目的神經(jīng)病理性疼痛是一種慢性疼痛,它的機制復雜、病程長、嚴重影響患者的生活質(zhì)量,但在臨床上缺乏有效的鎮(zhèn)痛藥,因而有待發(fā)現(xiàn)新的治療靶點。哺乳動物Toll樣受體8（TLR8）通過識別內(nèi)源和外源性刺激促進防御性炎癥反應(yīng),參與機體免疫應(yīng)答過程。另外,TLR8還可以識別單鏈和雙鏈RNA。miR-21作為與疼痛密切相關(guān)的小RNA,在體外可以通過外泌體的形式作用于免疫細胞中的TLR8。圍繞TLR8和miR-21,本文研究了外周神經(jīng)損傷后TLR8和miR-21在背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion,DRG）中的表達分布以及它們在神經(jīng)病理性疼痛中的作用和機制。方法采用單側(cè)L5脊神經(jīng)結(jié)扎（SNL）的方法建立神經(jīng)病理性疼痛模型;行為學方法檢測SNL和鞘內(nèi)注射miR-21 mimic后不同時間點WT小鼠和Tlr8^-/-小鼠的機械性觸誘發(fā)痛和熱痛覺過敏行為;免疫熒光雙標檢測TLR8在DRG神經(jīng)元細胞器的定位;原位雜交實驗檢測miR-21在DRG神經(jīng)元表達及與TLR8的共標情況;實時定量PCR檢測SNL、鞘內(nèi)注射TLR8激動劑VTX-2337和miR-21 mimic后多種炎... 

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
第二章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 神經(jīng)病理性疼痛模型 (SNL) 的建立
        2.2.2 行為學檢測
        2.2.3 脊髓鞘內(nèi)注射
        2.2.4 L5脊神經(jīng)注射
        2.2.5 灌注取材
        2.2.6 Real-time PCR
        2.2.7 免疫印跡試驗 (Western Blot)
        2.2.8 免疫熒光染色
        2.2.9 基因敲除小鼠鑒定
        2.2.10 原位雜交
        2.2.11 傳代細胞系的培養(yǎng)
        2.2.12 熒光素酶報告基因檢測
        2.2.13 統(tǒng)計分析
第三章 結(jié)果
    3.1 背根神經(jīng)節(jié)中的TLR8在慢性疼痛中的作用
        3.1.1 Tlr8-/-小鼠的鑒定
        3.1.2 敲除Tlr8基因不影響基礎(chǔ)疼痛閾值、運動、神經(jīng)纖維及化學遞質(zhì)的表達
        3.1.3 敲除Tlr8基因降低SNL誘導的神經(jīng)病理性疼痛行為
    3.2 TLR8在細胞器中的定位及其參與疼痛調(diào)節(jié)的下游機制研究
        3.2.1 背根神經(jīng)節(jié)中的TLR8表達分布于溶酶體和內(nèi)涵體中
        3.2.2 鞘內(nèi)注射TLR8激動劑VTX-2337 激活ERK通路
        3.2.3 敲除TLR8抑制SNL誘發(fā)的p ERK增多
        3.2.4 敲除TLR8抑制背根神經(jīng)節(jié)中炎癥因子的表達
    3.3 非編碼miR-21 參與TLR8調(diào)控神經(jīng)病理性疼痛
        3.3.1 神經(jīng)損傷后DRG中miR-21 表達增多
        3.3.2 miR-21 表達在DRG的大中小神經(jīng)元
        3.3.3 miR-21 通過TLR8誘發(fā)疼痛行為的產(chǎn)生并且激活ERK通路
        3.3.4 抑制miR-21 緩解SNL誘發(fā)的神經(jīng)病理性疼痛
第四章 討論
    4.1 DRG神經(jīng)元內(nèi)的TLR8在神經(jīng)病理性疼痛中的作用
    4.2 TLR8參與神經(jīng)病理性疼痛的下游信號通路
    4.3 miR-21 作為TLR8的內(nèi)源性配體調(diào)節(jié)神經(jīng)病理性疼痛
第五章 結(jié)論
參考文獻
英文縮寫詞
綜述
    綜述參考文獻
在攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文與參加的項目
致謝



本文編號：3675778