本文關(guān)鍵詞：NLRP3炎性小體在大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型中的表達(dá)及作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status epilepticus,SE)是醫(yī)學(xué)上的危急重癥之一,可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)急性和持久性損害,尤其是海馬等邊緣系統(tǒng)神經(jīng)元的損傷。研究證實,腦部炎癥能夠增加神經(jīng)元興奮性,降低癲癇發(fā)作閾值,而且很可能參與癲癇發(fā)作的分子,結(jié)構(gòu)和突觸的變化。NLRP3炎性小體的激活能夠引起炎性因子IL-1β、IL-18的成熟及釋放,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)固有免疫中發(fā)揮重要作用。但它在癲癇的發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用,至今未見報道。方法我們通過杏仁核點燃制作SD大鼠SE模型,檢測大鼠海馬IL-1β,Caspase-1和NLRP3的動態(tài)表達(dá),并觀察NLRP3在海馬小膠質(zhì)細(xì)胞中是否表達(dá)。為進(jìn)一步驗證NLRP3炎性小體的激活是否能夠引起SE相關(guān)的神經(jīng)損害,我們經(jīng)第三腦室內(nèi)分別泵入人工腦脊液,control si RNA,NLRP3 si RNA,或Caspase-1 si RNA預(yù)處理后,觀察相應(yīng)的SE大鼠海馬IL-1β,IL-18和Caspase-1表達(dá)變化,海馬神經(jīng)元死亡存活情況以及自發(fā)性反復(fù)發(fā)作的改變。結(jié)果與對照組相比,IL-1β和NLRP3炎性小體組分的表達(dá)水平在SE誘發(fā)成功后的3小時開始上升,并在12小時達(dá)到高峰。敲除NLRP3或Caspase-1基因能夠使IL-1β和IL-18在SE誘發(fā)成功后12小時的高峰表達(dá)水平得到下調(diào),能夠明顯延緩癲癇發(fā)生并減弱癲癇自發(fā)性反復(fù)發(fā)作的嚴(yán)重程度。另外,敲除NLRP3或Caspase-1基因能夠顯著減少SE大鼠誘發(fā)成功后6周的海馬CA1和CA3區(qū)的神經(jīng)元死亡。結(jié)論本研究首次證實NLRP3炎性小體在大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型中的海馬表達(dá)上調(diào),并且進(jìn)一步驗證敲除NLRP3炎性小體后對SE大鼠有神經(jīng)保護(hù)作用。NLRP3炎性小體有可能成為潛在的新的癲癇發(fā)作治療的靶點。
【關(guān)鍵詞】：NLRP3 炎性小體 癲癇持續(xù)狀態(tài) 細(xì)胞因子 IL-1β
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1;R-332
【目錄】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-6
• 引言6-7
• 第一章 材料與方法7-14
• 1.1 實驗動物7
• 1.2 主要儀器、試劑和抗體7-9
• 1.2.1 主要儀器7
• 1.2.2 主要試劑7-8
• 1.2.3 主要抗體8
• 1.2.4 常用液體的配制8-9
• 1.3 實驗方法9-13
• 1.3.1 RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)敲除大鼠NLRP3及caspase-19
• 1.3.2 大鼠杏仁核電刺激SE模型的制備9-10
• 1.3.3 SRS的視頻監(jiān)測10
• 1.3.4 腦組織樣本準(zhǔn)備10
• 1.3.5 免疫蛋白印記( Western blot) 檢測海馬內(nèi)蛋白表達(dá)10-11
• 1.3.6 RT-PCR檢測大鼠海馬的NLＲP3和caspase-1 的mRNA水平11
• 1.3.7 ELISA法檢測癲癇大鼠海馬組織中IL-1β和IL-18的含量11-12
• 1.3.8 海馬神經(jīng)元細(xì)胞尼氏染色法12
• 1.3.9 海馬神經(jīng)元細(xì)胞TUNEL染色法12
• 1.3.10 免疫熒光12
• 1.3.11 動物分組12-13
• 1.4 統(tǒng)計學(xué)處理13-14
• 第二章 結(jié)果14-22
• 2.1 SE大鼠海馬組織Cleaved IL-1β, NLRP3和cleaved caspase-1 等蛋白表達(dá)升高14-15
• 2.2 運用非病毒RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)敲除NLRP3基因降低SE大鼠海馬組織的炎癥細(xì)胞因子和cleaved caspase-1 的表達(dá)15-17
• 2.3 運用非病毒RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)敲除NLRP3基因緩解大鼠SE后自發(fā)性反復(fù)發(fā)作的發(fā)展和嚴(yán)重程度17-18
• 2.4 運用非病毒RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)敲除NLRP3基因減少海馬神經(jīng)元的丟失18-20
• 2.5 運用非病毒RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)敲除caspase-1 基因緩解神經(jīng)炎癥，SE后自發(fā)性反復(fù)發(fā)作和海馬神經(jīng)元丟失20-22
• 第三章 討論22-24
• 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 綜述28-35
• 綜述的參考文獻(xiàn)32-35
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果35-37
• 致謝37-38

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本文編號：290577