發(fā)布時(shí)間：2017-09-20 20:33

  本文關(guān)鍵詞：甲真菌病致病菌毒力因子的體外研究

  更多相關(guān)文章： 皮膚癬菌病 紅色毛癬菌 甲真菌病模型 生長(zhǎng)曲線 角蛋白酶

【摘要】：研究背景 甲真菌病是目前甲病中最常見的疾患，占甲病的50%以上。重要致病菌為皮膚癬菌、酵母菌和非皮膚癬菌類菌。甲真菌病的發(fā)病率近年一直在增加，誘發(fā)因素有如潮濕的環(huán)境、鞋襪不透氣、反復(fù)的甲損傷、慢性疾病如糖尿病、外周血管障礙性疾病、HIV感染，還有其他的免疫抑制狀態(tài)這些易感因素都可能誘發(fā)甲真菌病。甲真菌病的發(fā)病率隨著年齡的增長(zhǎng)而增加，近30%的患者為60歲的老年人。近年兒童的發(fā)病率也有報(bào)道。 甲真菌病的研究一直是皮膚真菌學(xué)研究的重點(diǎn)之一，現(xiàn)階段甲真菌病的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵殉蔀榱搜芯吭摬〉囊粋�(gè)可靠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，最適宜的研究對(duì)象無疑是人甲，但是由于需要符合的人甲很難獲得，所以豬甲板和牛甲板是甲真菌病最為理想的動(dòng)物模型。建立一個(gè)科學(xué)、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單的體外甲真菌病模型對(duì)于探討不同真菌引起甲感染的發(fā)病機(jī)理及評(píng)估藥物治療甲病療效具有重要意義。 引起甲真菌病最主要的致病菌為皮膚癬菌，皮膚癬菌引起的感染遍布全世界，在全球被認(rèn)為是一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。紅色毛癬菌屬于皮膚癬菌屬的毛癬菌屬，是分布最廣泛的親人性皮膚癬菌，占人類所有皮膚癬菌病的69.5%，親人性的紅色毛癬菌是臨床上最重要的致病菌。紅色毛癬菌最容易侵犯人和動(dòng)物的皮膚角質(zhì)層、甲，寄生或腐生于表皮角質(zhì)、甲板和毛發(fā)的角蛋白組織中，引起各種癬病，且病程持久、難治愈、易復(fù)發(fā)。 紅色毛癬菌的高發(fā)病率以及親人特性使得它成為了研究淺部真菌的典范。近年來，雖然許多學(xué)者對(duì)紅色毛癬菌的生物學(xué)特性進(jìn)行了一定研究，但還是有許多問題仍需要解釋，尤其是紅色毛癬菌與角蛋白的關(guān)系，在角蛋白培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性，紅色色素產(chǎn)生的影響因素。目前，還沒有相關(guān)實(shí)驗(yàn)對(duì)紅色毛癬菌這個(gè)生物學(xué)特性進(jìn)行研究和報(bào)道。 紅色毛癬菌最突出的生物學(xué)特點(diǎn)是嗜角蛋白性。角蛋白富含半胱氨酸，由于其含有很多的二硫鍵，所以結(jié)構(gòu)特別穩(wěn)定。紅色毛癬菌在侵襲組織的過程中可以產(chǎn)生許多蛋白水解酶，分解皮膚中的角蛋白、膠原蛋白、彈力蛋白成短肽和氨基酸，為其生長(zhǎng)代謝提供所需養(yǎng)分，同時(shí)也有利于菌體向周圍組織擴(kuò)散及深層組織侵入，因此，被認(rèn)為是主要的毒力因子。角蛋白酶是這些蛋白水解酶中研究最為深入的、毒力最為重要的一種。迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)真菌分泌角蛋白酶的研究較多，但主要集中在研究不同菌種分泌的角蛋白酶。但對(duì)于不利環(huán)境下的紅色毛癬菌如何適應(yīng)并致��？以及如何調(diào)節(jié)自身的角蛋白酶活力表達(dá)研 究卻很少。本課題就甲真菌病的致病過程以及致病菌的毒力因子展開研究，包括以下三部分： 第一部分甲真菌病模型的體外實(shí)驗(yàn)研究 目的構(gòu)建甲真菌病體外模型研究，以期觀察不同致病真菌侵襲甲板的過程。 方法我們使用豬甲作為體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，在每枚甲板腹�?cè)面中央黏粘了一個(gè)“O”型圈，將受試菌液加入“O”型圈內(nèi)，放入培養(yǎng)箱30℃培養(yǎng)。每日觀察真菌生長(zhǎng)情況，并比較不同真菌穿透甲板的速率，同時(shí)用病理和電鏡的方法來觀察真菌侵襲甲板并在甲板中的生長(zhǎng)情況。 結(jié)果我們成功的構(gòu)建了甲真菌病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，觀察到皮膚癬菌以及白念珠菌侵襲角蛋白的大體形態(tài)學(xué)變化和微觀結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)論該模型設(shè)計(jì)具有科學(xué)性和創(chuàng)新性，比較接近臨床甲真菌病模型，該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥屛覀兏庇^的觀察到不同致病真菌侵襲甲板的過程。 第二部分不同蛋白對(duì)紅色毛癬菌生物學(xué)特性影響研究 目的探討不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)紅色毛癬菌生長(zhǎng)性狀的影響 方法將紅色毛癬菌以點(diǎn)接種方式分別接種于不同營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，如馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基、胰蛋白葡萄糖、角蛋白葡萄糖、葡萄糖培養(yǎng)基以及不含葡萄糖培養(yǎng)基上，在30℃培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)觀察菌落形態(tài)、顏色、產(chǎn)孢情況并測(cè)量菌落直徑，繪制生長(zhǎng)曲線圖。 結(jié)果從菌落生長(zhǎng)曲線形態(tài)大小來看，馬鈴薯葡萄糖和沙氏培養(yǎng)基蛋白質(zhì)含量豐富，為紅色毛癬菌生長(zhǎng)提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)，故菌落生長(zhǎng)直徑最大；而角蛋白培養(yǎng)基相對(duì)來說由于角蛋白營(yíng)養(yǎng)稍差，故菌落生長(zhǎng)直徑稍��；在沒有蛋白僅有葡萄糖作為碳源的情況下皮膚癬菌生長(zhǎng)不良，而僅有瓊脂的情況下皮膚癬菌無法生長(zhǎng)。 結(jié)論紅色毛癬菌在含有蛋白的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，不含蛋白生長(zhǎng)不良。同時(shí)PH偏酸有助于產(chǎn)生紅色色素。 第三部分甲真菌病致病菌角蛋白酶的動(dòng)態(tài)測(cè)量 目的不同的底物對(duì)真菌角蛋白酶活性的影響以及紅色毛癬菌在不良環(huán)境下的致病性。 方法1、用不同底物（角蛋白、葡萄糖、胰蛋白胨）分別誘導(dǎo)不同真菌，應(yīng)用keratin--azure結(jié)合分光光度法培養(yǎng)上清液中的角蛋白酶活性。2、分別以不同蛋白為底物，紅色毛癬菌在H2O2、特比奈芬和伊曲康唑的作用刺激下，測(cè)量角蛋白酶活性。 結(jié)果不同底物誘導(dǎo)真菌產(chǎn)生角蛋白酶活性由高到低依次為角蛋白、胰蛋白、葡萄糖。皮膚癬菌產(chǎn)生角蛋白酶活性高于酵母菌。在一定損傷作用下，當(dāng)以角蛋白為底物時(shí)紅色毛癬菌角蛋白酶反而升高。 結(jié)論不同底物誘導(dǎo)真菌角蛋白酶的活性不同。在角蛋白為底物時(shí)，紅色毛癬菌在遇到一定程度的損傷時(shí)可以通過調(diào)節(jié)自身角蛋白酶的表達(dá)，抵御氧化劑的損傷。
【關(guān)鍵詞】：皮膚癬菌病 紅色毛癬菌 甲真菌病模型 生長(zhǎng)曲線 角蛋白酶
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R756
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 中英文縮略詞對(duì)照表11-12
• 前言12-17
• 第一部分 甲真菌病體外模型研究17-32
• 引言17-18
• 材料與方法18-23
• 結(jié)果23-28
• 討論28-32
• 第二部分 不同蛋白對(duì)紅色毛癬菌生物學(xué)特性影響研究32-47
• 引言32
• 材料與方法32-39
• 結(jié)果39-44
• 討論44-47
• 第三部分 甲真菌病致病菌角蛋白酶的動(dòng)態(tài)表達(dá)47-65
• 引言47-48
• 材料與方法48-55
• 結(jié)果55-61
• 討論61-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 綜述70-80
• References77-80
• 在讀期間發(fā)表論文情況說明80-81
• 致謝81

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 馬映宇,張文娟,蔡永明,桑菊花;離體甲的甲真菌病模型研究[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年03期

2 傅爰錕;龔瓊模;;紅色毛癬菌色素變異原因的探討[J];江西醫(yī)藥;1991年03期

3 劉維達(dá),呂桂霞,王金燕,吳建明;紅色毛癬菌菌落產(chǎn)色變異的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華皮膚科雜志;1997年05期

4 張穎;羅慶錄;;皮膚癬菌外分泌角蛋白酶的研究進(jìn)展[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2007年03期

5 吳建華;顧軍;;致病真菌對(duì)甲侵襲性的體外初步研究[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2008年02期

，

本文編號(hào)：890236