本文關(guān)鍵詞：PAK1在豆紋動脈血管內(nèi)皮損傷及高血壓腦出血中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：當(dāng)前,出血性腦卒中是全球致死和致殘率最高的心腦血管疾病。在我國,每年有超過200萬的新發(fā)病例,死亡率高達(dá)50%左右,幸存者多伴有嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙,給患者家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和壓力。研究發(fā)現(xiàn),國人的腦出血主要表現(xiàn)為高血壓性腦出血,其中80%發(fā)生在丘腦基底節(jié)區(qū),常由豆紋動脈破裂導(dǎo)致。遺憾的是,盡管國內(nèi)外學(xué)者在高血壓誘導(dǎo)的出血性腦卒中發(fā)生發(fā)展機(jī)制及其防治方面做了大量深入的研究,并在血管內(nèi)皮細(xì)胞的力學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、血管損傷等過程的研究中獲得重要進(jìn)展,然而有關(guān)高血壓腦豆紋動脈損傷及其破裂出血的機(jī)理問題仍不清楚。已有研究表明,PAK1(p21-activated kinase1,PAK1)過表達(dá)嚴(yán)重影響了斑馬魚胚胎早期血管的發(fā)育,并導(dǎo)致腦出血的發(fā)生。此外,有研究發(fā)現(xiàn)PAK1可調(diào)控E-cadherin在細(xì)胞內(nèi)的分布,進(jìn)而影響細(xì)胞間的連接。這些研究提示,PAK1可能與血管內(nèi)皮完整性的調(diào)控以及腦出血密切相關(guān)。為了深入了解和認(rèn)識高血壓腦豆紋動脈出血的發(fā)生機(jī)制,為臨床高血壓腦出血的防治提供新的策略,本文以血管內(nèi)皮細(xì)胞為研究對象,對PAK1是否參與豆紋動脈血管內(nèi)皮滲透性以及高血壓腦出血的調(diào)控等問題進(jìn)行了初步的探索。本論文的具體研究工作和結(jié)論如下:目的本文的主要研究目的是初步探討豆紋動脈破裂是否與血管內(nèi)皮細(xì)胞中PAK1高表達(dá)相關(guān);初步探明高鹽是否誘導(dǎo)血管內(nèi)皮PAK1表達(dá)升高,并促進(jìn)高血壓環(huán)境下血管內(nèi)皮滲透性增加,進(jìn)而可能導(dǎo)致瞬時異常高壓血流下的血管破裂。方法采用Real-Time PCR、Western Blot、免疫熒光等方法,對不同鹽濃度處理的內(nèi)皮細(xì)胞PAK1基因和蛋白表達(dá)情況進(jìn)行量化分析;同時,采用FITC-Dextran通透性方法檢測PAK1抑制劑處理后,內(nèi)皮細(xì)胞通透性的變化。在高鹽喂食的自發(fā)性高血壓鼠(SHR)中,采用免疫組化法檢測腦豆紋動脈區(qū)域血管內(nèi)皮細(xì)胞PAK1表達(dá)的情況,并用核磁共振掃描(MRI)、HE染色等技術(shù)檢測SHR大腦豆紋動脈血管通透性和腦出血的情況。結(jié)果1)高鹽處理后,內(nèi)皮細(xì)胞PAK1基因和蛋白的表達(dá)升高;2)加入PAK1抑制劑IPA-3后,高鹽壓處理的內(nèi)皮細(xì)胞通透性降低;3)高鹽喂食SHR后,豆紋動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞PAK1的表達(dá)升高;4)高鹽喂食SHR后,豆紋動脈血管通透性增加并部分SHR發(fā)生腦出血。本文的研究結(jié)果初步揭示高鹽參與了高血壓血管內(nèi)皮細(xì)胞PAK1的表達(dá)調(diào)控,且對PAK1的表達(dá)有增強(qiáng)作用,并提示PAK1可能通過參與調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的通透性等途徑,進(jìn)而參與高血壓腦出血的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：PAK1 腦出血 豆紋動脈 內(nèi)皮細(xì)胞 高血壓
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1;R743.34
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 1 緒論11-21
• 1.1 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀11-17
• 1.1.1 高血壓腦出血及其危險因素11-12
• 1.1.2 高鹽對心腦血管疾病及高血壓腦出血的影響12-13
• 1.1.3 PAK1在腦出血等相關(guān)疾病調(diào)控中的作用13-15
• 1.1.4 高鹽對內(nèi)皮細(xì)胞等生物學(xué)行為的影響15-17
• 1.2 問題的提出與研究意義17-18
• 1.3 本文的研究目的和主要研究內(nèi)容18
• 1.3.1 研究目的18
• 1.3.2 主要研究內(nèi)容18
• 1.4 本文的特色與創(chuàng)新之處18-20
• 1.5 技術(shù)路線20-21
• 2 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）原代培養(yǎng)及鑒定21-31
• 2.1 引言21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料21-23
• 2.2.1 內(nèi)皮細(xì)胞21
• 2.2.2 主要儀器設(shè)備及耗材21-22
• 2.2.3 主要試劑及配制方法22-23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-26
• 2.3.1 內(nèi)皮細(xì)胞的體外分離與原代培養(yǎng)23-25
• 2.3.2 內(nèi)皮細(xì)胞鑒定25-26
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 2.4.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）的培養(yǎng)26-27
• 2.4.2 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）的鑒定27-28
• 2.5 討論28-29
• 2.6 小結(jié)29-31
• 3 高鹽對血管內(nèi)皮細(xì)胞PAK1表達(dá)的影響31-51
• 3.1 引言31
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料31-35
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞31
• 3.2.2 主要儀器設(shè)備及耗材31-32
• 3.2.3 相關(guān)主要試劑以及配置方法32-35
• 3.3 相關(guān)試驗(yàn)方法35-44
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)35
• 3.3.2 高鹽處理35-36
• 3.3.3 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄36-38
• 3.3.4 PAK1基因表達(dá)的Real-time PCR檢測38-39
• 3.3.5 PAK1蛋白表達(dá)的Western blot和免疫熒光檢測39-42
• 3.3.6 內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2、MMP-9 表達(dá)的酶譜檢測42-43
• 3.3.7 內(nèi)皮細(xì)胞通透性檢測43-44
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-47
• 3.4.1 高鹽處理對內(nèi)皮細(xì)胞PAK1基因和蛋白水平表達(dá)的影響44-45
• 3.4.2 高鹽處理對內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2 和MMP-9 表達(dá)和活性的影響45-46
• 3.4.4 高鹽處理對內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響46-47
• 3.5 討論47-48
• 3.6 本章小結(jié)48-51
• 4 高鹽對SHR腦豆紋動脈內(nèi)皮細(xì)胞PAK1表達(dá)及血管滲透性的影響51-67
• 4.1 引言51
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料51-53
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動物51
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備51-52
• 4.2.3 相關(guān)主要試劑以及配置方法52-53
• 4.3 相關(guān)試驗(yàn)方法53-59
• 4.3.1 自發(fā)性高血壓鼠（SHR）飼養(yǎng)53-54
• 4.3.2 自發(fā)性高血壓鼠（SHR）血壓、心率、血液生理生化指標(biāo)的檢測54-55
• 4.3.3 SHR鼠心臟灌注和摘取腦組織55-56
• 4.3.4 SHR腦豆紋動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞PAK1表達(dá)的免疫組織化學(xué)染色法檢測56-57
• 4.3.5 SHR腦豆紋動脈血管通透性及出血的檢測57-59
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-65
• 4.4.1 高鹽對SHR血壓、心率、血液生理生化指標(biāo)的影響59-61
• 4.4.2 高鹽對SHR腦豆紋動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞PAK1表達(dá)的影響61-63
• 4.4.4 高鹽對SHR腦豆紋動脈血管通透性及出血的影響63-65
• 4.5 討論65
• 4.6 小結(jié)65-67
• 5 結(jié)論與展望67-69
• 5.1 本文研究的主要結(jié)論67
• 5.2 后續(xù)工作及展望67-69
• 致謝69-71
• 參考文獻(xiàn)71-79
• 附錄79
• A. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目情況79

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