本文關(guān)鍵詞：Rab23對(duì)UVB誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的光線性角化病是一種臨床常見的皮膚癌前期病變,常見于中老年人,可發(fā)展為皮膚鱗狀細(xì)胞癌。目前光線性角化病的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,長(zhǎng)期反復(fù)日光曝露是最常見的誘發(fā)因素。以往研究認(rèn)為光線性角化病的發(fā)病主要與UVB造成的基因突變及免疫抑制密切相關(guān),近年來研究發(fā)現(xiàn)自噬在其中也起到了重要作用,結(jié)合本課題前期研究發(fā)現(xiàn)同時(shí)Rab23在光線性角化病中高表達(dá),我們推測(cè)Rab23很可能參與了光線性角化病中自噬的調(diào)節(jié)。因此,本實(shí)驗(yàn)研究重點(diǎn)在Rab23對(duì)UVB誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬的調(diào)節(jié)作用,并對(duì)其調(diào)節(jié)的機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法免疫組化檢測(cè)光線性角化病與正常皮膚組織中Rab23及自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1的表達(dá);細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)以UVB照射的Ha Ca T細(xì)胞為模型,運(yùn)用蛋白免疫印跡檢測(cè)Rab23及自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3的表達(dá)及Rab23調(diào)控自噬的相關(guān)信號(hào)通路ERK1/2、m TOR、AKT的表達(dá)水平及驗(yàn)證相關(guān)通路之間關(guān)系;免疫熒光共聚焦觀察UVB是否可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬的產(chǎn)生及Rab23與LC3是否存在共定位。結(jié)果1.Rab23及自噬相關(guān)蛋白在光線性角化病中表達(dá)水平:免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示Rab23和自噬LC3、Beclin1在光線性角化病表皮中高表達(dá),而在正常皮膚組織中僅在基底膜帶低表達(dá)或不表達(dá)。2.UVB可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬水平升高:免疫熒光及蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,在劑量為30m J/cm2UVB照射時(shí)自噬水平達(dá)到最高,之后隨著劑量的增加自噬水平逐漸降低,同時(shí)蛋白免疫印跡結(jié)果顯示Rab23與自噬相關(guān)蛋白有著一致性的變化。隨后用30m J/cm2UVB照射Ha Ca T細(xì)胞,分別于0h、2h、6h、12h檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果顯示在2h時(shí)自噬水平最高,隨著時(shí)間的延長(zhǎng)自噬水平逐漸下降。為了進(jìn)一步觀察Rab23與自噬的相關(guān)性,我們利用自噬激動(dòng)劑雷帕霉素及自噬抑制劑氯喹刺激Ha Ca T細(xì)胞后,檢測(cè)Rab23與自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化,結(jié)果顯示二者仍有著一致性的變化,高度提示Rab23參與了UVB誘導(dǎo)的自噬過程。3.自噬對(duì)UVB照射后Ha Ca T細(xì)胞存活率的影響:CCK8檢測(cè)30m J/cm2UVB照射后自噬促進(jìn)劑雷帕霉素及抑制劑氯喹對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞存活率的影響,結(jié)果顯示促進(jìn)自噬可使存活率提高,而抑制自噬則降低存活率。4.Rab23對(duì)自噬的調(diào)控作用:蛋白免疫印跡方法檢測(cè)30m J/cm2UVB照射后2h在穩(wěn)定表達(dá)不同水平Rab23的Ha Ca T細(xì)胞中的自噬水平,結(jié)果顯示Rab23過表達(dá)后自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平升高,而干涉Rab23的表達(dá)后自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平降低,同樣免疫熒光結(jié)果也顯示在Rab23過表達(dá)的細(xì)胞中LC3熒光數(shù)目較對(duì)照組增多。5.Rab23調(diào)控自噬的機(jī)制:免疫熒光共聚焦結(jié)果顯示Rab23與自噬相關(guān)蛋白LC3并不存在共定位關(guān)系。通過蛋白免疫印跡檢測(cè)調(diào)控自噬相關(guān)通路及Rab23對(duì)這些通路的影響,結(jié)果顯示,UVB照射后ERK1/2的通路激活及m TOR通路的抑制受Rab23的調(diào)節(jié),過表達(dá)Rab23后可促進(jìn)ERK的表達(dá)抑制m TOR的表達(dá),且干涉ERK后m TOR的表達(dá)升高。結(jié)論本研究從組織學(xué)方面發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)蛋白與Rab23同時(shí)在光線性角化病中均高表達(dá)且二者存在一定的相關(guān)性為著眼點(diǎn),以UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞為模型,發(fā)現(xiàn)UVB可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬水平升高,促進(jìn)自噬可提高UVB照射后角質(zhì)形成細(xì)胞的存活率,且Rab23在該過程中有著重要的調(diào)節(jié)作用,該調(diào)節(jié)作用的可能分子學(xué)機(jī)制是通過ERK或ERK/m TOR通路實(shí)現(xiàn)的,而非直接參與自噬中的膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程。
【關(guān)鍵詞】：Rab23 自噬 ERK1/2 mTOR 光線性角化病
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R758.69
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-15
• 文獻(xiàn)回顧15-22
• 1.實(shí)驗(yàn)材料22-29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象22
• 1.2 實(shí)驗(yàn)所需主要試劑22-24
• 1.3 實(shí)驗(yàn)所需主要儀器24-25
• 1.4 試劑配置25-29
• 2.實(shí)驗(yàn)方法29-40
• 2.1 免疫組化檢測(cè)光線性角化病與正常皮膚中Rab23 及自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1 的表達(dá)29-30
• 2.2 細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)30-31
• 2.3 CCK-8 檢測(cè)自噬對(duì)UVB照射后角質(zhì)形成細(xì)胞存活率的影響31
• 2.4 不同劑量UVB對(duì)細(xì)胞自噬的影響的免疫熒光共聚焦檢測(cè)31-32
• 2.5 蛋白免疫印跡檢測(cè)不同劑量UVB對(duì)細(xì)胞自噬及Rab23 的影響32-34
• 2.6 蛋白免疫印跡檢測(cè)UVB照射后角質(zhì)形成細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)自噬相關(guān)蛋白及Rab23 的表達(dá)34-35
• 2.7 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建35
• 2.8 Rab23 對(duì)UVB誘導(dǎo)自噬的調(diào)節(jié)作用的蛋白免疫印跡檢測(cè)35-36
• 2.9 自噬抑制劑氯喹、自噬促進(jìn)劑雷帕霉素對(duì)細(xì)胞自噬及Rab23 影響的蛋白免疫印跡檢測(cè)36-37
• 2.10 免疫熒光共聚焦觀察Rab23 與LC3 的定位關(guān)系及Rab23 對(duì)自噬的影響37
• 2.11 UVB照射后HaCaT細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的蛋白免疫印跡檢測(cè)37-38
• 2.12 蛋白免疫印跡檢測(cè)UVB照射后穩(wěn)定表達(dá)不同Rab23 的HaCaT細(xì)胞株中ERK、mTOR的表達(dá)38-39
• 2.13 蛋白免疫印跡檢測(cè)UVB照射后穩(wěn)定表達(dá)野生型Rab23 的角質(zhì)形成細(xì)胞中干涉ERK對(duì)mTOR表達(dá)的影響39-40
• 2.14 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析40
• 3.結(jié)果40-49
• 3.1 Rab23 及自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1 在光線性角化病皮損及和正常皮膚組織中的表達(dá)40
• 3.2 UVB誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬水平升高40-41
• 3.3 不同劑量UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞后Rab23 及自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1 的表達(dá)變化41-42
• 3.4 UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞后 0h、2h、6h、12h自噬相關(guān)蛋白LC3、beclin1及Rab23 的表達(dá)變化42-43
• 3.5 自噬促進(jìn)劑雷帕霉素及自噬抑制劑氯喹對(duì)UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞后Rab23、LC3、beclin1 的變化43
• 3.6 促進(jìn)或抑制自噬對(duì)UVB照射角質(zhì)形成細(xì)胞存活率的影響43-44
• 3.7 Rab23 對(duì)UVB誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞自噬的調(diào)控作用44-46
• 3.8 Rab23 調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞自噬機(jī)制的探討46-49
• 4.討論49-54
• 小結(jié)54-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果63-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 程勇;徐振平;孫愛軍;;自噬的分子醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2011年02期

  本文關(guān)鍵詞：Rab23對(duì)UVB誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞自噬的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：330956