腦水腫是缺血再灌注后出現(xiàn)的主要臨床癥狀,大量研究顯示孕酮對腦有顯著保護作用,能減輕腦創(chuàng)傷及中風動物模型腦損傷后的腦水腫,促進腦組織和功能的修復。最近有研究發(fā)現(xiàn)AQP4參與了孕酮對動物模型的創(chuàng)傷性腦水腫的保護作用。孕酮對定位于星形膠質(zhì)細胞上的AQP4表達及功能的調(diào)控及機制國內(nèi)外未見報道。 目的： 通過研究孕酮對缺血再灌注損傷的星形膠質(zhì)細胞水腫形成的影響,探討AQP4在孕酮調(diào)控星形膠質(zhì)細胞水腫過程中的作用。 內(nèi)容： 1.星形膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng),膠質(zhì)酸性纖維蛋白(GFAP)免疫組化染色鑒定。 2.建立氧糖剝奪(OGD)細胞模型,并研究OGD對星形膠質(zhì)細胞的影響作用,選擇適宜OGD時間(4h)進行再灌注(R)。 3.觀察不同再灌注時間對星形膠質(zhì)細胞腫脹及AQP4的影響,選擇最佳再灌注時間點(24h)進行研究。 4.孕酮對OGD/R損傷星形膠質(zhì)細胞的水腫及AQP4的影響,孕酮受體(PR)及蛋白激酶C (PKC)在此過程中的作用研究。 方法： 1.從新生大鼠皮質(zhì)取材,通過細胞培養(yǎng)、差速粘附和震蕩分離并純化星形膠質(zhì)細胞進行原代培養(yǎng)。 2.免疫組化、HE染色對原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞進行純度鑒定及形態(tài)學...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng)及鑒定
    1.1 對象和方法
        1.1.1 大鼠星型膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng)
        1.1.2 星形膠質(zhì)細胞GFAP免疫細胞化學染色
        1.1.3 星形膠質(zhì)細胞HE染色
        1.1.4 形膠質(zhì)細胞生長曲線測定
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞鏡下形態(tài)觀察
        1.2.2 星形膠質(zhì)細胞GFAP免疫細胞化學染色
        1.2.3 星形膠質(zhì)細胞HE染色
        1.2.4 星形膠質(zhì)細胞生長曲線測定
    1.3 討論
        1.3.1 取材動物年齡與部位
        1.3.2 培養(yǎng)中出現(xiàn)的兩種類型的星形膠質(zhì)細胞
        1.3.3 星形膠質(zhì)細胞的純化
    1.4 小結(jié)
二、星形膠質(zhì)細胞OGD/R損傷模型的建立
    2.1 對象和方法
        2.1.1 主要儀器及試劑
        2.1.2 星形膠質(zhì)細胞OGD
        2.1.3 星形膠質(zhì)細胞OGD/R
        2.1.4 MTT比色法檢測細胞活性
        2.1.5 LDH漏出檢測
        2.1.6 細胞水腫的形態(tài)學觀察
        2.1.7 Western blotting檢測AQP4蛋白表達
        2.1.8 實驗數(shù)據(jù)的處理與統(tǒng)計學分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 OGD時間對星形膠質(zhì)細胞的影響作用實驗
        2.2.2 OGD/R對星形膠質(zhì)細胞AQP4表達及水腫的影響作用
    2.3 討論
        2.3.1 細胞氧糖剝奪后再灌注時間點的選擇
        2.3.2 OGD/R過程細胞水腫的形成
        2.3.3 OGD/R對星形膠質(zhì)細胞AQP4的影響
        2.3.4 OGD/R所致的細胞水腫與AQP4表達的關(guān)系
    2.4 小結(jié)
三、孕酮對OGD/R損傷的AC細胞AQP4的影響及機制
    3.1 對象和方法
        3.1.1 主要儀器及試劑
        3.1.2 細胞分組及處理因素
        3.1.3 MTT法細胞活性檢測
        3.1.4 LDH漏出檢測
        3.1.5 細胞水腫的形態(tài)學觀察
        3.1.6 Western blotting檢測AQP4、PKC的蛋白表達
        3.1.7 免疫熒光表達檢測
        3.1.8 實驗數(shù)據(jù)的處理與統(tǒng)計學分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 不同劑量孕酮對OGD4/R24細胞的影響實驗
        3.2.2 孕酮對OGD4/R24細胞作用的信號轉(zhuǎn)導機制實驗
    3.3 討論
        3.3.1 孕酮干預劑量的選擇
        3.3.2 孕酮通過調(diào)控AQP4緩解腦水腫
        3.3.3 PKC在缺血再灌注后的變化
        3.3.4 PKC對AQP4表達的調(diào)控
        3.3.5 PKC介導的孕酮抑制AQP4表達的作用
        3.3.6 孕酮的作用途徑及其受體
    3.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻
致謝



本文編號：3865537