本文關鍵詞：沙眼衣原體感染血清學免疫優(yōu)勢蛋白的篩選與優(yōu)化

  更多相關文章： 衣原體 沙眼 免疫優(yōu)勢蛋白 血清學檢測 微量免疫熒光

【摘要】：沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis, C.t)引起的泌尿生殖道感染目前己成為國內(nèi)外最常見的性傳播疾病之一。沙眼衣原體感染引起的并發(fā)癥較多且較嚴重,該感染還顯著增加HIV感染的危險性,并且可能與宮頸癌的形成有關[1]。其感染的另一個重要特點是癥狀隱匿,感染者往往成為重要儲主和傳染源,為控制沙眼衣原體感染,早期發(fā)現(xiàn)沙眼衣原體感染者并給與治療,防止進一步傳播是重要舉措之一。目前我國臨床上廣泛使用的沙眼衣原體檢測試劑盒針對的抗原多數(shù)是脂多糖(Lipopolysaccharides, Lps),主要外膜蛋白(Major Outer Oembrane Protein, MOMP)或熱休克蛋白60(Heat Shock Protein 60,HSP60)。然而Lps缺乏特異性,和其他病原體的Lps抗原具有一定的交叉反應。近年來越來越多的研究顯示MOMP和HSP60雖有較好的抗原性和特異性,但不屬抗原性最強的前20種蛋白之列,因此用于檢測的敏感性不夠,可能導致誤診。為了尋找更適合沙眼衣原體感染篩查的方法,本實驗選取近年來國外陸續(xù)報道的了8種沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白進行蛋白的表達、驗證,以MOMP和HSP60為對照,收集臨床沙眼衣原體感染者和未感染者的血清,ELISA方法檢測血清中抗所表達衣原體抗原的抗體,尋找適用于我國早期篩查沙眼衣原體感染的抗原蛋白組合。目的：表達衣原體質(zhì)粒編碼蛋白3(Pgp3)、衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)、C.t143編碼蛋白(CT143)、C.t101編碼蛋白(CT101)、C.t694編碼蛋白(CT694)、C.t875編碼蛋白(CT875)、C.t813編碼蛋白(CT813)、C.t119編碼蛋白(IncA)8種沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白,以MOMP和HSP60為對照,檢測泌尿生殖道沙眼衣原體感染者血清中10種沙眼衣原體蛋白的IgG抗體,比較上述幾種蛋白的抗原性,確定具有最高敏感性和特異性的抗原蛋白組合。優(yōu)化適用于沙眼衣原體感染血清學篩查的免疫優(yōu)勢蛋白的組合。方法：將編碼上述10種蛋白的基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)BL-21,IPTG誘導目的蛋白的表達,GST Magbeads進行蛋白鑒定,用獲取的蛋白裂解液包被ELISA 96孔板。收集天津醫(yī)科大學總醫(yī)院性病門診沙眼衣原體感染者血清50份和未感染者血清30份,ELISA法檢測血清中的相應特異性IgG抗體,將該結(jié)果與血清學微量免疫熒光檢測和生殖道分泌物沙眼衣原體細胞培養(yǎng)兩種傳統(tǒng)金標準作比較[34]。結(jié)果：1.本研究完成了對pGEX-6p-2/Pgp3、pGEX-6P-2/CPAF、 pGEX-6P-2/CT143、pGEX-6P-2/CT101、pGEX-6P-2/CT694、pGEX-6P-2/CT875、 pGEX-6P-2/CT813、pGEX-6P-2/MOMP、pGEX-6P-2/IncA和pGEX-6P-2/HSP60 10種重組質(zhì)粒及pGEX-6p-2空載體質(zhì)粒的提取、鑒定和測序。2.本研究完成了GST-Pgp3、GST-CPAF、GST-CT143、GST-CT101、 GST-CT694、GST-CT875、GST-CT813、GST-MOMP、GST-IncA、GST-HSP60 10種融合蛋白及空質(zhì)粒GST蛋白的表達、純化和鑒定。3.50份C.t感染者血清中10種沙眼衣原體蛋白的抗體檢出情況：Pgp3抗體88%(44/50)、CPAF抗體76%(38/50)、CT143抗體74%(37/50)、CT101抗體72%(36/50)、CT694抗體66%(33/50)、CT875抗體62%(31/50)、CT813抗體60%(30/50)、MOMP抗體52%(26/50)、IncA抗體48%(24/50)和HSP60抗體34%(17/50)；30份沙眼衣原體未感染者標本中10種沙眼衣原體蛋白的抗體檢出情況：CT143抗體26.7%(8/30)、CT101抗體16.7%(5/30),其余8種抗體均未檢出。4.50份沙眼衣原體感染者標本中,微量免疫熒光檢測陽性44例,陰性6例；細胞培養(yǎng)陽性14例,陰性36例。30份沙眼衣原體未感染者標本中,微量免疫熒光檢測結(jié)果與細胞培養(yǎng)檢測結(jié)果均為陰性。5.沙眼衣原體Pgp3、CT694和CT875這3種免疫優(yōu)勢蛋白組合的血清學實驗結(jié)果和微量免疫熒光、沙眼衣原體細胞培養(yǎng)的陽性符合率分別達到97.73%(43/44)和92.86%(13/14)。30份MIF檢測陰性血清標本中未檢出上述三種蛋白的抗體。結(jié)論：1. Pgp3、CPAF、CT143、CT101、CT694、CT875、CT813、MOMP、 IncA和HSP60 10種C.t免疫優(yōu)勢蛋白中,Pgp3抗原性最強,抗體檢出率最高,其次是CPAF和CT143,所選的八種沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白中,除了IncA外,其余的7種蛋白的抗原性均強于MOMP和Hsp60。2.Pgp3、CT694和CT875這3種免疫優(yōu)勢蛋白組合對C.t的篩查敏感性最高,特異性最強。
【關鍵詞】：衣原體 沙眼 免疫優(yōu)勢蛋白 血清學檢測 微量免疫熒光
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R759
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白的表達16-35
• 1.1 對象和方法16-22
• 1.1.1 對象16-18
• 1.1.2 方法18-22
• 1.2 結(jié)果22-30
• 1.2.1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化22
• 1.2.2 重組質(zhì)粒的提取22-23
• 1.2.3 重組質(zhì)粒測序和blast比對23-28
• 1.2.4 融合蛋白表達及純化28-30
• 1.3 討論30-34
• 1.3.1 對沙眼衣原體候選蛋白的抗原性討論30-33
• 1.3.2 GST Magbeads純化、鑒定融合蛋白的討論33-34
• 1.4 小結(jié)34-35
• 二、泌尿生殖道沙眼衣原體感染者血清抗體的檢測35-44
• 2.1 對象和方法35-38
• 2.1.1 對象35-36
• 2.1.2 方法36-38
• 2.1.3 結(jié)果判斷38
• 2.2 結(jié)果38-39
• 2.3 討論39-42
• 2.3.1 血清處理方法的討論39-40
• 2.3.2 谷胱甘肽包被的ELISA 96孔酶標板的使用40
• 2.3.3 重組沙眼衣原體蛋白的特異性抗體檢出情況的討論40-42
• 2.4 小結(jié)42-44
• 三、沙眼衣原體感染血清學篩查候選蛋白組合的優(yōu)化44-52
• 3.1 對象和方法44-47
• 3.1.1 對象44
• 3.1.2 方法44-47
• 3.2 實驗結(jié)果47-50
• 3.2.1 MIF法檢測結(jié)果47-48
• 3.2.2 尿道/宮頸拭子沙眼衣原體細胞培養(yǎng)結(jié)果48
• 3.2.3 尿道/宮頸拭子PCR結(jié)果48-50
• 3.3 討論50-51
• 3.3.1 傳統(tǒng)金標準檢測方法優(yōu)缺點的討論50
• 3.3.2 免疫蛋白組合的優(yōu)化的討論50-51
• 3.4 小結(jié)51-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-58
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明58-59
• 綜述59-68
• 綜述參考文獻64-68
• 致謝68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 陳曉旭,郭玲,伊純德,楊學穎;國內(nèi)對泌尿生殖道沙眼衣原體感染的研究概況[J];臨床軍醫(yī)雜志;2001年01期

2 黃啟強;顧艷;周曉蘭;;3種方法檢測286例生殖道沙眼衣原體的分析[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2011年10期

3 陸春雪;吳移謀;彭波;李忠玉;胡四海;鐘光明;;沙眼衣原體分泌性蛋白Pgp3滴鼻免疫增強小鼠對衣原體生殖道感染的保護作用[J];微生物學通報;2012年02期

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本文編號：805856