發(fā)布時(shí)間：2017-04-27 11:00

  本文關(guān)鍵詞：T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療小鼠腦膠質(zhì)瘤原位模型的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的原發(fā)性腦腫瘤之一,目前的主要治療手段包括手術(shù)、放療以及化療,但即使這些治療方法聯(lián)合應(yīng)用,膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后仍然較差。新興的治療方法包括免疫治療、小分子靶向藥物治療以及基因治療等,為膠質(zhì)瘤的治療提供了光明的前景。其中細(xì)胞免疫治療方法近年來(lái)不斷推陳出新,在各種生物治療中表現(xiàn)突出。1985年Rosenberg首次應(yīng)用自體淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(Lymphokine Activated Killer cells,LAK)治療黑色素瘤,自此細(xì)胞免疫治療已逐步應(yīng)用于慢性白血病、腎癌以及乳腺癌等并取得一定療效。也有研究者嘗試應(yīng)用該方法治療腦膠質(zhì)瘤,但由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫的特殊性,病人的總體生存期未見(jiàn)明顯改善,并且腦水腫等副作用也限制了其發(fā)展。近年來(lái)隨著免疫學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步及中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫概念的更新,腦膠質(zhì)瘤的細(xì)胞免疫治療迎來(lái)了新的機(jī)遇。其T淋巴細(xì)胞即胸腺依賴(lài)淋巴細(xì)胞,簡(jiǎn)稱(chēng)T細(xì)胞。來(lái)源于骨髓多能干細(xì)胞,是重要的免疫細(xì)胞。成熟的T細(xì)胞經(jīng)血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴(lài)區(qū)定居,并可經(jīng)淋巴管、外周血和組織液等進(jìn)行再循環(huán),在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,同樣發(fā)揮著重要的免疫作用。T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療近年來(lái)不斷推陳出新。本研究探討了T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療膠質(zhì)瘤的方法,即應(yīng)用GL261細(xì)胞混合抗原誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞(Dentric Cell,DC)成熟,成熟DC體外刺激并擴(kuò)增外周T細(xì)胞,將這種T細(xì)胞回輸膠質(zhì)瘤荷瘤鼠模型來(lái)治療膠質(zhì)瘤,并用驗(yàn)證其可行性和有效性,為今后細(xì)胞過(guò)繼免疫治療臨床應(yīng)用提供依據(jù)。目的:探究GL261腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞裂解物制備的抗原誘導(dǎo)的特異性T細(xì)胞對(duì)于小鼠腦膠質(zhì)瘤過(guò)繼免疫治療的可行性及有效性。方法:培養(yǎng)GL261腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞,用反復(fù)凍融法制備GL261細(xì)胞混合抗原。在無(wú)菌環(huán)境下提取健康C57BL/6小鼠骨髓單核細(xì)胞,用鼠源性粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mouse-derived Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor,m GM-CSF)、鼠源性白介素-4(mouse-derived Interleukin-4,m IL-4)體外誘導(dǎo),進(jìn)而獲取未成熟DC,將未成熟DC與抗原共孵育獲取成熟樹(shù)突狀細(xì)胞。在無(wú)菌條件下取出健康C57BL/6小鼠脾臟并剪碎,用胰酶消化成單細(xì)胞懸液并裂解紅細(xì)胞得到脾臟細(xì)胞懸液,用尼龍毛柱法分選脾臟細(xì)胞獲取T細(xì)胞。將成熟DC與T細(xì)胞共育獲取GL261膠質(zhì)瘤特異性T細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)獲取的膠質(zhì)瘤特異性T細(xì)胞的增殖情況并觀察膠質(zhì)瘤特異性T細(xì)胞的亞群變化,MTT法檢測(cè)膠質(zhì)瘤特異性T細(xì)胞對(duì)GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體外殺傷作用。用ALC-H型小鼠腦立體定向儀固定小鼠頭顱,將GL261膠質(zhì)瘤單細(xì)胞懸液注入健康C57BL/6小鼠建立GL261-C57BL/6小鼠腦膠質(zhì)瘤模型,共注射16只小鼠,隨機(jī)分成治療組和對(duì)照組,每組8只。治療組用上述膠質(zhì)瘤特異性T細(xì)胞進(jìn)行尾靜脈注射免疫治療,對(duì)照組尾靜脈注射PBS。治療結(jié)束后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠外周血中T細(xì)胞亞群變化情況,并觀察兩組的生存期。結(jié)果:①C57BL/6小鼠骨髓單核細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)6天后,CD11c+比例為(87±3.47)%,小鼠骨髓單核細(xì)胞可被成功誘導(dǎo)為未成熟DC。②未成熟DC與抗原共育18小時(shí)后,CD80、CD86表達(dá)增高(P0.05),成功獲得了成熟DC。③用成熟DC刺激T細(xì)胞,72小時(shí)后T細(xì)胞分裂指數(shù)可達(dá)0.56±0.01,而用未成熟DC刺激T細(xì)胞72小時(shí)后T細(xì)胞分裂指數(shù)僅為0.28±0.02,表明成熟DC能顯著促進(jìn)T細(xì)胞增殖(P0.05)。④未成熟DC與T細(xì)胞共育6天后,T細(xì)胞亞群發(fā)生變化:CD8a/CD4比值為0.63±0.06,而成熟DC組為2.03±0.06(P0.05)。⑤分別按效靶比為20:1、40:1、60:1的濃度梯度進(jìn)行體外殺傷實(shí)驗(yàn),隨著效靶比升高,T細(xì)胞對(duì)GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷率逐漸升高,當(dāng)效靶比分別為40:1和60:1時(shí),成熟DC誘導(dǎo)的GL261膠質(zhì)瘤特異性T細(xì)胞殺傷率分別為(40.67±1.53)%和(62.67±2.52)%,未成熟DC組分別為(22±2.65)%和(26.33±2.08)%,成熟DC誘導(dǎo)的T細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷作用顯著高于未成熟DC誘導(dǎo)的T細(xì)胞(P0.05)。⑥核磁共振能夠證實(shí)膠質(zhì)瘤原位模型接種成功。⑦T細(xì)胞治療后小鼠外周血CD8a/CD4比值可達(dá)1.02±0.28,而對(duì)照組僅為0.69±0.09(P0.05)。⑧治療組小鼠生存期較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P0.05)。結(jié)論:GL261細(xì)胞混合抗原致敏的成熟DC能夠促進(jìn)T細(xì)胞增殖并提高殺傷性T細(xì)胞的比例,膠質(zhì)瘤特異性T細(xì)胞在體內(nèi)和體外均有較強(qiáng)的殺傷膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用,T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療膠質(zhì)瘤效果顯著,有望進(jìn)一步應(yīng)用于臨床。
【關(guān)鍵詞】：T細(xì)胞 免疫治療 膠質(zhì)瘤 DC 混合抗原
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫(xiě)10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-24
• 附圖24-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述 惡性膠質(zhì)瘤的細(xì)胞過(guò)繼免疫治療研究進(jìn)展42-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 花瑋;姚瑜;周良輔;毛穎;肖保國(guó);儲(chǔ)以薇;徐鋒;朱劍虹;;干細(xì)胞樣抗原提高樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)膠質(zhì)瘤免疫治療的體外研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2009年09期

  本文關(guān)鍵詞：T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療小鼠腦膠質(zhì)瘤原位模型的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：330457