發(fā)布時間：2017-09-21 18:10

  本文關(guān)鍵詞：TRAIL在重癥大皰型藥疹角質(zhì)形成細胞凋亡中作用的研究

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【摘要】：背景：角質(zhì)形成細胞的凋亡是重癥大皰型藥疹(SBDE,包括SJS(史蒂文斯-約翰遜綜合征)和TEN(中毒性表皮壞死松解癥))早期關(guān)鍵事件。其免疫機制涉及CD8+T細胞、NK細胞、單核細胞等參與的細胞毒作用；而TNF-α、sFasL、granulysin(顆粒溶素)等細胞因子參與了凋亡作用的放大,現(xiàn)認為后者的作用可能更為重要。TRAIL(腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體)及其受體DR(死亡受體)4、DR5現(xiàn)認為是死亡受體相關(guān)凋亡中一條重要的通路,但在本病中研究較少,對其深入研究有助于闡明重癥大皰型藥疹發(fā)病的免疫機制。目的：從皮膚組織、皰液及外周血三個層面,研究角質(zhì)形成細胞TRAIL及其受體的表達、皰液中細胞及外周血單個核細胞(PBMC) TRAIL的表達；分析sTRAIL(可溶性TRAIL)及本病中其他凋亡相關(guān)的細胞因子IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在皰液及外周血中的濃度；并在HaCaT細胞中參照上述細胞因子濃度研究其對sTRAIL誘導(dǎo)角質(zhì)形成細胞凋亡的影響,以期探索SBDE發(fā)病機制。方法：1.免疫組化檢測SJS/TEN中的角質(zhì)形成細胞TRAIL及DR4、DR5的表達。2.Western-Blot和RT-PCR檢測SJS/TEN患者皰液中細胞TRAIL的表達(蛋白和mRNA);用流式細胞儀分析皰液中細胞表型,并與TRAIL的表達進行相關(guān)性分析。3. Western-Blot和RT-PCR檢測SJS/TEN患者PBMC巾TRAIL的表達,并與皰液中細胞比較。4.ELISA檢測皰液中的細胞因子sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin濃度并與外周血比較。5.培養(yǎng)HaCaT細胞。流式細胞儀AnnexinV-FITC/PI法檢測sTRAIL單獨及與IFN-γ、 TNF-α、sFasL、granulysin分別組合后的誘導(dǎo)HaCaT細胞凋亡作用,并進行比較。6.通過細胞爬片及免疫組化,分析上述細胞因子對HaCaT細胞TRAIL 及 RD4、DR5表達的影響。結(jié)果：1.在20例SJS/TEN皮膚組織中發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細胞高表達TRAIL及DR4、DR5,并且在浸潤的炎癥細胞中也有表達,較10例發(fā)疹型藥疹對照有顯著差異。2.在10例SJS/TEN皰液中細胞檢測到TRAIL 的高表達(蛋白和 mRNA),較9例對照(白癜風(fēng)表皮移植患者供皮區(qū)大皰)有顯著差異,但表達有逐漸下降的趨勢；同時皰液中CD8+T細胞、NK細胞比例下降而CD14+細胞增多,經(jīng)多重回歸分析發(fā)現(xiàn)TRAIL表達主要與CD8+T細胞有關(guān)。3.在15例SJS/TEN PBMC檢測到TRAIL的表達低于皰液中細胞,但高于10例正常人及發(fā)疹型藥疹PBMC對照,且表達相對皰液中細胞穩(wěn)定。4. sTRAIL、IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin在SJS/TEN皰液中濃度高于外周血濃度,后者也高于10例正常人及發(fā)疹型藥疹血清對照。但sTRAIL、IFN-γ、TNF-α濃度相對穩(wěn)定而sFasL、granulysin濃度下降很快。5. HaCaT細胞實驗發(fā)現(xiàn)sTRAIL單獨對HaCaT細胞凋亡作用弱。僅TNF-α在皰液中濃度情況下表現(xiàn)出較強的誘導(dǎo)凋亡作用。但IFN-γ、TNF-α 與 sTRAIL存在協(xié)同作用而sFasL、granulysin無相關(guān)性,IFN-γ表現(xiàn)更為明顯。6. IFN-γ、TNF-α可上調(diào)HaCaT細胞TRAIL及DR4、DR5的表達,IFN-γ上調(diào)DR5表達的作用更明顯。結(jié)論：我們在SJS/TEN皮膚組織、皰液及外周血中均發(fā)現(xiàn)TRAIL的活化。PBMC中高表達TRAIL,血清sTRAIL的濃度也升高,意味著TRAIL也參與了本病的全身反應(yīng)；而趨化至SJS/TEN皮膚組織的皰液細胞,尤其是早期的CD8+T細胞,TRAIL表達增強,可能通過直接結(jié)合或以高濃度的sTRAIL來誘導(dǎo)高表達DR4、DR5的角質(zhì)形成細胞凋亡；角質(zhì)形成細胞同時高表達TRAIL及DR4、DR5表明其在本病中不是單純的“受害者”；通過HaCaT細胞實驗發(fā)現(xiàn),這種現(xiàn)象可能與IFN-γ、TNF-α的作用有關(guān),且這兩種細胞因子與sTRAIL協(xié)同可增強誘導(dǎo)凋亡的效果。因此,我們認為TRAIL與本病角質(zhì)形成細胞凋亡有重要的聯(lián)系,這也是發(fā)生在本病免疫紊亂的背景上的,是眾多復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)式的角質(zhì)形成細胞凋亡機制之一。但在本病中藥物如何引起包括TRAIL在內(nèi)的免疫紊亂,以及TRAIL等死亡受體相關(guān)配體誘導(dǎo)角質(zhì)形成細胞凋亡的確切機制還需要進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 重癥大皰型藥疹 角質(zhì)形成細胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R758.25
【目錄】：

• 英文縮寫介紹4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-17
• 參考文獻14-17
• 第一部分 TRAIL在SJS/TEN患者皮膚組織、皰液中細胞、外周血單個核細胞的表達及sTRAIL和相關(guān)細胞因子在皰液和外周血中濃度的檢測17-62
• 分題一 TRAIL在SJS/TEN患者皮膚組織中的表達17-26
• 參考文獻25-26
• 分題二 不同時間段SJS/TEN皰液中細胞TRAIL的表達及細胞表型的分析26-48
• 參考文獻46-48
• 分題三 SJS/TEN患者外周血單個核細胞TRAIL的表達及與皰液中細胞表達的比較48-54
• 參考文獻53-54
• 分題四 SJS/TEN患者皰液及血清中細胞因子sTRAIL、TNF-α、sFasL、granulysin、IFN-γ的檢測及比較54-62
• 參考文獻61-62
• 第二部分 sTRAIL單獨及與聯(lián)合TNF-α、sFasL、granulysin、IFN-γ對HaCaT細胞凋亡的作用及上述四種細胞因子對HaCaT細胞TRAIL、DR4、DR5表達的作用62-81
• 分題一 sTRAIL單獨對HaCaT細胞凋亡的作用62-68
• 參考文獻66-68
• 分題二 TNF-α、sFasL、granulysin、IFN-γ誘導(dǎo)HaCaT細胞凋亡及與sTRAIL協(xié)同作用68-73
• 參考文獻72-73
• 分題三 IFN-γ、TNF-α、sFasL、granulysin對HaCaT細胞的TRAIL、DR4、DR5表達的作用73-81
• 參考文獻80-81
• 全文小結(jié)81-82
• 本文局限性及不足82-83
• 致謝83-84
• 綜述 SJS/TEN中角質(zhì)形成細胞死亡機制的研究進展84-93
• 參考文獻88-93
• 已發(fā)表論著93-112
• 重癥大皰性藥疹發(fā)病免疫機制及免疫治療的研究進展93-99
• Combination therapy of intravenous immunoglobulin and corticosteroid in thetreatment of toxic epidermal necrolysis and Stevens-Johnson syndrome:aretrospective comparative study in China99-108
• SCORTEN評估華山醫(yī)院重癥大皰性藥疹的可行性分析108-112

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Chávez-Galán L;Arenas-Del Angel MC;Zenteno E;Chávez R;Lascurain R;;Cell Death Mechanisms Induced by Cytotoxic Lymphocytes[J];Cellular & Molecular Immunology;2009年01期

2 王貞麗;李金蓮;王春波;;腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體及扇貝多肽在UVA誘導(dǎo)HaCaT細胞凋亡中的作用[J];中國藥理學(xué)通報;2007年10期

3 楊紹杰;孟金萍;屈yN;劉云波;;細胞凋亡信號傳導(dǎo)通路的研究進展[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2007年05期

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本文編號：896078