本文關(guān)鍵詞：UVB輻射對人成纖維細(xì)胞5-mC和5-hmC水平的影響

  更多相關(guān)文章： 中波紫外線 DNA甲基化 5-甲基胞嘧啶 5-羥甲基胞嘧啶 人成纖維細(xì)胞

【摘要】：目的：1.探討UVB輻射對體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞增殖能力的影響。2.探討UVB輻射對體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞5-甲基胞嘧啶(5-mC)和5-羥甲基胞嘧啶(5-hmC)水平的影響。 方法：1.常規(guī)體外培養(yǎng)原代人成纖維細(xì)胞,將細(xì)胞分為兩組：空白對照組和UVB處理組(累積劑量50mJ/cm2UVB輻射)；2.四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測成纖維細(xì)胞增殖情況3.HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；4.免疫組織化學(xué)ABC法檢測成纖維細(xì)胞5-mC和5-hmC表達(dá)水平；5.免疫熒光法檢測成纖維細(xì)胞5-mC和5-hmC表達(dá)水平； 結(jié)果：1.HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化：空白對照組的成纖維細(xì)胞排列規(guī)則,成漩渦狀或柵欄狀,細(xì)胞形態(tài)呈長梭形,胞質(zhì)豐滿,胞膜完整,可見核分裂象UVB處理組的成纖維細(xì)胞與空白對照組相比,細(xì)胞數(shù)目明顯減少且排列不規(guī)則,細(xì)胞變得寬大扁平,多數(shù)呈現(xiàn)多角形,胞質(zhì)疏松透明,邊界變得不清楚,胞核內(nèi)顆粒物增多,核分裂象少見。2.MTT檢測結(jié)果為UVB處理組細(xì)胞的吸光度值隨時(shí)間(第24、48、72、96、120小時(shí)5個時(shí)間點(diǎn))升高并不顯著,而空白對照組細(xì)胞的吸光度值則明顯升高；且空白對照組在72h、96h、120h各時(shí)間點(diǎn)吸光度值均明顯高于UVB照射組(P0.05)。3.免疫組織化學(xué)ABC法檢測空白對照組5-hmC表達(dá)明顯低于處理組,而5-mC表達(dá)明顯高于處理組(P0.05)。4.免疫熒光法檢測結(jié)果同免疫組織化學(xué)ABC法：空白對照組5-hmC表達(dá)水平明顯低于處理組,而5-mC表達(dá)水平明顯高于處理組(P0.05) 結(jié)論：1.亞毒性劑量(50mJ/cm2)的UVB輻射能明顯抑制體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞細(xì)胞的增殖能力。2.UVB輻射能下調(diào)體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞內(nèi)5-mC的表達(dá)水平,同時(shí)上調(diào)5-hmC的表達(dá)水平。
【關(guān)鍵詞】：中波紫外線 DNA甲基化 5-甲基胞嘧啶 5-羥甲基胞嘧啶 人成纖維細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 符號說明9-10
• 1 緒論10-12
• 2 材料和方法12-19
• 2.1 主要儀器及試劑12-14
• 2.1.1 主要儀器12
• 2.1.2 主要試劑及耗材12-13
• 2.1.3 主要相關(guān)試劑配制13-14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟14-18
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)14-16
• 2.2.2 MTT法檢測UVB對成纖維細(xì)胞增殖活力的影響16
• 2.2.3 HE染色法觀察細(xì)胞形態(tài)變化16-17
• 2.2.4 免疫組化(ABC法)檢測細(xì)胞5-mC和5-hmC的表達(dá)17
• 2.2.5 免疫熒光法檢測細(xì)胞5-mC和5-hmC的表達(dá)17-18
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法18-19
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-29
• 3.1 原代培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)19
• 3.2 HE染色法觀察空白對照組和UVB照射組細(xì)胞形態(tài)變化19-21
• 3.3 MTT法檢測空白對照組和UVB照射組細(xì)胞增殖活力21
• 3.4 免疫組化法ABC法檢測兩組細(xì)胞內(nèi)5-hmC和5-mC的表達(dá)水平21-24
• 3.4.1 免疫組化ABC法測得5-hmC的表達(dá)水平22
• 3.4.2 免疫組化ABC法測得5-mC的表達(dá)水平22-24
• 3.5 免疫熒光法檢測兩組細(xì)胞內(nèi)5-mC和5-hmC的表達(dá)水平24-27
• 3.5.1 免疫熒光法測得5-mC的表達(dá)水平25
• 3.5.2 免疫熒光法測得5-hmC的表達(dá)水平25-27
• 3.6 附實(shí)驗(yàn)室同期相關(guān)研究結(jié)果27-29
• 4 討論29-34
• 4.1 UVB對人成纖維細(xì)胞增殖活性的影響29-30
• 4.2 UVB輻射對細(xì)胞甲基化水平的影響30-31
• 4.3 甲基化胞嘧啶與5-羥甲基化胞嘧啶31-32
• 4.4 紫外線輻射致DNA甲基化異常的可能機(jī)制32-34
• 5 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述39-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 趙書民;李成濤;;DNA甲基化在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用前景及其檢測方法新進(jìn)展[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

2 董玉瑋,侯進(jìn)慧,朱必才,李培青,龐永紅;表觀遺傳學(xué)的相關(guān)概念和研究進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2005年01期

3 王寶璽;;皮膚光老化機(jī)制及其防治研究進(jìn)展[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年20期

，

本文編號：810016