本文關(guān)鍵詞：NB-UVB對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞角蛋白17表達(dá)的調(diào)控作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的銀屑病是一種臨床常見(jiàn)的易復(fù)發(fā)的慢性炎性皮膚病，其發(fā)病率較高，全球發(fā)病率約為0.1-4.0%。目前銀屑病的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，與環(huán)境和遺傳等多種因素有關(guān)。以往研究發(fā)現(xiàn)銀屑病相關(guān)角蛋白17（K17）在銀屑病皮損區(qū)呈特異性高表達(dá)，并且通過(guò)“K17-T細(xì)胞-細(xì)胞因子”自身免疫環(huán)路的形式參與銀屑病的發(fā)病和疾病的進(jìn)展。窄譜中波紫外線（NB-UVB）是臨床常用的治療銀屑病的方法，具有安全、有效、副作用小的特點(diǎn)。NB-UVB治療銀屑病的作用機(jī)制可能與誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡有關(guān)，但NB-UVB對(duì)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的具體作用，尤其對(duì)K17表達(dá)的影響尚不清楚，本研究通過(guò)體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)探討不同劑量NB-UVB對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞K17表達(dá)的調(diào)控作用及其機(jī)制。 方法不同劑量NB-UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞系，照射后培養(yǎng)12h用AnnexinV/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡，照射后6、12、24h用CCK8法測(cè)定細(xì)胞活性，透射電鏡觀察細(xì)胞骨架變化，Real-time PCR和Western-blot用于檢測(cè)K17mRNA和蛋白表達(dá)影響以及其對(duì)ERK1/2、STAT3、STAT1、P38、AKT、P65磷酸化活性的影響；分離培養(yǎng)原代角質(zhì)形成細(xì)胞，采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western印跡以及K17免疫熒光等方法對(duì)以上結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證；采用咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病樣皮炎小鼠模型，HE染色檢測(cè)不同劑量NB-UVB照射后表皮病理變化，熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western印跡、K17免疫熒光和免疫組化檢測(cè)NB-UVB對(duì)小鼠表皮組織K17mRNA和蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果細(xì)胞凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞耐受NB-UVB劑量范圍為0-400mJ/cm2，該劑量范圍內(nèi)進(jìn)一步行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)低劑量（100mJ/cm2）NB-UVB照射可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和K17表達(dá)，而高劑量（400mJ/cm2）NB-UVB照射則具有抑制細(xì)胞增殖和K17表達(dá)的作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05和P0.05）。通過(guò)對(duì)NB-UVB照射后相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行篩查，發(fā)現(xiàn)100mJ/cm2NB-UVB照射可以上調(diào)角質(zhì)形成細(xì)胞ERK1/2、STAT3的磷酸化水平，，而400mJ/cm2NB-UVB照射后ERK1/2、STAT3的磷酸化水平明顯下降，阻斷這一信號(hào)通路可以抑制低劑量NB-UVB對(duì)K17的上調(diào)。不同劑量NB-UVB照射對(duì)原代角質(zhì)形成細(xì)胞K17表達(dá)影響與HaCaT細(xì)胞系結(jié)果一致；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)篩選出BALB/C小鼠NB-UVB的最小紅斑量（MED）為350mJ/cm2，分別予低劑量（100mJ/cm2隔日一次）和高劑量（300mJ/cm2為初始照射劑量，隔日照射一次，每次增加50mJ/cm2，累計(jì)劑量1500mJ/cm2）NB-UVB照射，高劑量NB-UVB照射后表皮角化過(guò)度、角化不全等病理變化得到改善，K17表達(dá)明顯減低，低劑量NB-UVB照射對(duì)皮損改善和K17表達(dá)無(wú)明顯影響。 結(jié)論低劑量NB-UVB照射可刺激角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和K17表達(dá)，而較高劑量NB-UVB照射則抑制細(xì)胞增殖和K17表達(dá)，低劑量NB-UVB引起K17表達(dá)的上調(diào)現(xiàn)象受到ERK1/2及STAT3通路的調(diào)控，而高劑量NB-UVB則抑制ERK1/2及STAT3的活化，引起K17表達(dá)的進(jìn)一步降低，不同劑量NB-UVB照射可引起角質(zhì)形成細(xì)胞截然相反的生物學(xué)行為改變，這一現(xiàn)象與信號(hào)通路的狀態(tài)相關(guān)。臨床NB-UVB治療銀屑病常以最小紅斑量的50-70%為起始劑量，當(dāng)NB-UVB大于臨床起始照射劑量，可以抑制細(xì)胞增殖及K17表達(dá)，而低于臨床起始照射劑量時(shí)，不能起到抑制細(xì)胞增殖和K17表達(dá)的作用，與本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。我們的研究揭示了NB-UVB治療銀屑病的一個(gè)新的作用機(jī)制：一定劑量的NB-UVB可通過(guò)抑制角質(zhì)形成細(xì)胞中K17表達(dá)來(lái)發(fā)揮作用，而這種作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制ERK1/2及STAT3通路的活化來(lái)實(shí)現(xiàn)的。由此可見(jiàn)，NB-UVB可從不同的環(huán)節(jié)抑制或阻斷“K17-T細(xì)胞-細(xì)胞因子環(huán)路”，有效的阻止正反饋環(huán)路的形成，從而達(dá)到有效的治療銀屑病的目的。
【關(guān)鍵詞】：窄譜中波紫外線 角質(zhì)形成細(xì)胞 角蛋白17 細(xì)胞增殖 銀屑病
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-20
• 1 材料20-26
• 1.1 主要儀器設(shè)備20-21
• 1.2 主要試劑21-23
• 1.3 主要試劑配制23-26
• 2 方法26-38
• 2.1 HaCaT 細(xì)胞復(fù)蘇26-27
• 2.2 細(xì)胞傳代27
• 2.3 NB-UVB 照射方法及劑量選擇27
• 2.4 HaCaT 細(xì)胞耐受 NB-UVB 劑量范圍的確定27-28
• 2.5 細(xì)胞增殖的 CCK-8 檢測(cè)28
• 2.6 原代角質(zhì)形成細(xì)胞分離及培養(yǎng)28-29
• 2.7 NB-UVB 對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞 K17 mRNA 表達(dá)水平的影響29-31
• 2.8 NB-UVB 照射后角質(zhì)形成細(xì)胞 K17 蛋白的 Western-blot 檢測(cè)31-32
• 2.9 NB-UVB 照射后角質(zhì)形成細(xì)胞 K17 表達(dá)的細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)32-33
• 2.10 NB-UVB 照射后角質(zhì)形成細(xì)胞 ERK1/2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的 Western-blot 檢測(cè)33
• 2.11 NB-UVB 照射后角質(zhì)形成細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的 Western-blot 檢測(cè)33-34
• 2.12 抑制 ERK1/2 和 STAT3 活性后 NB-UVB 對(duì) K17 蛋白表達(dá)的影響34-35
• 2.13 銀屑病樣皮炎 Balb/c 小鼠模型的構(gòu)建35
• 2.14 Balb/c 小鼠照射 NB-UVB 的最小紅斑量測(cè)定35
• 2.15 銀屑病樣皮炎 Balb/c 小鼠模型 NB-UVB 照射后耳廓變化35
• 2.16 銀屑病樣皮炎 Balb/c 小鼠模型 NB-UVB 照射后表皮形態(tài)學(xué)改變35-36
• 2.17 銀屑病樣皮炎 Balb/c 小鼠模型 NB-UVB 照射后 K17 表達(dá)的免疫組化觀察36
• 2.18 銀屑病樣皮炎 Balb/c 小鼠模型 NB-UVB 照射后 K17 表達(dá)的免疫熒光觀察36-37
• 2.19 NB-UVB 照射后小鼠耳部組織 K17 蛋白表達(dá)的 Western-blot 檢測(cè)37-38
• 2.20 NB-UVB 照射后小鼠耳部組織 K17 mRNA 表達(dá)的 Real-time PCR 檢測(cè)38
• 2.21 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的透射電子顯微鏡觀察38
• 2.22 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析方法38
• 3 結(jié)果38-50
• 3.1 NB-UVB 照射對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡和增殖活性的影響38-40
• 3.2 不同劑量 NB-UVB 照射角質(zhì)形成細(xì)胞后細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的變化40-41
• 3.3 不同劑量 NB-UVB 照射后 6、12、24h 角蛋白 17 表達(dá)變化41-43
• 3.4 不同劑量 NB-UVB 對(duì)原代角質(zhì)形成細(xì)胞 K17 mRNA 及蛋白表達(dá)的影響43-45
• 3.5 不同劑量 NB-UVB 照射角質(zhì)形成細(xì)胞后 K17 相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化45-46
• 3.6 NB-UVB 影響 K17 表達(dá)的分子機(jī)制46-47
• 3.7 Balb/c 小鼠最小紅斑量的篩選及銀屑病樣皮炎小鼠模型的構(gòu)建47-49
• 3.8 NB-UVB 對(duì)銀屑病樣皮炎小鼠模型皮損 K17 表達(dá)的影響49-50
• 4 討論50-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果62-63
• 致謝63

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈丹蓓;外源基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入角質(zhì)形成細(xì)胞的方法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè);2001年04期

2 畢新嶺,顧軍,陳志強(qiáng),米慶勝;亞砷酸對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J];中華皮膚科雜志;2002年06期

3 周武慶,林麟,周淑華,李新宇;一氧化氮對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志;2002年01期

4 盧寧,王剛,劉玉峰,李承新,李巍,張海龍,趙小東;基因工程人抗角蛋白抗體對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響[J];西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志;2004年04期

5 張曉艷,宋佩華,馬圣清,柳惠圖;反義蛋白激酶Cζ下調(diào)角質(zhì)形成細(xì)胞中增殖相關(guān)基因的表達(dá)[J];中華皮膚科雜志;2005年05期

6 程若城;李澄;王清;張?jiān)平?任淑萍;;雌二醇拮抗紫外線所致大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞損傷作用的研究[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2009年14期

7 許若頎;鄧林紅;楊力;鐘莉;;紫外線A照射差異性損傷皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞[J];生物物理學(xué)報(bào);2010年11期

8 沈丹蓓;人皮膚器官培養(yǎng)模型中移植角質(zhì)形成細(xì)胞加速表皮傷口愈合的特性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(皮膚性病學(xué)分冊(cè));1999年03期

9 張峻嶺,陳學(xué)榮,殷金珠;β-溶血型鏈球菌與角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和凋亡研究[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2000年05期

10 馮華;氨基糖甙類體外抑制人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞tRNA的生物合成過(guò)程[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè);2004年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 畢新嶺;顧軍;陳潔;陶蘇江;李泉;;三價(jià)砷對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖及凋亡的影響[A];2002中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

2 李承新;劉瑛;高天文;劉玉峰;;Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在角質(zhì)形成細(xì)胞增殖性皮膚病中的激活狀態(tài)及其對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖與凋亡的影響[A];2006中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 鄭敏;滿孝勇;楊小紅;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體在在正常表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)與功能研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

4 譚雪晶;張宇恒;劉曉明;;一氧化氮作用前后角質(zhì)形成細(xì)胞差異蛋白的篩選與分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

5 韓軍濤;王洪濤;胡大海;蔡維霞;湯朝武;;成人不同部位角質(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)特性比較[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

6 李承新;劉瑛;高天文;劉玉峰;;Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在角質(zhì)形成細(xì)胞增殖性皮膚病中的激活狀態(tài)及其對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖與凋亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

7 韓軍濤;王洪濤;胡大海;蔡維霞;湯朝武;;成人不同部位角質(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)特性比較[A];第八屆全國(guó)燒傷外科學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2007年

8 李文海;Young Mee LEE;Jee Youn KIM;Seokwon KANG;Jin Ho CHUNG;;辣椒素受體介導(dǎo)熱休克誘導(dǎo)人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞金屬蛋白酶1的表達(dá)[A];2006中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

9 周愛(ài)民;徐麗敏;;TLRs與角質(zhì)細(xì)胞免疫及對(duì)病原分子作用機(jī)制[A];2008全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

10 王平;宋秀祖;許愛(ài)娥;畢志剛;崔毓桂;;中波紫外線輻射人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的核因子κB轉(zhuǎn)錄活性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 張中橋;血竭能促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

2 張中橋;人角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)有新方法[N];健康報(bào);2005年

3 張中橋;血竭提取物能促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

4 整理 本報(bào)記者 朱國(guó)旺;突出創(chuàng)新 緊貼臨床[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2012年

5 中國(guó)工程院院士 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)教授 陳洪鐸 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)長(zhǎng)江學(xué)者特聘教授 高興華;如何做好“面子”工程[N];光明日?qǐng)?bào);2014年

6 張曉艷;潔膚——靚麗肌膚第一步[N];健康報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 段德鑒;角質(zhì)形成細(xì)胞抗白念珠菌感染免疫作用機(jī)制的研究[D];四川大學(xué);2005年

2 夏濟(jì)平;紫外線輻射角質(zhì)形成細(xì)胞導(dǎo)致皮膚光老化的分子機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2004年

3 吳曉萍;人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];暨南大學(xué);2007年

4 黃瑾;TRPV1在角質(zhì)形成細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)中的作用及藥物的干預(yù)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 肖汀;免疫抑制劑和紫外線對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌趨化因子的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

6 唐樺;AQP3在不同年齡段正常人皮膚組織及角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中的表達(dá)[D];中南大學(xué);2008年

7 陳旭;紫外線致皮膚成纖維細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞中的自噬研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

8 謝曉韻;F1F0-ATP（合成）酶在角質(zhì)形成細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)及其功能研究[D];中南大學(xué);2012年

9 朱啟星;三氯乙烯致皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞損傷及維生素E、銀杏葉提取物保護(hù)作用的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2005年

10 劉蘇俊;人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞Toll樣受體的表達(dá)以及Toll樣受體2功能的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王琪;加味桃紅四物湯對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌內(nèi)皮素-1和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的影響[D];浙江大學(xué);2004年

2 張宇恒;一氧化氮作用前后角質(zhì)形成細(xì)胞差異蛋白的篩選與分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

3 畢建軍;組織工程皮膚種子細(xì)胞培養(yǎng)及免疫原性的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 畢新嶺;砷劑對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其致癌機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

5 焦建麗;體外角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）的器官樣（氣—液交界面）培養(yǎng)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

6 焦虎;用人毛乳頭細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建帶附屬器的組織工程皮膚替代物的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

7 厲孟;不同分化角質(zhì)形成細(xì)胞對(duì)成纖維細(xì)胞的作用及其機(jī)理研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 王琦;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在不同年齡組皮膚自然衰老中的表達(dá)及意義[D];中南大學(xué);2007年

9 董晶;以原位缺口末端標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)涼血消u曁藍(lán)訦aCaT角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡的影響[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2009年

10 陳玉欣;K14反義寡核苷酸在角質(zhì)形成細(xì)胞中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：NB-UVB對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞角蛋白17表達(dá)的調(diào)控作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：343476