缺血性腦血管病是神經(jīng)內(nèi)科臨床最常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，缺血性腦損傷是其重要的病理及病理生理過(guò)程。近年來(lái)，細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與缺血性腦損傷與修復(fù)的機(jī)制研究已受到廣泛關(guān)注，越來(lái)越多的信號(hào)通路被發(fā)現(xiàn)可參與腦缺血損傷過(guò)程。Notch1信號(hào)通路是一個(gè)在進(jìn)化過(guò)程中高度保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。有研究表明，Notch1信號(hào)可調(diào)控動(dòng)脈生成、參與缺血腦損傷后神經(jīng)元新生過(guò)程[1]。但Notch1信號(hào)通路在缺血性腦損傷過(guò)程中的變化及其作用機(jī)制尚不清楚。本研究在體外建立腦缺血損傷模型，探討Notch1信號(hào)通路在腦缺血損傷中作用及機(jī)制，為進(jìn)一步揭示Notch1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與腦缺血損傷的聯(lián)系和內(nèi)在機(jī)制研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為腦缺血損傷的治療提供理論依據(jù)和可能的治療靶點(diǎn)。1. PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及其氧糖剝奪模型的制備目的：體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞，誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，行氧糖剝奪（OGD），建立體外腦缺血損傷模型。方法：體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞，NGF（終濃度150ng/ml）刺激誘導(dǎo)其分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，應(yīng)用無(wú)糖培養(yǎng)基及缺氧培養(yǎng)箱行OGD；應(yīng)用MTT、流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光染色法行模型評(píng)價(jià)。結(jié)果：終濃度150... 

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 綜述
    1.MAPK 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    2.JAK/STAT 信號(hào)通路
    3.PI3K/Akt 信號(hào)通路
    4.NF-κB 信號(hào)通路
    5.Rho/Rho-kinase 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    6.ActA/Smads 信號(hào)通路
    7. PKA-CREB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    8.Toll 樣受體 4 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    9.Notch 信號(hào)通路
    10.結(jié)語(yǔ)
第3章 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及氧糖剝奪模型的制備
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 PC12 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.3 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元的鑒定
        3.2.4 PC12 細(xì)胞氧糖剝奪模型（OGD）的建立
        3.2.5 PC12 細(xì)胞氧糖剝奪模型評(píng)價(jià)
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 NGF 誘導(dǎo) PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.3.2 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的的鑒定
        3.3.3 PC-12 細(xì)胞氧糖剝奪（OGD）模型的建立
        3.3.4 PC-12 細(xì)胞氧糖剝奪（OGD）模型的評(píng)價(jià)
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 靶向沉默 Notch1 基因及沉默效果檢測(cè)
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)胞株
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及分組
        4.2.2 Notch1-siRNA 靶點(diǎn)的選擇、設(shè)計(jì)及合成
        4.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.4 轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        4.2.5 Realtime-PCR 檢測(cè) Notch1 mRNA 表達(dá)
        4.2.6 Western blot 檢測(cè) Notch1 蛋白表達(dá)
        4.2.7 轉(zhuǎn)染毒性檢測(cè)
        4.2.8 siRNA 最佳作用濃度的篩選
        4.2.9 siRNA 最佳作用時(shí)間的篩選
        4.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        4.3.2 沉默效果檢測(cè)
        4.3.3 轉(zhuǎn)染毒性檢測(cè)
        4.3.4 Notch1-siRNA 最佳濃度的篩選
        4.3.5 Notch1-siRNA 最佳作用時(shí)間的篩選
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 Notch1 信號(hào)通路在神經(jīng)元樣 PC12 細(xì)胞 OGD 損傷后表達(dá)變化及 Notch1-siRNA 對(duì)其影響
    5.1 材料
        5.1.1 細(xì)胞株
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定、OGD 模型制備及分組
        5.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.2.3 Realtime-PCR 檢測(cè) Notch1mRNA 表達(dá)
        5.2.4 Western blot 檢測(cè) Notch1 及 NICD 蛋白表達(dá)
        5.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    5.5 結(jié)果
        5.5.1 Realtime-PCR 檢測(cè) Notch1 mRNA 表達(dá)
        5.5.2 Western blot 檢測(cè) Notch1 及 NICD 蛋白表達(dá)
    5.6 討論
    5.7 小結(jié)
第6章 Notch1-siRNA 對(duì)神經(jīng)元樣 PC12 細(xì)胞缺血性損傷的影響及機(jī)制
    6.1 材料
        6.1.1 細(xì)胞株
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定、OGD 模型制備及分組
        6.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        6.2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        6.2.4 Realtime-PCR 檢測(cè) IAP-1 和 Caspase-3 mRNA 表達(dá)
        6.2.5 Western blot 檢測(cè) IAP-1 和 Caspase-3 蛋白表達(dá)
        6.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 FCM 檢測(cè)細(xì)胞凋亡率
        6.3.2 Realtime-PCR 檢測(cè) IAP-1 和 Caspase-3mRNA 表達(dá)
        6.3.3 Western-blot 檢測(cè) IAP-1 和 Caspase-3 蛋白表達(dá)
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
結(jié)論
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
[2]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文編號(hào)：3646641