目的:探討丙酮酸乙酯是否對谷氨酸誘導(dǎo)的新生大鼠小腦顆粒神經(jīng)元具有保護(hù)作用及其作用機(jī)制。方法:體外原代培養(yǎng)新生7 d大鼠小腦顆粒神經(jīng)元模型。將培養(yǎng)皿中成熟細(xì)胞模型隨機(jī)分為空白對照組、谷氨酸組和谷氨酸+丙酮酸乙酯組。通過MTT法及FDA/PI熒光雙染色法測定細(xì)胞存活率,用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)并用核染色法分析核形態(tài)學(xué)變化;通過Fluo-3/AM檢測細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度([Ca²⁺]_i);通過H₂-DCF-DA染色檢測細(xì)胞內(nèi)ROS含量;通過DHE染色法檢測細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子含量;通過免疫組化和Western blot法檢測細(xì)胞核和細(xì)胞漿中核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)和血紅素加氧酶1(HO-1)的表達(dá)水平;通過抗氧化反應(yīng)元件(ARE)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄并采用雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果:(1)丙酮酸乙酯可劑量依賴性(0.1～5 mmol/L)拮抗谷氨酸的興奮性毒性作用(P<0.05);(2)丙酮酸乙酯(2.5和5 mmol/L)+谷氨酸30 min可阻滯[Ca²⁺]_i升高(P<...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 主要試劑
    2 小腦顆粒神經(jīng)元培養(yǎng)
    3 Glu興奮性模型建立與實(shí)驗(yàn)分組
    4 主要方法
        4.1 FDA/PI熒光染色
        4.2 MTT實(shí)驗(yàn)
        4.3 細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度（intracellular free calcium concentration,[Ca2+]i）的測定
        4.4 H2-DCF-DA檢測
        4.5 DHE檢測超氧陰離子
        4.6 Western blot
        4.7 免疫組化
        4.8 ARE誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活性檢測
    5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1 EP對小腦顆粒神經(jīng)元的保護(hù)作用
    2細(xì)胞內(nèi)ROS檢測結(jié)果
    3小腦顆粒神經(jīng)元[Ca2+]i檢測結(jié)果
    4 EP通過激活Nrf2/ARE/HO-1通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
討論
    1 Glu對體外培養(yǎng)小腦顆粒神經(jīng)元的毒性作用
    2 EP對小腦顆粒神經(jīng)元的保護(hù)作用
    3細(xì)胞內(nèi)ROS檢測結(jié)果
    4 EP抑制細(xì)胞內(nèi)鈣升高
    5 EP通過激活Nrf2/ARE通路而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用



本文編號：3833341