本文關(guān)鍵詞：瘦素對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖分化角蛋白的影響及其分子信號(hào)通路的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：銀屑病是臨床上常見的慢性炎癥性皮膚病，由T細(xì)胞（Th細(xì)胞）協(xié)同角質(zhì)形成細(xì)胞（Keratinocyte, KC）過(guò)度增殖性為特征，其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明，可能是由一系列因素相互作用的多基因遺傳疾病，包括遺傳因素、免疫因素、環(huán)境因素、肥胖等。 近來(lái)臨床觀察研究發(fā)現(xiàn)，銀屑病伴發(fā)肥胖的比例增高，針對(duì)肥胖治療后有助于銀屑病好轉(zhuǎn)，提示肥胖與銀屑病密切相關(guān)。瘦素是參與機(jī)體代謝的脂肪因子，以往研究表明瘦素與其受體在銀屑病皮損中高表達(dá)，瘦素可能與銀屑病的表皮過(guò)度增殖相關(guān)，，提示瘦素可能為銀屑病與肥胖的內(nèi)在重要分子聯(lián)系。 在正常皮膚中，KC分化相關(guān)性角蛋白K1和K10占主導(dǎo)地位，增殖相關(guān)性角蛋白K16和K17幾乎不表達(dá)或者少量表達(dá)，而在銀屑病皮損中，KC角蛋白譜發(fā)生一定的改變，K16和K17在皮損處高表達(dá)，且與PASI呈正相關(guān)關(guān)系，而K1和K10則低表達(dá)。 我們前期研究發(fā)現(xiàn)，瘦素在銀屑病患者皮損中過(guò)度表達(dá)，且瘦素對(duì)KC活性及細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖均產(chǎn)生影響，并能刺激KC產(chǎn)生銀屑病相關(guān)炎癥因子，包括IL-6、IL-8、TNF-α等，以上研究結(jié)果表明瘦素參與了銀屑病表皮過(guò)度增殖的病理生理過(guò)程，但瘦素在銀屑病病理生理過(guò)程中的作用尚不明確。 目的 本研究的目的在于通過(guò)觀察瘦素對(duì)KC角蛋白（K1、K10，K16、K17）表達(dá)的影響及其分子調(diào)控為進(jìn)一步闡明瘦素影響KC增殖在銀屑病發(fā)病機(jī)制中奠定基礎(chǔ)。 方法 體外培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞，用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）和細(xì)胞免疫熒光染色分別檢測(cè)K1、K10、K16、K17mRNA和蛋白水平的表達(dá)，采用Western blot篩選瘦素處理后可能出現(xiàn)的信號(hào)通路分子改變，并用相應(yīng)的通路抑制劑和siRNA處理證實(shí)瘦素調(diào)控角蛋白表達(dá)的信號(hào)通路。 結(jié)果 1、瘦素對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖分化角蛋白表達(dá)的影響：1）mRNA結(jié)果：與陰性對(duì)照組比較，瘦素組K1、K10mRNA表達(dá)量下調(diào)，K16、K17mRNA均出現(xiàn)不同程度的升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05），且濃度為100ng/mL瘦素組K16、K17mRNA上調(diào)顯著；2）蛋白結(jié)果：與陰性對(duì)照組相比較，瘦素組K1、K10蛋白表達(dá)量降低，K16、K17蛋白均出現(xiàn)不同程度的升高，且濃度為100ng/mL瘦素組K16、K17蛋白顯著增加；3）免疫熒光結(jié)果：瘦素組紅色熒光K16、K17表達(dá)與陰性對(duì)照組相比顯著增加，而K1、K10紅色熒光表達(dá)明顯降低，與RT-PCR、Western blot結(jié)果相符。 2、瘦素調(diào)控HaCaT細(xì)胞分子信號(hào)通路：用100ng/mL瘦素分別刺激HaCaT細(xì)胞5min、10min、20min、40min、80min，發(fā)現(xiàn)瘦素可以激活JAK-STAT3、ERK1/2分子信號(hào)通路。 3、分子信號(hào)通路抑制劑對(duì)瘦素調(diào)控HaCaT細(xì)胞增殖分化角蛋白的影響：1）mRNA結(jié)果：與單純使用瘦素組相比較，抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17mRNA顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）；2）蛋白結(jié)果：與單純使用瘦素組相比較，抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17蛋白顯著降低；3）免疫熒光結(jié)果：抑制劑和瘦素聯(lián)合處理組K1、K10、K16、K17表達(dá)的紅色熒光較瘦素組明顯減弱，與RT-PCR、Western blot結(jié)果相符。 4.、進(jìn)一步驗(yàn)證分子信號(hào)通路siRNA對(duì)瘦素調(diào)控HaCaT細(xì)胞增殖角蛋白的影響：1）mRNA結(jié)果：siRNA和瘦素聯(lián)合處理組與單純使用瘦素組相比較K16、K17mRNA顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.01）；2）蛋白結(jié)果：siRNA成功阻斷STAT3、ERK1/2分子通路，且K16、K17蛋白明顯低于瘦素組。 結(jié)論 本研究證明瘦素可以誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞高表達(dá)K16、K17，低表達(dá)K1、K10，其機(jī)制可能與STAT3、ERK1/2分子信號(hào)通路有關(guān)，表明瘦素可影響銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的分化，提示瘦素可能通過(guò)改變KC增殖分化角蛋白的水平參與肥胖銀屑病的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 肥胖 瘦素 角蛋白 STAT3 ERK1/2
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-14
• 文獻(xiàn)回顧14-25
• 一、銀屑病14-17
• 二、瘦素17-22
• 三、瘦素與銀屑病22-25
• 1 材料與儀器25-30
• 2 實(shí)驗(yàn)方法30-42
• 2.1 HaCaT 細(xì)胞培養(yǎng)30
• 2.2 RT- PCR 檢測(cè)不同濃度的瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達(dá)的影響30-33
• 2.3 蛋白免疫印記法檢測(cè)不同濃度的瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達(dá)的影響33-35
• 2.4 RT-PCR 檢測(cè) 100ng/mL 瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達(dá)的影響35-36
• 2.5 蛋白免疫印跡法檢測(cè) 100ng/mL 瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達(dá)的影響36
• 2.6 細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè) 100ng/mL 瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達(dá)的影響36-37
• 2.7 蛋白免疫印跡法檢測(cè)瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞的分子信號(hào)通路的影響37-38
• 2.8 RT-PCR 檢測(cè)分子信號(hào)通路抑制劑對(duì)瘦素調(diào)控 HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達(dá)的影響38-39
• 2.9 蛋白免疫印跡法檢測(cè)分子信號(hào)通路抑制劑對(duì)瘦素調(diào)控 HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達(dá)的影響39-40
• 2.10 細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)分子信號(hào)通路抑制劑對(duì)瘦素調(diào)控 HaCaT 細(xì)胞K1、K10、K16、K17 表達(dá)的影響40
• 2.11 RT-PCR 檢測(cè)分子信號(hào)通路阻斷劑對(duì)瘦素調(diào)控 HaCaT 細(xì)胞 K16、K17 mRNA 表達(dá)的影響40-41
• 2.12 蛋白免疫印跡法檢測(cè)信號(hào)通路阻斷劑對(duì)瘦素調(diào)控 HaCaT 細(xì)胞 K16、K17 蛋白表達(dá)的影響41-42
• 2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析42
• 3 結(jié)果42-51
• 3.1 不同濃度的瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達(dá)的影響42
• 3.2 不同濃度的瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 蛋白表達(dá)的影響42-43
• 3.3 100ng/mL 瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17mRNA 及蛋白表達(dá)影響43-45
• 3.4 細(xì)胞免疫熒光測(cè) 100ng/mL 瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17蛋白表達(dá)的影響45-46
• 3.5 100ng/mL 瘦素對(duì) HaCaT 細(xì)胞分子信號(hào)通路蛋白的影響46-47
• 3.6 STAT3 抑制劑和 ERK1/2 抑制劑對(duì)瘦素刺激 HaCaT 細(xì)胞 K1、K10、K16、K17 mRNA 表達(dá)的影響47-48
• 3.7 STAT3 抑制劑和 ERK1/2 抑制劑對(duì)瘦素刺激 HaCaT 細(xì)胞表達(dá) K1、K10、K16、K17 蛋白的影響48-49
• 3.8 細(xì)胞免疫熒光測(cè) STAT3 抑制劑和 ERK1/2 抑制劑對(duì)瘦素刺激 HaCaT 細(xì)胞K1、K10、K16、K17 蛋白表達(dá)的影響49
• 3.9 STAT3 阻斷劑和 ERK1/2 阻斷劑對(duì)瘦素刺激 HaCaT 細(xì)胞 K16、K17 mRNA 表達(dá)的影響49-50
• 3.10 STAT3 阻斷劑和 ERK1/2 阻斷劑對(duì)瘦素刺激 HaCaT 細(xì)胞 K16、K17 蛋白表達(dá)的影響50-51
• 4 討論51-57
• 小結(jié)57-58
• 參考文獻(xiàn)58-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果68-69
• 致謝69

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：396704