目前在全世界范圍內(nèi),神經(jīng)退行性疾病已經(jīng)成為影響人類健康的最主要的疾病之一。以帕金森氏癥為例,全世界65歲以上人口中有約1%的人長期受其困擾。帕金森氏癥最主要的病理特征之一是病人中腦黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元的退行性死亡。由于其損傷部位相對集中,而且神經(jīng)系統(tǒng)的再生能力又十分有限,因而使得細胞移植治療成為當前治療帕金森氏癥的最有效手段之一。理想的治療帕金森氏癥的細胞資源需要同時具備幾個主要特征：培養(yǎng)方便,可以在體外大量增殖,并且能夠分化得到中腦多巴胺能神經(jīng)元,同時又具備較低的致瘤風險。然而到目前為止,無論是胚胎干細胞或體細胞來源的誘導型多能性干細胞,還是由體細胞直接轉(zhuǎn)化而來的成熟神經(jīng)元,都無法同時滿足這些要求。 本研究旨在通過兩條途徑將不同類型的小鼠體細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓亩喟桶纺苌窠?jīng)元：一條途徑是利用外源因子先將體細胞重編程成為具有多能性和自我更新能力的神經(jīng)前體細胞,再將其分化為成熟的多巴胺能神經(jīng)元；而另一種方法是通過外源因子的導入,將體細胞直接誘導為成熟的多巴胺能神經(jīng)元。主要研究結(jié)果如下： (1)小鼠睪丸支持細胞是來源于中胚層的終末分化細胞,具有分離純度高,培養(yǎng)方法簡單等優(yōu)勢,因此是研究不同譜系的...

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 細胞重編程技術(shù)的研究進展
        1.1.1 體細胞核移植技術(shù)
        1.1.2 細胞融合技術(shù)
        1.1.3 外源因子誘導的體細胞向多能性干細胞的重編程
    1.2 細胞譜系重編程(轉(zhuǎn)分化)
        1.2.1 傳統(tǒng)轉(zhuǎn)分化研究中存在的缺陷
        1.2.2 外源因子誘導的細胞譜系重編程
    1.3 體細胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        1.3.1 小鼠成纖維細胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        1.3.2 小鼠肝細胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        1.3.3 人類成纖維細胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
    1.4 本研究旨在通過兩條途徑將不同類型的小鼠體細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓亩喟桶纺苌窠?jīng)元
        1.4.1 體細胞向具有多巴胺能神經(jīng)元分化能力的多能性神經(jīng)前體細胞的直接轉(zhuǎn)分化
        1.4.2 體細胞向成熟的多巴胺能神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器與設備
        2.1.3 主要試劑及試劑盒
        2.1.4 常用試劑及配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠體細胞的分離和培養(yǎng)
        2.2.2 目的基因的克隆
        2.2.3 小鼠體細胞向神經(jīng)前體細胞的直接誘導
        2.2.4 體細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的體外分化
        2.2.5 免疫熒光染色以及體外分化效率的統(tǒng)計
        2.2.6 體細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的體內(nèi)移植實驗
        2.2.7 電生理功能檢測
        2.2.8 細胞全基因組表達譜分析
        2.2.9 PCR檢測外源因子在基因組中的整合情況
        2.2.10 Southern Blot
        2.2.11 Realtime RT-PCR
3 結(jié)果與分析
    3.1 小鼠睪丸支持細胞向多能性神經(jīng)前體細胞的直接轉(zhuǎn)分化
        3.1.1 新生小鼠睪丸支持細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.1.2 誘導小鼠睪丸支持細胞向多能性神經(jīng)前體細胞的轉(zhuǎn)化
        3.1.3 小鼠睪丸支持細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的鑒定
        3.1.4 小鼠睪丸支持細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的全基因組表達譜分析
        3.1.5 小鼠睪丸支持細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的體外分化
        3.1.6 小鼠睪丸支持細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的體內(nèi)移植
        3.1.7 小鼠睪丸支持細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的體外電生理功能檢測
    3.2 小鼠尾尖成纖維細胞向多能性神經(jīng)前體細胞的直接轉(zhuǎn)分化
        3.2.1 新生小鼠尾尖成纖維細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.2.2 誘導小鼠尾尖成纖維細胞向多能性神經(jīng)前體細胞的轉(zhuǎn)化
        3.2.3 小鼠尾尖成纖維細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的體外分化
        3.2.4 小鼠尾尖成纖維細胞來源的誘導型神經(jīng)前體細胞的體內(nèi)移植
    3.3 小鼠胎兒成纖維細胞向成熟多巴胺能神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        3.3.1 小鼠胎兒成纖維細胞向成熟神經(jīng)元的直接誘導
        3.3.2 小鼠胎兒成纖維細胞向成熟多巴胺能神經(jīng)元的直接誘導
4 討論
    4.1 特異性轉(zhuǎn)錄因子在細胞命運決定中的作用
        4.1.1 調(diào)控胚胎干細胞多能性和自我更新能力的分子網(wǎng)絡
        4.1.2 調(diào)控神經(jīng)干細胞多能性和自我更新能力的分子網(wǎng)絡
        4.1.3 特異性轉(zhuǎn)錄因子誘導的體細胞向神經(jīng)前體細胞的重編程
    4.2 體細胞來源的誘導型神經(jīng)細胞在帕金森氏癥臨床治療中的應用前景
        4.2.1 誘導型多巴胺能神經(jīng)元在帕金森氏癥細胞移植治療中的應用
        4.2.2 誘導型神經(jīng)前體細胞在帕金森氏癥細胞移植治療中的應用
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀博士學位期間已發(fā)表的學術(shù)論文



本文編號：3772423