發(fā)布時(shí)間：2017-07-03 13:08

  本文關(guān)鍵詞：阿司匹林在H_2O_2誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 白癜風(fēng) 氧化應(yīng)激 H_2O_2 黑素細(xì)胞 阿司匹林

【摘要】：白癜風(fēng)是臨床常見(jiàn)的色素脫失性疾病，該病發(fā)病機(jī)制尚未充分闡明，治療困難。本課題組及其他學(xué)者的研究證實(shí)氧化應(yīng)激與白癜風(fēng)密切相關(guān)。阿司匹林是臨床常用的非甾體類(lèi)抗炎藥（NSAIDs），近年來(lái)的研究證實(shí)其具有抗氧化作用，在多種細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示有良好的抗氧化效果。我們推測(cè)阿司匹林在白癜風(fēng)中可能亦有治療作用，檢索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)已有學(xué)者注意到了相關(guān)問(wèn)題，并已證實(shí)低劑量阿司匹林可促進(jìn)白癜風(fēng)患者原代黑素細(xì)胞增殖，降低脂質(zhì)過(guò)氧化，，臨床試用后活動(dòng)期白癜風(fēng)停止進(jìn)展。然而，目前相關(guān)研究文章僅4篇，特別是機(jī)制研究方面尚未涉及。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2-ARE通路在黑素細(xì)胞對(duì)抗H_2O_2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激中發(fā)揮重要作用，HO-1是其在黑素細(xì)胞抗氧化中主要的效應(yīng)分子，并且白癜風(fēng)黑素細(xì)胞抗氧化應(yīng)激通路Nrf2-ARE存在缺陷，導(dǎo)致氧化應(yīng)激時(shí)黑素細(xì)胞易受損傷，已有研究證實(shí)阿司匹林發(fā)揮抗氧化與誘導(dǎo)HO-1表達(dá)及生成NO相關(guān)。而HO-1是抗氧化通路Nrf2-ARE通路的下游分子，NO又是該通路的刺激劑。那么，阿司匹林是否確能保護(hù)人黑素細(xì)胞對(duì)抗氧化應(yīng)激呢？其抗氧化作用是否系通過(guò)Nrf2-ARE通路及其下游分子來(lái)實(shí)現(xiàn)呢？針對(duì)這些問(wèn)題，我們進(jìn)行了本研究。 第一部分：阿司匹林在H_2O_2誘導(dǎo)的正常人黑素細(xì)胞系PIG1細(xì)胞及原代培養(yǎng)的黑素細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用 方法：不同濃度阿司匹林處理PIG1細(xì)胞24h，觀察細(xì)胞形態(tài)，CCK-8測(cè)定細(xì)胞活力，篩選阿司匹林安全濃度。選用0.75mM H_2O_2誘導(dǎo)PIG1細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，安全濃度阿司匹林預(yù)處理24h，采用拍照、CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)和分光光度計(jì)觀察細(xì)胞形態(tài)、活力、凋亡、胞內(nèi)ROS水平和LDH釋放率的變化。培養(yǎng)包皮來(lái)源的原代黑素細(xì)胞，采用S-100和MelanA染色鑒定。不同濃度阿司匹林處理24h后，拍照觀察形態(tài)變化。選用0.75mM H_2O_2誘導(dǎo)氧化損傷，安全濃度阿司匹林預(yù)處理24h后，采用拍照和CCK-8法觀察細(xì)胞形態(tài)和活力變化。 結(jié)果：10-90μM阿司匹林處理PIG1細(xì)胞24h，對(duì)細(xì)胞形態(tài)和活力無(wú)明顯影響，270μM和810μM阿司匹林均不同程度影響到了黑素細(xì)胞形態(tài)和活力。用0.75mM H_2O_2誘導(dǎo)氧化損傷，10-90μM阿司匹林預(yù)處理PIG1細(xì)胞24h后，細(xì)胞形態(tài)有不同程度恢復(fù)，細(xì)胞活力顯著升高，凋亡、LDH釋放率顯著降低，ROS水平不同程度降低。原代黑素細(xì)胞生長(zhǎng)良好，純度較高。10-90μM阿司匹林處理24h后，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化。用0.75mM H_2O_2誘導(dǎo)氧化損傷，10-90μM阿司匹林預(yù)處理24h后，細(xì)胞形態(tài)有不同程度恢復(fù)，細(xì)胞活力顯著升高。 第二部分：阿司匹林保護(hù)人黑素細(xì)胞對(duì)抗H_2O_2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究 方法：90μM阿司匹林處理PIG1細(xì)胞24h，western blot檢測(cè)細(xì)胞的p-Nrf2和Nrf2變化，RT-PCR檢測(cè)HO-1、NQO-1、GCLC、GCLM的mRNA水平。選用特異性Nrf2siRNA轉(zhuǎn)染PIG1細(xì)胞48h后，選用0.75mM H_2O_2誘導(dǎo)PIG1細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，90μM阿司匹林預(yù)處理24h后，采用拍照、CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)和分光光度計(jì)觀察細(xì)胞形態(tài)、活力、凋亡和胞內(nèi)ROS水平的變化。 結(jié)果：90μM阿司匹林處理PIG1細(xì)胞24h后，細(xì)胞內(nèi)的p-Nrf2和Nrf2顯著增多，HO-1mRNA顯著升高，NQO-1、GCLC、GCLM mRNA無(wú)顯著變化。特異性Nrf2siRNA轉(zhuǎn)染PIG1細(xì)胞后，90μM阿司匹林預(yù)處理PIG1細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)、活力、凋亡和胞內(nèi)ROS水平與H_2O_2處理組無(wú)顯著變化，阿司匹林細(xì)胞保護(hù)作用消失。 結(jié)論：低劑量阿司匹林（約等于人體服用100-1000mg阿司匹林后的最高血藥濃度）對(duì)正常人黑素細(xì)胞無(wú)明顯毒性；低劑量阿司匹林能夠保護(hù)黑素細(xì)胞對(duì)抗H_2O_2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，降低胞內(nèi)的ROS；低劑量阿司匹林通過(guò)激活Nrf2-ARE通路及誘導(dǎo)HO-1表達(dá)，起到保護(hù)黑素細(xì)胞對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷的作用。
【關(guān)鍵詞】：白癜風(fēng) 氧化應(yīng)激 H_2O_2 黑素細(xì)胞 阿司匹林
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R758.41
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-37
• 第一部分 阿司匹林在H2O2誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞系PIG1 細(xì)胞及原代培養(yǎng)的黑素細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用37-58
• 1 材料37-41
• 2 方法41-47
• 3 結(jié)果47-54
• 4 討論54-58
• 第二部分 阿司匹林保護(hù)人黑素細(xì)胞對(duì)抗 H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究58-79
• 1 材料58-63
• 2 方法63-70
• 3 結(jié)果70-75
• 4 討論75-79
• 小結(jié)79-81
• 參考文獻(xiàn)81-89
• 附錄89-91
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果91-92
• 致謝92-93

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 周舟;高天文;;氧化應(yīng)激與白癜風(fēng)[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2009年07期

2 徐昱,嚴(yán)淑賢,胡躍;白癜風(fēng)患者皮損與正常皮膚皰液中抗氧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化物水平比較[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2004年04期

3 高天文,李強(qiáng),李春英,李志強(qiáng),王秋楓;白癜風(fēng)2008例臨床分析[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2002年05期

4 陳陽(yáng);黃維國(guó);查定軍;邱建華;王錦玲;沙素華;Jochen Schacht;;阿司匹林預(yù)防慶大霉素耳毒性的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)[J];中華耳科學(xué)雜志;2008年02期

5 何志旭,廖清奎,徐學(xué)聚,羅春華,周同甫,李欽伯,李豐益,金仲和;阿司匹林誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞鐵蛋白表達(dá)與抗氧化損傷作用的研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2001年09期

  本文關(guān)鍵詞：阿司匹林在H_2O_2誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 白癜風(fēng) 氧化應(yīng)激 H_2O_2 黑素細(xì)胞 阿司匹林

本文編號(hào)：513750