本文關(guān)鍵詞：5-氮雜胞苷和曲古抑菌素A對(duì)HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3表達(dá)的影響

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【摘要】：背景：光老化指皮膚由于反復(fù)光暴露引起的提前老化,其特征性組織學(xué)變化是彈性組織變性物質(zhì)的沉積和膠原的嗜堿性變性,伴有Ⅰ型和Ⅲ型前膠原的降解。雖然其發(fā)生機(jī)制尚未完全明了,但是基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases, MMPs)增高導(dǎo)致纖維結(jié)締組織的降解是引起皮膚光老化最重要的機(jī)制。在皮膚光老化的發(fā)生發(fā)展以及當(dāng)前的諸多研究中,認(rèn)為最重要的是基質(zhì)金屬蛋白酶是MMP-1和MMP-3,也是目前的研究熱點(diǎn)。 目的： (1)探討HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)是否受DNA甲基化的調(diào)控； (2)探討HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)是否受組蛋白乙�；恼{(diào)控； (3)探討HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)是否受DNA甲基化和組蛋白乙�；瘏f(xié)同作用的調(diào)控,為進(jìn)一步研究皮膚光老化的表觀遺傳學(xué)機(jī)制,提供理論依據(jù)。 方法： (1)體外常規(guī)培養(yǎng)人角質(zhì)形成細(xì)胞株(HaCaT細(xì)胞)； (2)用5-氮雜胞苷(5-azaC)(1μmol/L)或/和曲古抑菌素A(TSA)(1μmol/L)處理HaCaT細(xì)胞；分為：5-azaC處理組、TSA處理組和5-azaC聯(lián)合TSA處理組,分別作用于HaCaT細(xì)胞0h、24h、48h、72h后提取上清和mRNA; (3)用Real-tinme PCR和ELISA方法分別從mRNA及蛋白的水平檢測(cè)不同藥物處理組HaCaT細(xì)胞中MMP-1/3基因的表達(dá)。 結(jié)果： (1)用5-azaC(1μmol/L)處理HaCaT細(xì)胞24h、48h、72h后,與Oh(空白對(duì)照組)作比較,HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3mRNA水平和蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.05)； (2)用TSA(1μmol/L)處理HaCaT細(xì)胞24h、48h、72h后,與0h(空白對(duì)照組)作比較,HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3mRNA水平和蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.05)： (3)用5-azaC (1μmol/L)聯(lián)合TSA (1μmol/L)處理24h、48h、72h后,與Oh(空白對(duì)照組)作比較,HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3mRNA水平和蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.05)；且與單用5-azaC或TSA處理后的不同時(shí)間點(diǎn)比較,24h、48h、72h的HaCaT細(xì)胞MMP-1、MMP-3mRNA水平和蛋白表達(dá)均較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： (1) HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)受DNA甲基化和組蛋白乙�；恼{(diào)控： (2)DNA甲基化和組蛋白乙�；瘜�(duì)HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)具有協(xié)同作用。 圖15幅,表7個(gè),參考文獻(xiàn)35篇。
【關(guān)鍵詞】：HaCaT細(xì)胞 基質(zhì)金屬蛋白-1 基質(zhì)金屬蛋白-3 5-氮雜胞苷 曲古抑菌素A
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R758.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-10
• 1 前言10-13
• 2 材料與方法13-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株13
• 2.1.2 主要試劑及試劑盒13
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備13-14
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)中所用的培養(yǎng)基及試劑配制14-16
• 2.2 方法16-22
• 2.2.1 HaCaT細(xì)胞復(fù)蘇16
• 2.2.2 細(xì)胞傳代16
• 2.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)16
• 2.2.4 細(xì)胞凍存16-17
• 2.2.5 目的細(xì)胞種板17
• 2.2.6 藥物處理及分組17
• 2.2.7 細(xì)胞總RNA提取及Real time PCR檢測(cè)17-19
• 2.2.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)MMP-1及MMP-319-21
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析21-22
• 3 結(jié)果22-35
• 3.1 觀察HaCaT細(xì)胞在不同藥物處理組作用下細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)22-24
• 3.2 5-azaC處理組、TSA處理組、5-azaC聯(lián)合TSA處理組分別作用于HaCaT細(xì)胞0h、24h、48h、72h時(shí)提取mRNA,用Real-time PCR檢測(cè)HaCaT細(xì)胞MMP1和MMP3mRNA表達(dá)水平24-30
• 3.3 5-azaC處理組-、TSA處理組、5azaC聯(lián)合TSA處理組分別作用于HaCaT細(xì)胞0h、24h、48h、72hT提取上清，，用ELISA檢測(cè)HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3蛋白表達(dá)水平30-35
• 4 討論35-39
• 5 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述143-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 綜述249-56
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 攻讀學(xué)位期間的主要成績(jī)56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王s

本文編號(hào)：896038