目的:觀察HER2基因是否通過PI3K/AKT信號通路影響惡性腦膜瘤細胞的增殖、遷移。方法:1、經病毒感染分別將沉默和過表達HER2基因質粒轉染至惡性腦膜瘤IOMM-Lee細胞株中。實驗分為五組:第一組:空白組（Blank）;第二組:沉默陰性對照組（NC-sh）;第三組:沉默HER2基因組（HER2-sh）;第四組:過表達陰性對照組（NC-ox）;第五組:過表達HER2基因組（HER2-ox）。應用q-PCR和Werstern blot檢測各組細胞HER2 m RNA和蛋白表達水平。2、CCK8法檢測各組細胞的生長增殖情況;Transwell小室遷移法檢測各組細胞遷移能力;流式細胞術檢測各組細胞周期變化。3、Western blot檢測各組細胞HER2、PI3K、AKT、P-AKT、m TOR、P-m TOR、S6、P-S6、NF-κB、Cyclin D1、VEGF蛋白的表達。4、用PI3K抑制劑LY294002、m TOR抑制劑KU0063794不同濃度（終濃度為20、60、100、5、10、20μmol/L）的培養(yǎng)液24、48、72h后,CCK8、Transwell小室遷移實驗檢測... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數】：91 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒轉染惡性腦膜瘤細胞MOI值的確定及轉染率的測定

圖 2-2: q-PCR 檢測 HER2 mRNA 的表達水平。轉染后 72h，沉默組細 H平(*P<0.05)；過表組細胞 HER2 mRNA 表達水平(*P<0.05)。2.2.5 Western blot 檢測各組細胞 HER2 蛋白的表達情況6 孔板接種各組細胞（細胞數 1.5×105個），轉染后 96 小時白，Western blot 結果示：沉默 HER2-sh 組與 NC-sh 組比較，HER2 蛋白都下降 65.76%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HE比較，HER2-ox 組的 HER2 蛋白表達水平升高，約為 NC-ox 組有統(tǒng)計學意義（P<0.01）（圖 2-3）。沉默和過表達 HER2 惡性白水平達到分組要求，能繼續(xù)進行后期實驗。

圖 2-2: q-PCR 檢測 HER2 mRNA 的表達水平。轉染后 72h，沉默組細 HER2 mRNA 表達平(*P<0.05)；過表組細胞 HER2 mRNA 表達水平(*P<0.05)。2.2.5 Western blot 檢測各組細胞 HER2 蛋白的表達情況6 孔板接種各組細胞（細胞數 1.5×105個），轉染后 96 小時提取各組細胞白，Western blot 結果示：沉默 HER2-sh 組與 NC-sh 組比較，HER2-sh 的細HER2 蛋白都下降 65.76%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HER-ox 與 NC-ox比較，HER2-ox 組的 HER2 蛋白表達水平升高，約為 NC-ox 組的 5.95 倍，差有統(tǒng)計學意義（P<0.01）（圖 2-3）。沉默和過表達 HER2 惡性腦膜瘤細胞在白水平達到分組要求，能繼續(xù)進行后期實驗。


本文編號：2965724