本文關(guān)鍵詞：ADMA對人皮膚成纖維細(xì)胞衰老的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 研究非對稱性二甲基精氨酸(asymmetrical dimethylarginine, ADMA)對人皮膚成纖維細(xì)胞(Human skin fibroblasts, HSF)衰老的影響及其可能機(jī)制。 方法： 1.用高效液相色譜(HPLC)法測定自然衰老和光老化皮膚組織和成纖維細(xì)胞中ADMA的濃度。 2.原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,MTT比色法評價ADMA對HSF增殖的影響,確定最佳藥物處理濃度。 3.不同濃度ADMA(10,30,501μM)作用于HSF,48小時后,用p-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測衰老相關(guān)p-半乳糖苷酶活性,活性氧檢測試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)濃度,免疫印跡法(western-bolt)檢測磷酸化p38MAPK,衰老相關(guān)蛋白P16、MMP-1的改變。 4.預(yù)先加入P38抑制劑SB203580(10μM)或抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)(10μM)1小時后,再加入ADMA(50μM)處理,上述同樣的方法檢測以上指標(biāo)。 結(jié)果： 1.年老組皮膚組織和成纖維細(xì)胞中ADMA含量均明顯高于兒童組(P0.05),同一人中曝光部位皮膚組織中ADMA含量明顯高于非曝光部位(P0.05),UVA照射后HSF中ADMA的含量明顯升高(P0.05)。 2. ADMA能抑制人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖,且隨濃度增加,抑制能力也相應(yīng)增強(qiáng),IC50=51.47±1.013μM。 3.不同濃度ADMA(10,30,50μM)處理HSF48小時后,細(xì)胞密度減少、細(xì)胞變大變圓,p-半乳糖苷酶染色率、衰老相關(guān)蛋白P16均隨ADMA濃度的增加而增加(P0.05),細(xì)胞出現(xiàn)衰老表型。 4.不同濃度ADMA(10,30,50μM)處理HSF后,ROS水平隨濃度增加而增加,磷酸化p38MAPK,MMP-1蛋白亦隨濃度逐漸增加(P0.05)。 5.P38抑制劑SB203580(10μM)能顯著下降A(chǔ)DMA所致的p-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白及MMP-1蛋白的升高；抗氧化劑NAC(10μM)亦能明顯下降A(chǔ)DMA所致的p-半乳糖苷酶染色率、P16蛋白、ROS濃度、磷酸化p38MAPK及MMP-1蛋白的升高。 結(jié)論： 1.自然衰老和光老化皮膚組織及成纖維細(xì)胞中ADMA的含量顯著上升,ADMA在皮膚衰老過程中起重要作用； 2. ADMA能通過促進(jìn)ROS的產(chǎn)生、激活p38MAPK磷酸化、從而促進(jìn)MMP1的生成而誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞的衰老。
【關(guān)鍵詞】：ADMA 皮膚衰老 ROS p38MAPK MMP-1
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R751
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• ~.略語表9-10
• 前言10-13
• 第一章 材料和方法13-25
• 1.1 研究對象13
• 1.2 主要試劑盒儀器13-15
• 1.3 主要試劑配制15-18
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法18-24
• 1.5 統(tǒng)計分析24-25
• 第二章 結(jié)果25-33
• 2.1 自然衰老皮膚組織及成纖維細(xì)胞中ADMA含量的變化25
• 2.2 光老化皮膚組織及成纖維細(xì)胞中ADMA含量的變化25-26
• 2.3 ADMA對HSF細(xì)胞增殖的影響26-27
• 2.4 ADMA對HSF細(xì)胞衰老的影響27-28
• 2.5 ADMA對HSF細(xì)胞ROS、磷酸化P-38MAPK、MMP-1的影響28-29
• 2.6 加入P38抑制劑SB203580或抗氧化劑NAC后磷酸化P-38MAPK,P-MAPKAPK2的改變并確定最適合的抑制劑濃度29-30
• 2.7 加入P38抑制劑SB203580或抗氧化劑NAC后ROS、磷酸化P-38MAPK,P-MAPKAPK2,MMP-1的變化30-31
• 2.8 加入P38抑制劑SB203580或抗氧化劑NAC后衰老指標(biāo)的變化31-33
• 第三章 討論33-36
• 第四章 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 綜述42-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張頻捷;朱立新;耿小平;;p38 MAPK信號傳導(dǎo)通路及其抑制劑的研究現(xiàn)狀[J];安徽醫(yī)藥;2010年05期

2 張奇;白曉東;付小兵;;p38MAPK信號通路研究進(jìn)展[J];感染 炎癥 修復(fù);2005年02期

3 劉棟;;衰老與一氧化氮[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);1999年05期

4 李金成;昌蘭;呂冬;姜德建;譚德明;;非對稱二甲基精氨酸對肝星狀細(xì)胞的激活作用及其機(jī)制[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

5 姜德建,李元建;非對稱性二甲基精氨酸——新的心血管疾病危險因子和藥物防治靶點(diǎn)[J];中國動脈硬化雜志;2005年03期

6 劉瑋;皮膚光老化[J];臨床皮膚科雜志;2003年07期

7 劉娜,王學(xué)民;光老化的皮膚改變及其機(jī)制[J];嶺南皮膚性病科雜志;2005年02期

8 袁瓊;吳艷;劉思妤;胡長平;彭軍;李元建;;1型糖尿病大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老與非對稱二甲基精氨酸濃度升高有關(guān)[J];中國動脈硬化雜志;2010年02期

9 李衛(wèi),亓發(fā)芝;皮膚衰老及抗衰老研究進(jìn)展[J];中華醫(yī)學(xué)美學(xué)美容雜志;2004年01期

10 歐芹;王雅麗;魏曉東;張玉成;;山茱萸多糖對HDF細(xì)胞β-半乳糖苷酶及p16表達(dá)的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2007年04期

  本文關(guān)鍵詞：ADMA對人皮膚成纖維細(xì)胞衰老的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：502166