目 的:老化是當(dāng)今科研關(guān)注的重點(diǎn)問題,而光老化是多個(gè)復(fù)雜機(jī)制共同作用的結(jié)果。EGCG（Epigallocatechingallate）是綠茶多酚中最主要的活性成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯,EGCG對(duì)多種細(xì)胞都有抗氧化的作用。EGCG可能通過激活細(xì)胞中的抗氧化分子以及調(diào)控某些相關(guān)基因的表達(dá),對(duì)細(xì)胞起到光保護(hù)作用。在我們的前期研究中,我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn),黃芩苷能夠抑制氧化信號(hào)的相關(guān)通路,保護(hù)細(xì)胞免受老化的損傷。其中,活性氧（ROS）的通路激活是導(dǎo)致細(xì)胞老化的關(guān)鍵步驟。本研究擬探討EGCG對(duì)UVA誘導(dǎo)的人皮膚成纖維細(xì)胞光老化的影響及分子機(jī)制,為EGCG應(yīng)用于皮膚老化的治療提供理論支持。方法:1、應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性來建立合適的光老化模型和選擇合適的EGCG的藥物濃度。2、應(yīng)用β-半乳糖苷酶試劑盒檢測(cè)老化成纖維細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)。3、應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定端粒的長(zhǎng)度,使用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法以及酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)端粒酶的表達(dá)情況。4、應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)SOD,MDA,GSH-Px和CAT活性。5、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)老化成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期。6、應(yīng)用實(shí)時(shí)定量 PCR 分別檢測(cè)MMP-1,... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１Ａ光老化劑量的選擇??

結(jié)果?ＥＧＣＧ對(duì)ＵＶＡ誘導(dǎo)的人皮膚成纖維細(xì)胞光老化的影響??Ｂ?１，〇－｜??０．８－?Ｊ?＊?＾?？－?４８ｈ??§?：：廠??〇■〇?Ｊ?ｒ?ｒ?｜?ｒ?Ｔ＂?ｉ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０?５?１５?２５?４０??ＥＧＣＧ（ｐｇ／ｍｉ）??圖１ＢＥＧＣＧ濃度的確定??二、ＥＧＣＧ延緩ＵＶＡ誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞老化??我們用Ｐ－半乳糖苷酶染色試劑盒來驗(yàn)證經(jīng)過ｌ〇Ｊ／ｃｍ２ＵＶＡ輻射和ＥＧＣＧ孵育２??周后成纖維細(xì)胞的衰老情況。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出來，老化細(xì)胞在對(duì)照組和??ＥＧＣＧ組中所占比例都很低（圖２Ａ）。同時(shí)，ＵＶＡ輻照顯著升高了?（３－半乳糖苷酶陽??性細(xì)胞表達(dá)的比例，約為７１．３６％；與ＵＶＡ輻照組對(duì)比，經(jīng)ＥＧＣＧ處理后，ＵＶＡ＋ＥＧＣＧ??組中染色陽性細(xì)胞明顯減少，降至２４．３２％?（Ｐ＜０．０５，圖２Ｂ）。意味著ＥＧＣＧ可以在一＊??定程度上減緩光老化進(jìn)程。??Ａ?ｐ￣￣—７??今?＊?＊?？??＇?■■■??＇?ｕ＇ｑ?；＇，，、？???Ｌ：?ｙ?＾?＾?？丨???Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＣＧ?ＵＶＡ?ＵＶＡ＋ＥＧＣＧ??Ｂ?＾??ｂ?８０－ｉ?＃＃??＝??８?＝??〇?６０＿?？??＞?＝??－??ｗ?－??ｉ?４〇－?＝??—?＝＝?ｆｆｆｆｆｆ??ｆ?２０－?羊圍＿??＾?Ｊ?Ｗｉｌｌ??圖２?ＥＧＣＧ對(duì)ＵＶＡ誘導(dǎo)的老化成纖維細(xì)胞的影響??（Ａ）?ＵＶＡ組可以觀察到，Ｐ－半乳糖苷酶染色后的細(xì)胞中，陽性細(xì)胞呈現(xiàn)顯著升高的趨勢(shì)ｓ在??１２??

結(jié)果?ＥＧＣＧ對(duì)ＵＶＡ誘導(dǎo)的人皮膚成纖維細(xì)胞光老化的影響??Ｂ?１，〇－｜??０．８－?Ｊ?＊?＾?？－?４８ｈ??§?：：廠??〇■〇?Ｊ?ｒ?ｒ?｜?ｒ?Ｔ＂?ｉ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０?５?１５?２５?４０??ＥＧＣＧ（ｐｇ／ｍｉ）??圖１ＢＥＧＣＧ濃度的確定??二、ＥＧＣＧ延緩ＵＶＡ誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞老化??我們用Ｐ－半乳糖苷酶染色試劑盒來驗(yàn)證經(jīng)過ｌ〇Ｊ／ｃｍ２ＵＶＡ輻射和ＥＧＣＧ孵育２??周后成纖維細(xì)胞的衰老情況。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出來，老化細(xì)胞在對(duì)照組和??ＥＧＣＧ組中所占比例都很低（圖２Ａ）。同時(shí)，ＵＶＡ輻照顯著升高了?（３－半乳糖苷酶陽??性細(xì)胞表達(dá)的比例，約為７１．３６％；與ＵＶＡ輻照組對(duì)比，經(jīng)ＥＧＣＧ處理后，ＵＶＡ＋ＥＧＣＧ??組中染色陽性細(xì)胞明顯減少，降至２４．３２％?（Ｐ＜０．０５，圖２Ｂ）。意味著ＥＧＣＧ可以在一＊??定程度上減緩光老化進(jìn)程。??Ａ?ｐ￣￣—７??今?＊?＊?？??＇?■■■??＇?ｕ＇ｑ?；＇，，、？???Ｌ：?ｙ?＾?＾?？丨???Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＣＧ?ＵＶＡ?ＵＶＡ＋ＥＧＣＧ??Ｂ?＾??ｂ?８０－ｉ?＃＃??＝??８?＝??〇?６０＿?？??＞?＝??－??ｗ?－??ｉ?４〇－?＝??—?＝＝?ｆｆｆｆｆｆ??ｆ?２０－?羊圍＿??＾?Ｊ?Ｗｉｌｌ??圖２?ＥＧＣＧ對(duì)ＵＶＡ誘導(dǎo)的老化成纖維細(xì)胞的影響??（Ａ）?ＵＶＡ組可以觀察到，Ｐ－半乳糖苷酶染色后的細(xì)胞中，陽性細(xì)胞呈現(xiàn)顯著升高的趨勢(shì)ｓ在??１２??


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