本文關(guān)鍵詞：Stevens-Johnson綜合征與中毒性表皮壞死松解癥中細胞毒蛋白的表達及意義

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【摘要】：Stevens-Johnson綜合征（Stevens-Johnson Syndrome，SJS）與中毒性表皮壞死松解癥（Toxci Epidermal Necrolysis，TEN）是一種以表皮大面積剝脫壞死、黏膜受累為主要表現(xiàn)的藥源性疾病。其病情變化迅速，皮損泛發(fā)全身，常伴有發(fā)熱及肝腎功能損害，死亡率較高（30%）。 關(guān)于SJS與TEN的發(fā)病機制尚不清楚，近年來的研究發(fā)現(xiàn)，SJS與TEN同屬變態(tài)反應(yīng)中的ⅣC型，此型變態(tài)反應(yīng)的主要特點是通過特異性的抗原激活具有殺傷作用的CTL細胞，該細胞釋放細胞毒性蛋白誘導(dǎo)靶細胞的壞死與凋亡。 細胞毒蛋白是一類由CD8~+T、NK、NKT細胞分泌的一類具有細胞毒作用的蛋白質(zhì)，研究證實細胞毒蛋白如顆粒酶素B(Granzyme-B)，顆粒溶素（Granulysin），穿孔素（Perforin）等可通過不同的作用機理誘導(dǎo)表皮細胞的凋亡或壞死�？扇苄匀讼嚓P(guān)因子凋亡配體(soluable Fas Ligand, sFasL)在這個過程中亦具有重要作用，CTL細胞識別靶細胞后，細胞表面表達的高水平FasL與靶細胞表面的Fas相互識別，通過Fas觸發(fā)靶細胞內(nèi)部的Caspase-3系統(tǒng)，使靶細胞發(fā)生程序性死亡。穿孔素的作用是在靶細胞膜上形成多聚穿孔素管狀通道，導(dǎo)致靶細胞溶解破壞，同時，該通道還可以使一些顆粒分子如Granulysin，Granzyme-B進入靶細胞內(nèi)，對胞內(nèi)感染發(fā)揮免疫作用。 Granulysin是近年來研究較多的一類細胞毒蛋白，在機體免疫應(yīng)答過程中,在CTL增殖活化約3-5天后，Granulysin與Perforin和Granzyme-B等顆粒分子一起排出胞外,參與抗菌、抗病毒和殺傷腫瘤細胞等免疫過程。盡管有學(xué)者認為sFasl和Perforin是導(dǎo)致患者表皮細胞大量壞死凋亡的主要效應(yīng)分子，然而這兩種分子在SJS和TEN患者血清中的表達水平很低，人們很難理解如此低濃度的分子如何導(dǎo)致表皮細胞的大量凋亡和壞死，并且sFasL發(fā)揮作用時需要T細胞與靶細胞直接接觸，而在SJS和TEN患者表皮內(nèi)早期浸潤的T細胞并不多。有臺灣學(xué)者通過比較SJS和TEN患者與其他皰病患者皰液中顆粒溶素的表達水平，發(fā)現(xiàn)顆粒溶素在SJS和TEN皰液的濃度顯著升高；并且通過免疫組織化學(xué)染色的方法，作者在SJS和TEN患者證實顆粒溶素可沉積在患者表皮；將顆粒溶素注入小鼠的表皮內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其可誘導(dǎo)小鼠表皮水皰的產(chǎn)生。 既然細胞毒蛋白在中毒性表皮壞死松解癥表皮壞死過程中中具有重要作用，那么它們與患者的臨床表現(xiàn)是否存在內(nèi)在聯(lián)系呢？而且在中毒性表皮壞死松解癥早期的發(fā)病中，患者往往僅表現(xiàn)為紅斑丘疹，與斑丘疹型藥疹鑒別困難，細胞毒蛋白水平是否有可能作為鑒別二者的分子標(biāo)記呢？因此，我們決定以細胞毒蛋白為研究對象，通過觀察SJS和TEN患者體內(nèi)細胞毒蛋白的表達水平及產(chǎn)生細胞毒蛋白的細胞來源，為鑒別早期SJS、TEN與斑丘疹型藥疹提供依據(jù)，并分析其水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系，為患者的治療與預(yù)后提供判定依據(jù)。 目的 以SJS與TEN患者的血清與外周血單個核細胞為研究對象，研究細胞毒蛋白在SJS與TEN患者體內(nèi)的表達水平及細胞來源，并分析其臨床意義，為闡明SJS與TEN的發(fā)病機制以及為其早期診斷和鑒別診斷提供可靠的實驗室依據(jù)。 方法 納入研究的對象均為西京皮膚醫(yī)院住院患者，其中TEN患者7例，SJS患者8例，男性患者8名，女性患者7名，年齡為14～51歲，，平均年齡28歲，病程0～9d，致敏藥物為抗生素類5例，抗癲癇類藥物4例，非甾體抗炎藥6例。普通型藥物反應(yīng)患者15例，包括多形紅斑型（erythema multiforme，EM）藥疹患者7例，斑丘疹型藥疹(maculopapular exanthema,MPE)患者8例，其致敏藥物分別為阿莫西林、青霉素、對乙酰氨基酚、卡馬西平及氨基比林等藥物。選取10名健康人作為健康對照。其中男5例，女5例，來自本院體檢中心，年齡與性別與患者組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異。 首先分離患者血清及外周血單個核細胞，利用ELISA和流式細胞術(shù)分析其細胞毒蛋白的表達水平，分析其水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，并利用流式細胞術(shù)鑒定產(chǎn)生CD8~+T細胞的來源。 其次利用流式細胞儀分選3名長期好轉(zhuǎn)的SJS與TEN患者CD8~+的記憶性T細胞，與致敏藥物和其B淋巴母細胞共孵育，利用CCK8檢測每個細胞群增殖情況。 結(jié)果: 中毒性表皮壞死松解癥患者血清顆粒溶素水平為0.269±0.138ng/ml，明顯高于多形紅斑藥疹組（0.05+0.006ng/ml），MPE組（0.02+0.003ng/ml）及正常對照組（0.01+0.005ng/ml），（P0.05），進展期中毒性表皮壞死松解癥患者CD8~+T細胞選擇性表達顆粒溶素。穿孔素在中毒性表皮壞死松解癥的表達水平高于EM組，而與MPE組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。顆粒酶素B在中毒性表皮壞死松解癥患者CD8陽性T細胞表達水平明顯低于普通藥疹患者，在血清水平與其他對照組差別無統(tǒng)計學(xué)意義�？扇苄匀讼嚓P(guān)因子凋亡配體的血清濃度在中毒性表皮壞死松解癥中明顯高于其他對照組。細胞內(nèi)的Granulysin水平與CK-MB水平呈正相關(guān)（P=0.0186，r=0.617），細胞中的Granulysin與CK水平呈正相關(guān)（P0.001，r=0.79），而與白球蛋白比值、AST、ALT等指標(biāo)均無相關(guān)性。 通過流式細胞儀技術(shù)我們發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生細胞毒蛋白的細胞為CD8陽性的效應(yīng)性T細胞和效應(yīng)記憶性T細胞，在體外實驗中，我們發(fā)現(xiàn)在致敏藥物的刺激下，效應(yīng)記憶性T細胞增殖最快。 結(jié)論: 中毒性表皮壞死松解癥患者體內(nèi)細胞毒蛋白的水平可能與其疾病的嚴重程度相關(guān)，其中顆粒溶素在中毒性表皮壞死松解癥患者中的表達相對特異，可作為鑒別中毒性表皮壞死松解癥與普通型藥疹的分子標(biāo)記，其表達水平還可能與患者的心肌損傷有關(guān)。 產(chǎn)生細胞毒蛋白的CD8~+T細胞來源于效應(yīng)性T細胞與效應(yīng)記憶性T細胞。在致敏藥物的刺激下，這兩群細胞可發(fā)生增殖，效應(yīng)記憶性T細胞的增殖速度最快，從而在中毒性表皮壞死松解癥的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：Stevens-Johnson綜合征 中毒性表皮壞死松解癥 顆粒溶素 顆粒酶素B 穿孔素 記憶性T細胞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.25
【目錄】：

• 縮略語表6-8
• 中文摘要8-12
• ABSTRACT12-16
• 前言16-17
• 文獻回顧17-27
• 1. 中毒性表皮壞死松解癥的定義及分類17
• 2. 流行病學(xué)特征17
• 3. 臨床特點17-18
• 4. 發(fā)病機制18-27
• 4.1 藥物與遺傳易感性18-19
• 4.2 特定的 T 細胞表面抗原受體序列發(fā)揮作用19
• 4.3 細胞毒蛋白的分類及誘導(dǎo)表皮細胞凋亡的作用機制19-22
• 4.4 單核、巨噬細胞所發(fā)揮的促凋亡作用22-23
• 4.4.1 TNF-α22-23
• 4.4.2 TNF-α相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體與 TNF-α相似的凋亡誘導(dǎo)分子23
• 4.4.3 調(diào)節(jié)性 T 細胞的作用23
• 4.5 T 細胞的活化增殖以及記憶性 T 細胞的形成23-27
• 4.5.1 T 細胞的活化增殖與轉(zhuǎn)歸23-24
• 4.5.2 CD8 記憶性 T 細胞的分類及形成過程24-27
• 引言27-28
• 研究對象28-30
• 材料30-33
• 1.主要儀器設(shè)備30-31
• 2.主要試劑31-32
• 3.主要試劑的配制方法32-33
• 實驗一 檢測中毒性表皮壞死松解癥患者體內(nèi)細胞毒蛋白水平33-47
• 1 方法33-35
• 1.1 病例搜集33
• 1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)33
• 1.3 ELISA 檢測細胞毒蛋白水平33-34
• 1.4 流式細胞儀檢測細胞內(nèi)細胞毒白水平34-35
• 1.4.1 SJS、TEN 患者外周血單個核細胞的分離：34
• 1.4.2 利用流式細胞分析儀分析細胞水平中細胞毒蛋白的表達34-35
• 1.4.3 分析細胞毒蛋白與患者臨床指標(biāo)的相關(guān)性35
• 2 結(jié)果35-45
• 2.1 SJS、TEN 患者血清內(nèi)細胞毒蛋白的水平35-38
• 2.1.1 SJS、TEN 患者血清中 Granulysin 的表達水平35-36
• 2.1.2 SJS、TEN 患者血清中 Granzyme-B 的表達水平36
• 2.1.3 SJS、TEN 患者血清中 sFasl 的表達水平36-37
• 2.1.4 SJS、TEN 患者血清中 Perforin 的表達水平37-38
• 2.2 細胞中細胞毒蛋白的表達38-41
• 2.2.1 CD3~+CD4~+T 與 CD3~+CD8~+T 細胞中 Granulysin 的表達38-39
• 2.2.2 細胞水平 Granzyme-B 的表達39-40
• 2.2.3 細胞水平 Perforin 的表達40-41
• 2.2.4 比較 SJS 與 TEN 患者 Granulysin 水平41
• 2.3 細胞毒蛋白與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析41-43
• 2.4 細胞毒蛋白在激素治療前后的水平變化43-45
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析45
• 3 討論45-47
• 3.1 細胞毒蛋白水平與藥疹的嚴重程度有關(guān)45-46
• 3.2 Granulysin 可作為鑒別急性期 SJS 和 TEN 患者與普通型藥疹患者的分子標(biāo)記46
• 3.3 Granulysin 的水平可能與部分患者心肌損傷相關(guān)46-47
• 實驗二 細胞毒蛋白的 CD8~+T 細胞的來源47-54
• 1 方法47-48
• 1.1 樣本收集47
• 1.2 SJS 與 TEN 患者外周血單個核細胞分離47
• 1.3 鑒定細胞毒蛋白的 CD8~+T 細胞的來源47-48
• 1.3.1 流式細胞術(shù)分析產(chǎn)生細胞毒蛋白 CD8~+T 細胞來源47-48
• 1.3.2 淋巴細胞增殖實驗48
• 2 結(jié)果48-52
• 2.1 流式細胞儀鑒定細胞毒蛋白的細胞來源48-50
• 2.2 B 淋巴母細胞系的建立50
• 2.3 不同 T 細胞亞群的分選50-51
• 2.4 不同 T 細胞亞群在致敏藥物刺激下增殖活性51-52
• 3 討論52-54
• 3.1 分泌細胞毒蛋白的 CD8~+T 細胞是效應(yīng)性 T 細胞和效應(yīng)記憶性 T 細胞52-53
• 3.2 CD8~+效應(yīng)記憶性 T 細胞長期存活于中毒性表皮壞死松解癥患者體內(nèi)，并可再次增殖活化53-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻55-63
• 個人簡歷和研究成果63-64
• 致謝64-65

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馬雪燕;高華;;Stevens-Johnson綜合征和中毒性表皮松解癥的病理損害、眼部表現(xiàn)及治療進展[J];國際眼科縱覽;2016年01期

2 畢津蓮;陳艷;張秀芹;鄒渭洪;;芳香族抗癲癇藥物致皮膚不良反應(yīng)的研究進展[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2015年33期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 邱建文;重癥藥疹69例臨床回顧性分析[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：811587