目的探討微小RNA-363-3p(miR-363-3p)對10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物(PTEN)的靶向調(diào)控作用及黑色素瘤細胞侵襲遷移的影響。方法采用Tumor-miRNA-Pathway網(wǎng)站在線分析miR-363-3p在皮膚黑色素瘤組織中的水平及參與調(diào)控的信號通路情況;熒光定量PCR(q PCR)檢測正常人皮膚黑色素細胞PIG1和人惡性黑色素瘤細胞A375的miR-363-3p水平。脂質(zhì)體法向A375細胞轉(zhuǎn)染miR-363-3p抑制劑(Inhibitor組)和陰性無關(guān)序列(NC組)并設(shè)未轉(zhuǎn)染的細胞為對照組,q PCR檢測轉(zhuǎn)染48 h后的miR-363-3p水平以評估轉(zhuǎn)染效率,劃痕實驗和Transwell小室實驗檢測劃痕愈合率和穿膜細胞數(shù),Target Scan7.1在線預(yù)測miR-363-3p與PTEN的靶向結(jié)合序列并通過熒光素酶報告基因驗證兩者的靶向關(guān)系,q PCR和Western blotting檢測PTEN、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-3、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1(p-Akt1)水平。結(jié)果在線分析顯示皮膚黑色素瘤組織的m...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞和主要試劑
    1.2細胞培養(yǎng)和處理
    1.3 總RNA提取和q P CR
    1.4 遷移侵襲能力評估
    1.5 Western blotting
    1.6熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>    1.7 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 黑色素瘤組織的miR-363-3p水平
    2.2 黑色素瘤細胞的miR-363-3p水平
    2.3 下調(diào)miR-363-3p對A375細胞遷移的影響
    2.4 下調(diào)miR-363-3p對A375細胞侵襲的影響
    2.5 下調(diào)miR-363-3p對A375細胞MMP-3、p-PI3K和p-Akt水平的影響
    2.6 miR-363-3p和PTEN的靶向關(guān)系驗證
3 討論



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