目前在全世界范圍內(nèi),神經(jīng)退行性疾病已經(jīng)成為影響人類(lèi)健康的最主要的疾病之一。以帕金森氏癥為例,全世界65歲以上人口中有約1%的人長(zhǎng)期受其困擾。帕金森氏癥最主要的病理特征之一是病人中腦黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元的退行性死亡。由于其損傷部位相對(duì)集中,而且神經(jīng)系統(tǒng)的再生能力又十分有限,因而使得細(xì)胞移植治療成為當(dāng)前治療帕金森氏癥的最有效手段之一。理想的治療帕金森氏癥的細(xì)胞資源需要同時(shí)具備幾個(gè)主要特征：培養(yǎng)方便,可以在體外大量增殖,并且能夠分化得到中腦多巴胺能神經(jīng)元,同時(shí)又具備較低的致瘤風(fēng)險(xiǎn)。然而到目前為止,無(wú)論是胚胎干細(xì)胞或體細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型多能性干細(xì)胞,還是由體細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化而來(lái)的成熟神經(jīng)元,都無(wú)法同時(shí)滿(mǎn)足這些要求。 本研究旨在通過(guò)兩條途徑將不同類(lèi)型的小鼠體細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓亩喟桶纺苌窠?jīng)元：一條途徑是利用外源因子先將體細(xì)胞重編程成為具有多能性和自我更新能力的神經(jīng)前體細(xì)胞,再將其分化為成熟的多巴胺能神經(jīng)元；而另一種方法是通過(guò)外源因子的導(dǎo)入,將體細(xì)胞直接誘導(dǎo)為成熟的多巴胺能神經(jīng)元。主要研究結(jié)果如下： (1)小鼠睪丸支持細(xì)胞是來(lái)源于中胚層的終末分化細(xì)胞,具有分離純度高,培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì),因此是研究不同譜系的...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 細(xì)胞重編程技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.1.1 體細(xì)胞核移植技術(shù)
        1.1.2 細(xì)胞融合技術(shù)
        1.1.3 外源因子誘導(dǎo)的體細(xì)胞向多能性干細(xì)胞的重編程
    1.2 細(xì)胞譜系重編程(轉(zhuǎn)分化)
        1.2.1 傳統(tǒng)轉(zhuǎn)分化研究中存在的缺陷
        1.2.2 外源因子誘導(dǎo)的細(xì)胞譜系重編程
    1.3 體細(xì)胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        1.3.1 小鼠成纖維細(xì)胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        1.3.2 小鼠肝細(xì)胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        1.3.3 人類(lèi)成纖維細(xì)胞向成熟神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
    1.4 本研究旨在通過(guò)兩條途徑將不同類(lèi)型的小鼠體細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓亩喟桶纺苌窠?jīng)元
        1.4.1 體細(xì)胞向具有多巴胺能神經(jīng)元分化能力的多能性神經(jīng)前體細(xì)胞的直接轉(zhuǎn)分化
        1.4.2 體細(xì)胞向成熟的多巴胺能神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器與設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及試劑盒
        2.1.4 常用試劑及配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠體細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        2.2.2 目的基因的克隆
        2.2.3 小鼠體細(xì)胞向神經(jīng)前體細(xì)胞的直接誘導(dǎo)
        2.2.4 體細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的體外分化
        2.2.5 免疫熒光染色以及體外分化效率的統(tǒng)計(jì)
        2.2.6 體細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 電生理功能檢測(cè)
        2.2.8 細(xì)胞全基因組表達(dá)譜分析
        2.2.9 PCR檢測(cè)外源因子在基因組中的整合情況
        2.2.10 Southern Blot
        2.2.11 Realtime RT-PCR
3 結(jié)果與分析
    3.1 小鼠睪丸支持細(xì)胞向多能性神經(jīng)前體細(xì)胞的直接轉(zhuǎn)分化
        3.1.1 新生小鼠睪丸支持細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.1.2 誘導(dǎo)小鼠睪丸支持細(xì)胞向多能性神經(jīng)前體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
        3.1.3 小鼠睪丸支持細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的鑒定
        3.1.4 小鼠睪丸支持細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的全基因組表達(dá)譜分析
        3.1.5 小鼠睪丸支持細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的體外分化
        3.1.6 小鼠睪丸支持細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的體內(nèi)移植
        3.1.7 小鼠睪丸支持細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的體外電生理功能檢測(cè)
    3.2 小鼠尾尖成纖維細(xì)胞向多能性神經(jīng)前體細(xì)胞的直接轉(zhuǎn)分化
        3.2.1 新生小鼠尾尖成纖維細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.2.2 誘導(dǎo)小鼠尾尖成纖維細(xì)胞向多能性神經(jīng)前體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
        3.2.3 小鼠尾尖成纖維細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的體外分化
        3.2.4 小鼠尾尖成纖維細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞的體內(nèi)移植
    3.3 小鼠胎兒成纖維細(xì)胞向成熟多巴胺能神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化
        3.3.1 小鼠胎兒成纖維細(xì)胞向成熟神經(jīng)元的直接誘導(dǎo)
        3.3.2 小鼠胎兒成纖維細(xì)胞向成熟多巴胺能神經(jīng)元的直接誘導(dǎo)
4 討論
    4.1 特異性轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞命運(yùn)決定中的作用
        4.1.1 調(diào)控胚胎干細(xì)胞多能性和自我更新能力的分子網(wǎng)絡(luò)
        4.1.2 調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞多能性和自我更新能力的分子網(wǎng)絡(luò)
        4.1.3 特異性轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)的體細(xì)胞向神經(jīng)前體細(xì)胞的重編程
    4.2 體細(xì)胞來(lái)源的誘導(dǎo)型神經(jīng)細(xì)胞在帕金森氏癥臨床治療中的應(yīng)用前景
        4.2.1 誘導(dǎo)型多巴胺能神經(jīng)元在帕金森氏癥細(xì)胞移植治療中的應(yīng)用
        4.2.2 誘導(dǎo)型神經(jīng)前體細(xì)胞在帕金森氏癥細(xì)胞移植治療中的應(yīng)用
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3772423