本文關(guān)鍵詞：一個(gè)多巴反應(yīng)性肌張力障礙家系基因突變篩查研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的:多巴反應(yīng)性肌張力障礙(DRD)是一種以肌張力障礙或步態(tài)異常為首發(fā)癥狀的遺傳性運(yùn)動(dòng)障礙疾病。好發(fā)于兒童或青少年,病癥具有明顯的晝間波動(dòng)性,經(jīng)小劑量多巴制劑治療后效果明顯,是一種可治療疾病。但由于DRD患者臨床癥狀復(fù)雜,易與其他疾病混淆,致使許多患者被誤診。因此,早期的診斷與治療對(duì)DRD患者意義重大。通過(guò)對(duì)DRD家系患者突變基因的鑒定有助于掌握患者的基因突變信息,深入地探討DRD臨床癥狀復(fù)雜性的遺傳基礎(chǔ)。目前關(guān)于DRD疾病的候選基因主要有3個(gè),即GCH1、TH、SPR基因,但也有相關(guān)研究報(bào)道,對(duì)DRD患者進(jìn)行3個(gè)候選基因檢測(cè)時(shí)并未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn),表明DRD患者還存在其他致病基因。隨著人類基因組測(cè)序計(jì)劃的完成及新一代測(cè)序技術(shù)的迅速發(fā)展,為探尋新的DRD致病基因提供了相關(guān)的技術(shù)方法。方法:本研究首先以1個(gè)中國(guó)DRD家系(2名患者和2名未患病家屬)為基礎(chǔ),采用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法對(duì)GCH1、TH、SPR基因進(jìn)行突變篩查研究;若未發(fā)現(xiàn)基因突變,擬采用該家系10個(gè)個(gè)體(6位患病者與4位未患病家屬)為基礎(chǔ),應(yīng)用單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)分析結(jié)合全外顯子測(cè)序技術(shù)探尋該DRD家系致病基因。結(jié)果:(1)對(duì)該家系4個(gè)個(gè)體進(jìn)行GCH1、TH、SPR基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,未發(fā)現(xiàn)致病基因;(2)將DRD家系10個(gè)個(gè)體的SNP芯片檢測(cè)數(shù)據(jù)采用生物信息學(xué)方法處理分析后共篩選出552個(gè)與人類疾病有關(guān)聯(lián)的SNP,這些SNP可能與DRD致病基因有關(guān);(3)該DRD家系中3個(gè)患病者的全外顯子測(cè)序數(shù)據(jù)通過(guò)genom-estudio軟件分析處理及后續(xù)篩選,共獲得1005個(gè)低頻位點(diǎn),這些低頻位點(diǎn)可能與DRD致病基因相關(guān);(4)將552個(gè)SNP與1005個(gè)低頻位點(diǎn)經(jīng)過(guò)關(guān)聯(lián)分析后共篩選出9個(gè)可能與DRD致病基因相關(guān)的候選基因,再經(jīng)DRD家系內(nèi)擴(kuò)增測(cè)序驗(yàn)證,初步確定了SLC18A1基因可能是該DRD家系的致病基因;此外,測(cè)序驗(yàn)證結(jié)果表明外顯子測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量可靠,準(zhǔn)確性高達(dá)96.3%。結(jié)論:(1)該DRD家系的致病基因不是GCH1、TH、SPR基因;(2)SLC18A1基因可能是該DRD家系的致病基因,需要采集此DRD家系更多樣本進(jìn)行驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：多巴反應(yīng)性肌張力障礙 單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)分析 全外顯子測(cè)序技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R746
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstact6-13
• 第一章 緒論13-25
• 1.1 多巴反應(yīng)性肌張力障礙疾病研究13-17
• 1.1.1 DRD分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展13-15
• 1.1.2 多巴反應(yīng)性肌張力障礙的發(fā)病機(jī)制15-16
• 1.1.3 多巴反應(yīng)性肌張力障礙的臨床表現(xiàn)及診斷16-17
• 1.2 基因芯片技術(shù)與單核苷酸多態(tài)性分析17-21
• 1.2.1 基因芯片技術(shù)研究進(jìn)展17-18
• 1.2.2 單核苷酸多態(tài)性分析研究18-19
• 1.2.3 基因芯片與SNP檢測(cè)技術(shù)19-21
• 1.3 全外顯子測(cè)序技術(shù)21-22
• 1.3.1 全外顯子測(cè)序研究進(jìn)展21
• 1.3.2 全外顯子測(cè)序技術(shù)研究進(jìn)展21-22
• 1.4 研究?jī)?nèi)容及意義22-25
• 第二章 多巴反應(yīng)性肌張力障礙疾病的GCH1、TH、SPR基因突變研究25-41
• 2.1 引言25-27
• 2.1.1 DRD致病基因的研究進(jìn)展25-26
• 2.1.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)簡(jiǎn)介26-27
• 2.2 研究對(duì)象27-28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)材料與儀器28-29
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備28
• 2.3.2 主要試劑和耗材28-29
• 2.3.3 主要試劑的配制29
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法與過(guò)程29-37
• 2.4.1 血液樣品采集29
• 2.4.2 全基因組DNA提取29-31
• 2.4.3 基因組DNA樣本質(zhì)量檢測(cè)31
• 2.4.4 引物設(shè)計(jì)31-34
• 2.4.5 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)34-36
• 2.4.6 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)36-37
• 2.4.7 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序及結(jié)果分析37
• 2.5 結(jié)果與分析37-40
• 2.5.1 全基因組DNA提取結(jié)果37-38
• 2.5.2 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果38-39
• 2.5.3 測(cè)序分析結(jié)果39
• 2.5.4 結(jié)果與討論39-40
• 2.6 本章小結(jié)40-41
• 第三章 應(yīng)用單核苷酸多態(tài)性芯片對(duì)DRD家系基因突變的研究41-52
• 3.1 引言41-43
• 3.1.1 Illumina Human Zhonghua-8 Bead-Chips簡(jiǎn)述41-42
• 3.1.2 生物信息學(xué)簡(jiǎn)述42-43
• 3.2 研究對(duì)象43-44
• 3.3 實(shí)驗(yàn)材料與儀器44-45
• 3.3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備44
• 3.3.2 主要試劑和耗材44-45
• 3.4 實(shí)驗(yàn)流程及分析方法45-47
• 3.4.1 芯片檢測(cè)的前期樣本準(zhǔn)備45
• 3.4.2 中華 8 SNP分型實(shí)驗(yàn)流程45-46
• 3.4.3 SNP分型數(shù)據(jù)分析方法46-47
• 3.5 結(jié)果與分析47-51
• 3.5.1 DNA樣本質(zhì)檢結(jié)果47-48
• 3.5.2 SNP芯片檢測(cè)結(jié)果與分析48-49
• 3.5.3 SNP分型數(shù)據(jù)分析結(jié)果49-51
• 3.6 本章小結(jié)51-52
• 第四章 應(yīng)用全外顯子測(cè)序技術(shù)對(duì)DRD家系基因突變研究52-64
• 4.1 引言52-55
• 4.1.1 高通量測(cè)序技術(shù)簡(jiǎn)述52
• 4.1.2 Illumina Hiseq2500 系統(tǒng)簡(jiǎn)介52-55
• 4.2 研究對(duì)象55
• 4.3 實(shí)驗(yàn)材料與儀器55
• 4.3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備55
• 4.3.2 主要試劑和耗材55
• 4.4 實(shí)驗(yàn)流程及分析方法55-58
• 4.4.1 前期樣本準(zhǔn)備55-56
• 4.4.2 外顯子測(cè)序流程及分析方法56-57
• 4.4.3 測(cè)序結(jié)果篩選方法57-58
• 4.5 結(jié)果與分析58-63
• 4.5.1 外顯子測(cè)序基因組樣本質(zhì)檢結(jié)果58
• 4.5.2 文庫(kù)構(gòu)建質(zhì)檢結(jié)果58-59
• 4.5.3 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)控結(jié)果59-60
• 4.5.4 序列比對(duì)結(jié)果60-61
• 4.5.5 測(cè)序數(shù)據(jù)分析結(jié)果61-62
• 4.5.6 測(cè)序數(shù)據(jù)篩選結(jié)果62-63
• 4.6 本章小結(jié)63-64
• 第五章 候選SNP與DRD疾病的關(guān)聯(lián)性研究64-76
• 5.1 研究對(duì)象64
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器64-65
• 5.2.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備64
• 5.2.2 主要試劑和耗材64-65
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法與過(guò)程65-68
• 5.3.1 DRD家系的候選SNP篩查65
• 5.3.2 血液樣品采集65
• 5.3.3 全基因組DNA提取65
• 5.3.4 引物設(shè)計(jì)及合成65-66
• 5.3.5 PCR擴(kuò)增反應(yīng)66-67
• 5.3.6 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)67
• 5.3.7 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序及結(jié)果分析67
• 5.3.8 SNP位點(diǎn)相關(guān)基因的功能性分析67-68
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析68-75
• 5.4.1 候選SNP篩查結(jié)果68
• 5.4.2 候選SNP引物設(shè)計(jì)結(jié)果68-69
• 5.4.3 個(gè)體基因組PCR擴(kuò)增的電泳檢測(cè)結(jié)果69-70
• 5.4.4 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果及分析70-72
• 5.4.5 候選SNP突變位點(diǎn)的測(cè)序驗(yàn)證結(jié)果72-73
• 5.4.6 候選SNP驗(yàn)證結(jié)果與分析73-74
• 5.4.7 SNP176 相關(guān)基因的功能性分析結(jié)果74-75
• 5.5 本章小結(jié)75-76
• 結(jié)論與展望76-78
• 結(jié)論76
• 本研究創(chuàng)新性評(píng)價(jià)76
• 展望76-78
• 參考文獻(xiàn)78-87
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果87-88
• 致謝88-89
• 附件89

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：一個(gè)多巴反應(yīng)性肌張力障礙家系基因突變篩查研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：315830