目的：P53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating protein2of p53，ASPP2）是二十一世紀(jì)初發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞凋亡有關(guān)的蛋白，屬于P53家族。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)ASPP2有多種生物活性，它能促進(jìn)凋亡基因轉(zhuǎn)錄從而發(fā)揮抑制腫瘤的作用。近年來發(fā)現(xiàn)它不僅與凋亡有關(guān)，而且能與Par3協(xié)同調(diào)節(jié)細(xì)胞極性。本研究采用小干擾RNA(small interfering RNA)技術(shù)下調(diào)人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株（thespontaneously immortalized human skin keratinocyte cell line，HaCaT cell）中ASPP2基因表達(dá)，檢測HaCaT細(xì)胞遷移、增殖的變化，初步探究ASPP2蛋白在HaCaT細(xì)胞中所起的生物學(xué)作用，為銀屑病皮損形成的深入研究提供依據(jù)。 方法：①我們應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體LipofectaminTM2000瞬時轉(zhuǎn)染法，將四種不同的濃度的siRNA分別轉(zhuǎn)染至人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株內(nèi)，通過蛋白印跡的方法測定各組細(xì)胞中ASPP2蛋白表達(dá)的情況來檢測轉(zhuǎn)染效率，選擇最佳轉(zhuǎn)染效率。②將細(xì)胞用2種不同的siRNA和對照siRNA...

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
第一章 材料與方法
    1.1 細(xì)胞和 siRNA 來源
    1.2 主要試劑
    1.3 主要試劑盒和設(shè)備
    1.4 試驗方法
        1.4.1 主要試劑組成成分
        1.4.2 對 HaCaT 細(xì)胞進(jìn)行蛋白 ASPP2 的干擾
        1.4.3 細(xì)胞培養(yǎng)條件
        1.4.4 細(xì)胞劃痕實驗
        1.4.5 溶解細(xì)胞提取蛋白
        1.4.6 BCA 法蛋白定量
        1.4.7 SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝膠電泳
        1.4.8 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)到 NC 膜
        1.4.9 Western blot
        1.4.10 二維培養(yǎng)細(xì)胞的免疫熒光
        1.4.11 細(xì)胞生長曲線的繪制
    1.5 統(tǒng)計處理
第二章 實驗結(jié)果
    2.1 確定 HaCaT 細(xì)胞轉(zhuǎn)染條件
    2.2 蛋白 ASPP2 表達(dá)降低后對 HaCaT 細(xì)胞遷移的影響
        2.2.1 蛋白 ASPP2 siRNA 轉(zhuǎn)染后 HaCaT 細(xì)胞劃痕實驗
        2.2.2 確定劃痕實驗后 HaCaT 細(xì)胞中蛋白 ASPP2 的表達(dá)
    2.3 蛋白 ASPP2 在 HaCaT 細(xì)胞遷移過程中的定位
    2.4 蛋白 ASPP2 表達(dá)降低后對 HaCaT 細(xì)胞增殖的影響
        2.4.1 蛋白 ASPP2 siRNA 轉(zhuǎn)染后 HaCaT 細(xì)胞增殖實驗
        2.4.2 確定轉(zhuǎn)染后 HaCaT 細(xì)胞中蛋白 ASPP2 在不同時間點的表達(dá)
第三章 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況
致謝
個人簡歷



本文編號：4042956