本文關鍵詞：木鱉子對羥基桂皮醛誘導黑色素瘤細胞分化的實驗研究

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【摘要】：目的：研究從中藥木鱉子中提取的九種單體化合物對小鼠黑色素瘤細胞生長的影響，篩選出作用效果最顯著的單體化合物；從形態(tài)及功能方面觀察對羥基桂皮醛誘導B16細胞分化的作用；并從基因及蛋白水平探討其作用機制，為其作為抗腫瘤新藥開發(fā)提供參考依據(jù)。 方法： 1從不鱉子中提取對羥基桂皮醛、松柏醛、對羥基苯甲醛、3-甲氧基對羥基苯甲醛和ligballinol等九種單體化合物；采用SRB法檢測九種單體化合物對B16細胞生長的影響，計算生長抑制率，并在光鏡下觀察細胞形態(tài)變化。 2SRB法檢測不同濃度對羥基桂皮醛（2、4、6μg/ml）作用24h、48h、72h后，對B16細胞增殖的抑制作用。 3采用瑞-姬染色法觀察不同濃度對羥基桂皮醛（2、4、6μg/ml）作用于B16細胞72h后，對細胞形態(tài)的影響。 4比色法檢測6μg/ml對羥基桂皮醛作用于B16細胞48h后，對細胞黑色素含量和酪氨酸酶活性的影響。 5采用生長曲線的方法檢測6μg/ml對羥基桂皮醛作用于B16細胞48h后，對細胞增殖能力的影響。 6采用克隆集落形成試驗檢測6μg/ml對羥基桂皮醛作用于B16細胞48h后，對細胞克隆增殖能力的影響。 7采用劃痕試驗檢測6μg/ml對羥基桂皮醛作用于B16細胞48h后，對細胞遷徙能力的影響。 8采用流式細胞（Flow cytometry, FCM）檢測6μg/ml對羥基桂皮醛作用于B16細胞6h、12h、24h和48h后，對細胞凋亡率以及細胞周期分布的影響。 9采用免疫印跡技術（Western blot）檢測MAPK信號轉導通路中p-P38、p-JNK和p-ERK1/2在對羥基桂皮醛誘導B16細胞分化過程中的作用。10通過Real time方法檢測6μg/ml的對羥基桂皮醛分別作用于B16細胞6h、12h、24h后，分化相關基因c-myc、Tyr、Trp1和Trp2表達的變化。 結果： 1對羥基桂皮醛、松柏醛、對羥基苯甲醛、3-甲氧基對羥基苯甲醛和ligballinol等九種單體化合物對B16細胞的生長有不同程度的抑制作用，其中對羥基桂皮醛的效果最明顯，與各組比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 2對羥基桂皮醛（2、4、6μg/ml）對B16細胞的增殖有較強的抑制作用，且具有濃度和時間相關性，與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P 0.05）。 3Giemsa染色結果顯示，2μg/ml對羥基桂皮醛作用72h后，細胞體積增大變成梭形，排列有序，成纖維狀生長。隨著對羥基桂皮醛藥物濃度的增大，細胞出現(xiàn)樹突狀結構，為典型的細胞分化形態(tài)；而對照組細胞大小均勻，生長密集。 4B16細胞經(jīng)2、4、6μg/ml的對羥基桂皮醛分別作用48時后，隨著藥物作用濃度的增大，黑色素含量和酪氨酸酶活性增加，且明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。 5B16細胞經(jīng)6μg/ml的對羥基桂皮醛作用48時后，生長增殖能力降低，且明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。 6B16細胞經(jīng)6μg/ml的對羥基桂皮醛作用48時后，克隆集落形成能力降低，且明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。 7B16細胞經(jīng)6μg/ml的對羥基桂皮醛作用48時后，遷徙力降低，且明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01）。 8FCM分析結果顯示，6μg/ml對羥基桂皮醛作用于B16細胞6、12、24、48h后，細胞凋亡率無明顯改變，但處于S期、G2/M期細胞減少，G0/G1期細胞明顯增加，與對照組相比有顯著差異。組間比較差異有顯著性（P0.05），各實驗組與對照組比較差異有顯著性（P0.01）。 9Western blot結果顯示，對羥基桂皮醛還可以上調MAPK信號通路中p-P38和下調p-JNK和p-ERK的蛋白表達水平(P0.05)。 10Real time檢測結果顯示，對羥基桂皮醛可以上調Tyr、Trp1和Trp2和下調c-myc基因的表達水平(P0.05)，進一步證實對羥基桂皮醛是通過上調酪氨酸酶的表達而誘導黑色素瘤細胞黑色素含量的增加，同時下調腫瘤形成相關基因c-myc的表達水平而促進B16細胞的分化。 結論： 1木鱉子九種單體化合物中，第一種單體化合物對羥基桂皮醛的抗腫瘤作用最強，誘導小鼠黑色素瘤B16細胞形態(tài)方面的分化。 2對羥基桂皮醛不僅在功能及形態(tài)上誘導黑色素瘤細胞的分化，而且可以使細胞的增殖能力、遷徙力降低，，誘導黑色素瘤細胞向正常方向逆轉。 3對羥基桂皮醛是通過上調MAPK信號通路中p-P38和p-JNK蛋白的表達而誘導B16細胞的分化。
【關鍵詞】：黑色素瘤 B16細胞 木鱉子 對羥基桂皮醛 細胞分化
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5;R285
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 引言10-11
• 第一部分 木鱉子提取的九種單體化合物體外抗腫瘤活性的研究11-23
• 前言11
• 材料與方法11-13
• 結果13-15
• 附圖15-18
• 附表18-20
• 討論20
• 小結20-21
• 參考文獻21-23
• 第二部分 木鱉子對羥基桂皮醛體外誘導 B16 細胞分化及其機制的實驗研究23-51
• 前言23-24
• 材料與方法24-33
• 結果33-36
• 附圖36-43
• 附表43-45
• 討論45-47
• 小結47
• 參考文獻47-51
• 結論51-52
• 綜述 誘導黑素瘤細胞分化的藥物及其分化機制的研究進展52-69
• 參考文獻65-69
• 致謝69-70
• 個人簡歷70

【參考文獻】

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1 趙連梅;韓麗娜;單保恩;潘曉明;劉麗華;李曉光;;木鱉子提取物體外抗腫瘤活性的初步研究[J];癌變.畸變.突變;2010年01期

2 趙連梅;韓麗娜;商曉輝;單保恩;;木鱉子醇提物對黑素瘤B16細胞增殖的抑制及其可能機制[J];中國腫瘤生物治療雜志;2010年01期

本文編號：890217