其具體的病因及其機制目前還未完全明確,有待深入研究。目前臨床上仍然沒有有效的方法進行PD的早期診斷,因此研究PD的發(fā)病機制對于PD的診斷和治療是至關(guān)重要的。炎癥參與了PD的發(fā)病,而膠質(zhì)細胞的組織蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)參與了神經(jīng)系統(tǒng)炎癥的發(fā)生發(fā)展,所以CTSB可能參與PD的發(fā)生發(fā)展。MicroRNAs(miRNAs)是一種內(nèi)源性的長度21-23個核苷酸單鏈小分子RNA,它通過與靶基因信使RNA(mRNA)的3′非翻譯區(qū)(3′UTR)結(jié)合誘導沉默復合體降解mRNA或阻礙其翻譯,對真核細胞的基因表達、細胞發(fā)育分化和個體發(fā)育等多方面起調(diào)控作用。有研究發(fā)現(xiàn)PD患者血清中miR-214...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略索引表
前言
第一部分 miR-214-3p可結(jié)合CTSBmRNA的3′UTR
    1.材料和方法
        1.1 主要材料
        1.2 主要溶液的配制
        1.3 主要儀器和設備
        1.4 試驗方法
            1.4.1 細胞培養(yǎng)
            1.4.2 細胞轉(zhuǎn)染
            1.4.3 熒光素檢測
    2.結(jié)果
        2.1 miR-214-3p的Mimics、NC、Inhibitor及InhibitorNC的序列
        2.2 miR-214-3p調(diào)控的基因
        2.3 miR-214-3p調(diào)控的特點
        2.4 熒光素酶報告基因的結(jié)果
    3.討論
    4.結(jié)論
第二部分 miR-214-3p調(diào)控膠質(zhì)細胞(小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞)CTSB蛋白影響多巴胺能神經(jīng)元活力的研究
    1.材料和方法
        1.1 實驗材料與儀器
            1.1.1 主要材料
            1.1.2 儀器設備及廠家
        1.2 主要溶液的配制
        1.3 實驗方法
            1.3.1 細胞培養(yǎng)
            1.3.2 細胞處理
            1.3.3 WesternBlotting
            1.3.4 BV2 細胞總 RNA 提取
            1.3.5 RNA定量及純度測定
            1.3.6 miR的cDNA第一鏈合成
            1.3.7 mRNA的cDNA第一鏈合成
            1.3.8 引物設計與合成
            1.3.9 miR的實時熒光定量PCR
            1.3.10 mRNA的實時熒光定量PCR
            1.3.11 細胞活力檢測
    2.結(jié)果
        2.1 miR-214-3p對BV2細胞和U87MG細胞內(nèi)源性蛋白的調(diào)控
        2.2 MPP⁺對BV2細胞和U87MG細胞內(nèi)源性蛋白的影響
        2.3 MPP⁺對BV2細胞和U87MG細胞RNA的影響
        2.4 MPP⁺與miR-214-3pMimics共同對BV2細胞和U87MG細胞內(nèi)源性蛋白的影響
        2.5 MPP⁺與miR-214-3pMimics共同對BV2細胞和U87MG細胞RNA的影響
        2.6 MPP⁺與miR-214-3pMimics與BV2細胞和U87MG細胞共培養(yǎng)后CM對SH-SY5Y細胞活力的影響
    3.討論
    4. 結(jié)論
參考文獻
綜述
參考文獻
致謝
個人簡介



本文編號：3873350