目的利用RNA干擾（RNAi）在人膠質(zhì)瘤U251和U87-MG細胞中沉默NOB1（NIN1/RPN12binding protein1homolog）基因的表達，探討NOB1對惡性膠質(zhì)瘤細胞增殖以及凋亡的影響。 方法利用免疫組化技術對56例不同級別人膠質(zhì)瘤組織中NOB1的表達及與病理分級相關性進行分析。構建NOB1基因的短發(fā)卡（shRNA）慢病毒表達載體，包裝成病毒顆粒，其中用綠色熒光蛋白（GFP）作為報告基因。將GFP慢病毒顆粒按照不同感染復數(shù)（MOI）感染不同膠質(zhì)瘤細胞（U251、U87-MG），48h后經(jīng)熒光鏡檢檢測GFP表達陽性率以判定感染率，以此確定最優(yōu)MOI（感染復數(shù)）。將NOB1基因的shRNA慢病毒顆粒以優(yōu)化的條件感染培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤細胞，在24h收集RNA樣本，36h收集蛋白樣本，通過real-time PCR與NOB1抗體的Western blot實驗驗證siRNA對于NOB1基因的在mRNA和蛋白水平的沉默效率。在U87-MG、U251細胞利用優(yōu)化慢病毒感染條件，穩(wěn)定沉默NOB1基因，實驗分為：空白對照，陰性對照，RNAi實驗組三組，分別進行MTT實驗檢測膠質(zhì)瘤細胞的...

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【學位級別】：碩士

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英文縮略詞表
摘要
Abstract
1 前言
2 材料與方法
3 結果
4 討論
5 結論
6 參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3793035