目的:mTOR信號與細胞的增殖、生長、代謝等活性密切相關(guān),更為重要的是mTOR是自噬調(diào)控信號中的重要組成部分,而自噬同樣與細胞的增殖等生物學功能上密切相關(guān)。然而,mTOR/自噬信號通路對瘢痕疙瘩的作用仍未闡明。本研究分析瘢痕疙瘩患者中mTOR信號通路的活化情況及細胞的自噬水平,探討mTOR抑制劑雷帕霉素(Rapamycin)和KU-0063794在瘢痕疙瘩成纖維細胞中的生物學效應(yīng),進一步探究自噬機制在mTOR抑制劑發(fā)揮功能效應(yīng)中的作用。方法:1.分別在瘢痕疙瘩組織水平及其成纖維細胞水平,采用免疫組織化學染色及Western Blot的方法檢測mTOR和下游信號分子S6以及自噬相關(guān)蛋白LC3、ULKI、ATG7、ATG9A、ATG12的表達情況;細胞進行吖啶橙(AO)熒光染色,觀察胞漿內(nèi)酸性囊泡的形成情況。2.以瘢痕疙瘩成纖維細胞為研究對象,分別給予mTOR抑制劑處理,包括100 nM雷帕霉素或5 μM KU-0063794刺激不同時間點,分別通過CCK-8實驗及BrdU摻入實驗檢測其對細胞增殖的影響;Annexin V-EGFP/PI雙染通過流式細胞術(shù)檢測其對細胞凋亡的影響,同時,We...

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【學位級別】：博士

圖２?ｍＴＯＲ信號通路摘自ＣＳＴ公司官方網(wǎng)站ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌ．ｃｏｍ??８??

圖３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ方法檢測正常成纖維細胞及瘢痕疙瘩成纖維細胞中ｍＴＯＲ及下游??效應(yīng)分子的表達??

圖５瘢痕疙瘩組織水平ｍＴＯＲ通路表達情況Ａ．免疫組織化學染色的方法原位標??記ｍＴＯＲ及下游效應(yīng)分子Ｓ６及其磷酸化形式的表達情況（１０〇ｘ）?Ｂ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??

圖６瘢痕疙瘩組織中檢測自噬標志蛋白的表達情況ａ．免疫組織化學染色法檢測??

本文編號：3883732