缺血性腦血管病是神經內科臨床最常見的神經系統(tǒng)疾病，缺血性腦損傷是其重要的病理及病理生理過程。近年來，細胞信號轉導通路參與缺血性腦損傷與修復的機制研究已受到廣泛關注，越來越多的信號通路被發(fā)現可參與腦缺血損傷過程。Notch1信號通路是一個在進化過程中高度保守的信號轉導通路。有研究表明，Notch1信號可調控動脈生成、參與缺血腦損傷后神經元新生過程[1]。但Notch1信號通路在缺血性腦損傷過程中的變化及其作用機制尚不清楚。本研究在體外建立腦缺血損傷模型，探討Notch1信號通路在腦缺血損傷中作用及機制，為進一步揭示Notch1信號轉導通路與腦缺血損傷的聯系和內在機制研究奠定實驗基礎，為腦缺血損傷的治療提供理論依據和可能的治療靶點。1. PC12細胞轉化為神經元樣細胞的培養(yǎng)、鑒定及其氧糖剝奪模型的制備目的：體外培養(yǎng)PC12細胞，誘導其轉化為神經元樣細胞，行氧糖剝奪（OGD），建立體外腦缺血損傷模型。方法：體外培養(yǎng)PC12細胞，NGF（終濃度150ng/ml）刺激誘導其分化為神經元樣細胞，應用無糖培養(yǎng)基及缺氧培養(yǎng)箱行OGD；應用MTT、流式細胞術及免疫熒光染色法行模型評價。結果：終濃度150... 

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【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 綜述
    1.MAPK 信號轉導通路
    2.JAK/STAT 信號通路
    3.PI3K/Akt 信號通路
    4.NF-κB 信號通路
    5.Rho/Rho-kinase 信號轉導通路
    6.ActA/Smads 信號通路
    7. PKA-CREB 信號轉導通路
    8.Toll 樣受體 4 信號轉導通路
    9.Notch 信號通路
    10.結語
第3章 PC12 細胞轉化為神經元樣細胞的培養(yǎng)、鑒定及氧糖剝奪模型的制備
    3.1 材料
        3.1.1 細胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 PC12 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 PC12 細胞轉化為神經元樣細胞的培養(yǎng)
        3.2.3 PC12 細胞轉化為神經元的鑒定
        3.2.4 PC12 細胞氧糖剝奪模型（OGD）的建立
        3.2.5 PC12 細胞氧糖剝奪模型評價
        3.2.6 統(tǒng)計學處理
    3.3 實驗結果
        3.3.1 NGF 誘導 PC12 細胞轉化為神經元樣細胞的培養(yǎng)
        3.3.2 PC12 細胞轉化為神經元樣細胞的的鑒定
        3.3.3 PC-12 細胞氧糖剝奪（OGD）模型的建立
        3.3.4 PC-12 細胞氧糖剝奪（OGD）模型的評價
    3.4 討論
    3.5 小結
第4章 靶向沉默 Notch1 基因及沉默效果檢測
    4.1 材料
        4.1.1 細胞株
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 PC12 細胞轉化為神經元樣細胞的培養(yǎng)、鑒定及分組
        4.2.2 Notch1-siRNA 靶點的選擇、設計及合成
        4.2.3 細胞轉染
        4.2.4 轉染效率檢測
        4.2.5 Realtime-PCR 檢測 Notch1 mRNA 表達
        4.2.6 Western blot 檢測 Notch1 蛋白表達
        4.2.7 轉染毒性檢測
        4.2.8 siRNA 最佳作用濃度的篩選
        4.2.9 siRNA 最佳作用時間的篩選
        4.2.10 統(tǒng)計學處理
    4.3 結果
        4.3.1 轉染效率檢測
        4.3.2 沉默效果檢測
        4.3.3 轉染毒性檢測
        4.3.4 Notch1-siRNA 最佳濃度的篩選
        4.3.5 Notch1-siRNA 最佳作用時間的篩選
    4.4 討論
    4.5 小結
第5章 Notch1 信號通路在神經元樣 PC12 細胞 OGD 損傷后表達變化及 Notch1-siRNA 對其影響
    5.1 材料
        5.1.1 細胞株
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 PC12 細胞轉化為神經元樣細胞的培養(yǎng)、鑒定、OGD 模型制備及分組
        5.2.2 細胞轉染
        5.2.3 Realtime-PCR 檢測 Notch1mRNA 表達
        5.2.4 Western blot 檢測 Notch1 及 NICD 蛋白表達
        5.2.5 統(tǒng)計學處理
    5.5 結果
        5.5.1 Realtime-PCR 檢測 Notch1 mRNA 表達
        5.5.2 Western blot 檢測 Notch1 及 NICD 蛋白表達
    5.6 討論
    5.7 小結
第6章 Notch1-siRNA 對神經元樣 PC12 細胞缺血性損傷的影響及機制
    6.1 材料
        6.1.1 細胞株
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器
    6.2 實驗方法
        6.2.1 PC12 細胞轉化為神經元樣細胞的培養(yǎng)、鑒定、OGD 模型制備及分組
        6.2.2 細胞轉染
        6.2.3 細胞凋亡檢測
        6.2.4 Realtime-PCR 檢測 IAP-1 和 Caspase-3 mRNA 表達
        6.2.5 Western blot 檢測 IAP-1 和 Caspase-3 蛋白表達
        6.2.6 統(tǒng)計學處理
    6.3 結果
        6.3.1 FCM 檢測細胞凋亡率
        6.3.2 Realtime-PCR 檢測 IAP-1 和 Caspase-3mRNA 表達
        6.3.3 Western-blot 檢測 IAP-1 和 Caspase-3 蛋白表達
    6.4 討論
    6.5 小結
參考文獻
結論
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
[2]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文編號：3646641