本文關(guān)鍵詞：瘦素對角質(zhì)形成細胞增殖分化角蛋白的影響及其分子信號通路的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：銀屑病是臨床上常見的慢性炎癥性皮膚病，由T細胞（Th細胞）協(xié)同角質(zhì)形成細胞（Keratinocyte, KC）過度增殖性為特征，其發(fā)病機制目前尚未完全闡明，可能是由一系列因素相互作用的多基因遺傳疾病，包括遺傳因素、免疫因素、環(huán)境因素、肥胖等。 近來臨床觀察研究發(fā)現(xiàn)，銀屑病伴發(fā)肥胖的比例增高，針對肥胖治療后有助于銀屑病好轉(zhuǎn)，提示肥胖與銀屑病密切相關(guān)。瘦素是參與機體代謝的脂肪因子，以往研究表明瘦素與其受體在銀屑病皮損中高表達，瘦素可能與銀屑病的表皮過度增殖相關(guān)，，提示瘦素可能為銀屑病與肥胖的內(nèi)在重要分子聯(lián)系。 在正常皮膚中，KC分化相關(guān)性角蛋白K1和K10占主導地位，增殖相關(guān)性角蛋白K16和K17幾乎不表達或者少量表達，而在銀屑病皮損中，KC角蛋白譜發(fā)生一定的改變，K16和K17在皮損處高表達，且與PASI呈正相關(guān)關(guān)系，而K1和K10則低表達。 我們前期研究發(fā)現(xiàn)，瘦素在銀屑病患者皮損中過度表達，且瘦素對KC活性及細胞周期、細胞增殖均產(chǎn)生影響，并能刺激KC產(chǎn)生銀屑病相關(guān)炎癥因子，包括IL-6、IL-8、TNF-α等，以上研究結(jié)果表明瘦素參與了銀屑病表皮過度增殖的病理生理過程，但瘦素在銀屑病病理生理過程中的作用尚不明確。 目的 本研究的目的在于通過觀察瘦素對KC角蛋白（K1、K10，K16、K17）表達的影響及其分子調(diào)控為進一步闡明瘦素影響KC增殖在銀屑病發(fā)病機制中奠定基礎(chǔ)。 方法 體外培養(yǎng)HaCaT細胞，用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）和細胞免疫熒光染色分別檢測K1、K10、K16、K17mRNA和蛋白水平的表達，采用Western blot篩選瘦素處理后可能出現(xiàn)的信號通路分子改變，并用相應(yīng)的通路抑制劑和siRNA處理證實瘦素調(diào)控角蛋白表達的信號通路。 結(jié)果 1、瘦素對HaCaT細胞增殖分化角蛋白表達的影響：1）mRNA結(jié)果：與陰性對照組比較，瘦素組K1、K10mRNA表達量下調(diào)，K16、K17mRNA均出現(xiàn)不同程度的升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P 0.05），且濃度為100ng/mL瘦素組K16、K17mRNA上調(diào)顯著；2）蛋白結(jié)果：與陰性對照組相比較，瘦素組K1、K10蛋白表達量降低，K16、K17蛋白均出現(xiàn)不同程度的升高，且濃度為100ng/mL瘦素組K16、K17蛋白顯著增加；3）免疫熒光結(jié)果：瘦素組紅色熒光K16、K17表達與陰性對照組相比顯著增加，而K1、K10紅色熒光表達明顯降低，與RT-PCR、Western blot結(jié)果相符。 2、瘦素調(diào)控HaCaT細胞分子信號通路：用100ng/mL瘦素分別刺激HaCaT細胞5min、10min、20min、40min、80min，發(fā)現(xiàn)瘦素可以激活JAK-STAT3、ERK1/2分子信號通路。 3、分子信號通路抑制劑對瘦素調(diào)控HaCaT細胞增殖分化角蛋白的影響：1）mRNA結(jié)果：與單純使用瘦素組相比較，抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17mRNA顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P 0.05）；2）蛋白結(jié)果：與單純使用瘦素組相比較，抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17蛋白顯著降低；3）免疫熒光結(jié)果：抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17表達的紅色熒光較瘦素組明顯減弱，與RT-PCR、Western blot結(jié)果相符。 4.、進一步驗證分子信號通路siRNA對瘦素調(diào)控HaCaT細胞增殖角蛋白的影響：1）mRNA結(jié)果：siRNA和瘦素聯(lián)合處理組與單純使用瘦素組相比較K16、K17mRNA顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P 0.01）；2）蛋白結(jié)果：siRNA成功阻斷STAT3、ERK1/2分子通路，且K16、K17蛋白明顯低于瘦素組。 結(jié)論 本研究證明瘦素可以誘導HaCaT細胞高表達K16、K17，低表達K1、K10，其機制可能與STAT3、ERK1/2分子信號通路有關(guān)，表明瘦素可影響銀屑病角質(zhì)形成細胞的增殖，抑制角質(zhì)形成細胞的分化，提示瘦素可能通過改變KC增殖分化角蛋白的水平參與肥胖銀屑病的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 肥胖 瘦素 角蛋白 STAT3 ERK1/2
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-14
• 文獻回顧14-25
• 一、銀屑病14-17
• 二、瘦素17-22
• 三、瘦素與銀屑病22-25
• 1 材料與儀器25-30
• 2 實驗方法30-42
• 2.1 HaCaT 細胞培養(yǎng)30
• 2.2 RT- PCR 檢測不同濃度的瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達的影響30-33
• 2.3 蛋白免疫印記法檢測不同濃度的瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達的影響33-35
• 2.4 RT-PCR 檢測 100ng/mL 瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達的影響35-36
• 2.5 蛋白免疫印跡法檢測 100ng/mL 瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達的影響36
• 2.6 細胞免疫熒光染色檢測 100ng/mL 瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達的影響36-37
• 2.7 蛋白免疫印跡法檢測瘦素對 HaCaT 細胞的分子信號通路的影響37-38
• 2.8 RT-PCR 檢測分子信號通路抑制劑對瘦素調(diào)控 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達的影響38-39
• 2.9 蛋白免疫印跡法檢測分子信號通路抑制劑對瘦素調(diào)控 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達的影響39-40
• 2.10 細胞免疫熒光染色檢測分子信號通路抑制劑對瘦素調(diào)控 HaCaT 細胞K1、K10、K16、K17 表達的影響40
• 2.11 RT-PCR 檢測分子信號通路阻斷劑對瘦素調(diào)控 HaCaT 細胞 K16、K17 mRNA 表達的影響40-41
• 2.12 蛋白免疫印跡法檢測信號通路阻斷劑對瘦素調(diào)控 HaCaT 細胞 K16、K17 蛋白表達的影響41-42
• 2.13 統(tǒng)計學分析42
• 3 結(jié)果42-51
• 3.1 不同濃度的瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達的影響42
• 3.2 不同濃度的瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達的影響42-43
• 3.3 100ng/mL 瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17mRNA 及蛋白表達影響43-45
• 3.4 細胞免疫熒光測 100ng/mL 瘦素對 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17蛋白表達的影響45-46
• 3.5 100ng/mL 瘦素對 HaCaT 細胞分子信號通路蛋白的影響46-47
• 3.6 STAT3 抑制劑和 ERK1/2 抑制劑對瘦素刺激 HaCaT 細胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達的影響47-48
• 3.7 STAT3 抑制劑和 ERK1/2 抑制劑對瘦素刺激 HaCaT 細胞表達 K1、K10、K16、K17 蛋白的影響48-49
• 3.8 細胞免疫熒光測 STAT3 抑制劑和 ERK1/2 抑制劑對瘦素刺激 HaCaT 細胞K1、K10、K16、K17 蛋白表達的影響49
• 3.9 STAT3 阻斷劑和 ERK1/2 阻斷劑對瘦素刺激 HaCaT 細胞 K16、K17 mRNA 表達的影響49-50
• 3.10 STAT3 阻斷劑和 ERK1/2 阻斷劑對瘦素刺激 HaCaT 細胞 K16、K17 蛋白表達的影響50-51
• 4 討論51-57
• 小結(jié)57-58
• 參考文獻58-68
• 個人簡歷和研究成果68-69
• 致謝69

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱永香;王倩;王爽;于瑋;南瑛;曹健;;肥胖與食欲調(diào)控機制[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2013年05期

2 劉世學;李可;謝斌;張厚彬;;肥胖對大鼠前列腺炎性反應(yīng)的影響及其相關(guān)機制[J];重慶醫(yī)學;2014年04期

3 黃艷娜;蔣欽楊;;影響豬肉質(zhì)性狀主要候選基因的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年02期

4 Mariam Abdulrhman Al-Fadhli;Mohammad Ahmed Saraya;Jafar Abdulrida Qasem;;Evaluation of leptin,interleukin-1 beta and tumor necrosis factor alpha in serum of malaria patients as prognostic markers of treatment outcome[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2014年06期

5 王嘉;薛敏;吳秀峰;韓芳;鄭銀樺;;魚類對不同蛋白質(zhì)源飼料選擇性攝食調(diào)控機制的研究進展[J];動物營養(yǎng)學報;2014年04期

6 鄒寧;李曉環(huán);刁敬軍;肖緒武;;細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子3基因沉默對高脂喂養(yǎng)肥胖幼年大鼠的影響[J];中國兒童保健雜志;2014年06期

7 尚進;肖延風;;巨大胎兒慢性炎性因子水平的研究[J];中國兒童保健雜志;2014年08期

8 Guo-Rui Gao;Jia-Li Liu;De-Sheng Mei;Jian Ding;Ling-Hua Meng;Wen-Hu Duan;;Design,synthesis and biological evaluation of acylhydrazone derivatives as PI3K inhibitors[J];Chinese Chemical Letters;2015年01期

9 石云良;李莉萍;王瑞;梁萬文;甘西;黃婷;李健;黃維義;陳明;;羅非魚源Ia和Ib血清型無乳鏈球菌可溶性蛋白差異分析[J];大連海洋大學學報;2015年02期

10 譚新睿;張美真;李敏;肖延風;;肥胖兒童黑色棘皮病與脂肪因子和代謝綜合征的關(guān)系[J];中國當代兒科雜志;2015年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 韓兆勇;;脂聯(lián)素、C-反應(yīng)蛋白、降鈣素原、肺炎嚴重程度評分對重癥社區(qū)獲得性肺炎診斷價值的比較[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第十一屆組稿會暨第四屆急診醫(yī)學青年論壇論文匯編[C];2012年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史曉蔚;角蛋白17（K17）作為自身抗原銀屑病發(fā)病機制中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

2 蘇媛;牙周炎對肥胖大鼠脂肪組織炎癥狀態(tài)的影響及其促胰島素抵抗機制初探[D];南方醫(yī)科大學;2012年

3 臧凌鶴;冬凌草甲素增強U937細胞吞噬凋亡小體的機制研究[D];沈陽藥科大學;2012年

4 蘇蘭利;leptin對雞胚尿囊膜血管生成的影響及其機理[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2012年

5 祝昊丹;豬鏈球菌9型毒力基因的篩選及鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2011年

6 謝婧嫻;妊娠期缺氧對子代大鼠胰島素抵抗的影響及其機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2013年

7 劉佳;小鼠肝細胞AMPK相關(guān)microRNAs的篩選及功能研究[D];天津醫(yī)科大學;2013年

8 馮燕艷;新疆維吾爾銀屑病候選易感基因多態(tài)性及候選易感基因ERAP1表達研究[D];安徽醫(yī)科大學;2012年

9 朱曉琳;脂肪細胞因子對氣道上皮炎癥及免疫應(yīng)激功能調(diào)控[D];中南大學;2013年

10 班謙;雞Leptin受體基因調(diào)控途徑及功能研究[D];石河子大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬鐵牛;尋常型銀屑病患者皮損真皮內(nèi)免疫細胞的研究[D];天津醫(yī)科大學;2002年

2 張文霞;玫瑰糠疹患者人類皰疹病毒-7感染及外周血T淋巴細胞亞群變化研究[D];青島大學;2006年

3 萬明;調(diào)節(jié)性B細胞在銀屑病發(fā)病中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2012年

4 胡珊;化膿性鏈球菌htrA與蛋白分泌相關(guān)性初步研究[D];西南交通大學;2013年

5 王志寬;原發(fā)性高血壓患者代謝綜合征各組分與頸動脈內(nèi)膜中層厚度的相關(guān)性研究[D];鄭州大學;2013年

6 崔光雪;尋常型銀屑病患者外周血單個核細胞轉(zhuǎn)錄因子PPARγ mRNA的表達[D];河北醫(yī)科大學;2013年

7 郭安君;急性冠脈綜合征患者血清趨化素、網(wǎng)膜素的變化及意義[D];河北醫(yī)科大學;2013年

8 孫昕祈;苦丁冬青苦丁茶中綠原酸的分離純化及抗肥胖作用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2012年

9 Kadeer Luqmaan Farsheed;研究三種降糖方案進行短期強化血糖控制對新診斷2型糖尿病患者血清脂聯(lián)素及抵抗素的影響[D];大連醫(yī)科大學;2012年

10 弓彥;鵝FAS、OBR、THRSPa和Apo-AI基因多態(tài)性及FAS和Apo-B基因在填詞鵝中表達模式的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2011年

  本文關(guān)鍵詞：瘦素對角質(zhì)形成細胞增殖分化角蛋白的影響及其分子信號通路的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：396704