發(fā)布時間：2017-06-04 23:02

  本文關(guān)鍵詞：不同劑量中波紫外線對HaCaT細(xì)胞p62及自噬體形成關(guān)鍵基因Beclin-1、Atg12和Atg3的調(diào)控效應(yīng)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景中波紫外線主要作用于表皮,角質(zhì)形成細(xì)胞是其重要的靶細(xì)胞,可以引起角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)的蛋白損傷,而有效地清除損傷蛋白對于維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定至關(guān)重要。p62是一種具有多種生物學(xué)功能的泛素結(jié)合蛋白,其C端的泛素相關(guān)(ubiquitin-associated, UBA)結(jié)合區(qū)可識別錯誤折疊蛋白的泛素部位,p62通過LC3相互作用區(qū)域(LC3-interacting region, LIR)與LC3結(jié)合,并在泛素化蛋白上共定位,形成的多聚泛素化蛋白-p62復(fù)合物通過自噬途徑降解。因此p62是聯(lián)系泛素化蛋白和自噬途徑重要的中介物。自噬是廣泛存在于真核細(xì)胞的生理現(xiàn)象,其主要功能是降解變性蛋白質(zhì)及受損細(xì)胞器。研究發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞也存在自噬現(xiàn)象,并可減輕角質(zhì)形成細(xì)胞的炎癥。然而,UVB損傷是否可以誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞的p62蛋白表達變化,以及損傷細(xì)胞中p62的表達差異是否與自噬體形成產(chǎn)生生物學(xué)關(guān)聯(lián),這些問題的答案目前尚不得而知。在這個研究中,我們對此問題做出初步探索。通過我們的研究有助于初步明確以紫外線損傷是否對角質(zhì)形成細(xì)胞中p62為核心的蛋白降解途徑產(chǎn)生影響。 目的探討不同劑量中波紫外線(UVB)照射培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞后不同時間點對p62、Beclin-1、Atgl2和Atg3蛋白表達水平的調(diào)控效應(yīng)。 方法4.5、10和50mJ/cm2UVB照射HaCaT細(xì)胞后4h,使用透射電鏡檢測細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。4.5、10和50mJ/cm2UVB照射HaCaT細(xì)胞,照射后加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4h和12h,同時設(shè)相同處理但不照射UVB的細(xì)胞為對照細(xì)胞。另設(shè)觀察組,在照射后立即(包括對照細(xì)胞),使用含蛋白酶抑制劑E64D(10μg/L)和胃酶抑素(10μg/L)的培養(yǎng)基孵育4h和12h,以阻斷對p62的降解。使用Western印跡法測定HaCaT細(xì)胞p62、Beclin-1、Atgl2和Atg3蛋白的表達水平。 結(jié)果4.5、10mJ/cm2UVB照射后,HaCaT細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)自噬體結(jié)構(gòu),并且這種結(jié)構(gòu)在4.5mJ/cm2照射后更為多見,然而,50mJ/cm2UVB照射后,細(xì)胞中罕有此類結(jié)構(gòu)。50mJ/cm2UVB照射HaCaT細(xì)胞后4h,p62表達水平(p62與內(nèi)參的比值為0.473±0.022)較對照細(xì)胞(0.246±0.038)升高(t=15.27,P0.05)；阻斷溶酶體后,細(xì)胞新生p62水平(0.445±0.035)與阻斷溶酶體的對照(0.244±0.016)相比,仍為上調(diào)(t=7.62,P0.05)。在4.5mJ/cm2UVB照射細(xì)胞后12h,與對照(0.254±0.035)相比,HaCaT細(xì)胞p62表達上調(diào)(0.497±0.047,t=22.89,P0.05)；阻斷溶酶體后,與阻斷溶酶體的對照(0.257±0.025)相比,p62表達水平仍然上調(diào)(0.548±0.051,t=17.42,P0.05)。4.5mJ/cm2和50mJ/cm2UVB照身寸后4h和12h,對照細(xì)胞和照射細(xì)胞間的Beclin-1、Atgl2和Atg3的表達差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),阻止溶酶體對自噬體內(nèi)容物的降解也未能發(fā)現(xiàn)Beclin-1、Atg12和Atg3的表達差異(P0.05)。 結(jié)論小劑量UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞后有自噬體形成；而高劑量UVB照射細(xì)胞后沒有明顯的自噬體產(chǎn)生。p62表達在不同劑量UVB照射和照射后不同時間存在差異調(diào)控,并且這種調(diào)控效應(yīng)與自噬體形成可能沒有生物學(xué)聯(lián)系。
【關(guān)鍵詞】：紫外線 角蛋白細(xì)胞 原癌基因蛋白質(zhì)類 Beclin-1Atg12Atg3
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R751
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語/符號說明9-10
• 前言10-15
• 研究現(xiàn)狀、成果10-14
• 研究目的、方法14-15
• 1、材料15-16
• 1.1 、細(xì)胞15
• 1.2 、試劑15-16
• 1.3 、儀器16
• 2、方法16-24
• 2.1 、細(xì)胞培養(yǎng)16-18
• 2.2 、UVB照射18-19
• 2.3 、透射電鏡分析19
• 2.4 、Western Blot實驗19-24
• 3、結(jié)果24-34
• 3.1 、常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變24-25
• 3.2 、透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)25-29
• 3.3 、UVB照射對HaCaT細(xì)胞p62表達的調(diào)控29-32
• 3.4 、4.5 mJ/cm2和50 mJ/cm2UVB對HaCaT細(xì)胞Beclin-1、Atg12和Atg3的表達調(diào)控32-34
• 4、討論34-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-42
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明42-43
• 綜述、x線治療某些皮膚病的研究進展43-51
• 參考文獻49-51
• 致謝51-53
• 附件53

【共引文獻】

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