本文關(guān)鍵詞：不同地區(qū)孢子絲菌臨床分離株基因分型及藥物敏感性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 對我國不同地區(qū)孢子絲菌的臨床分離株進行基因分型和系統(tǒng)進化分析；研究雙相型真菌球形孢子絲菌分別在菌絲相（30℃、35℃）和酵母相（35℃）兩種形態(tài)下對8種抗真菌藥物的敏感性，了解不同地區(qū)球形孢子絲菌的藥物敏感性是否有差異。 方法： 1、分別選取吉林省、廣東省、四川省、北京市、江蘇省地區(qū)球形孢子絲菌株共5株，分別采用CTAB法、異硫氰酸胍沸騰法、堿裂解法、試劑盒法提取DNA，檢測其核酸濃度及純度值，并利用PCR擴增，比較產(chǎn)物條帶亮度，確定孢子絲菌DNA最佳提取方法。 2、對43株臨床分離株的鈣調(diào)蛋白基因（CAL)進行核酸測序，并將其序列在Genbank數(shù)據(jù)庫上比對，利用MEGA5.0軟件，采用鄰接法（neighbor-joining，NJ）進行系統(tǒng)進化分析。 3、采用美國臨床和實驗室標準化研究所（CLSI）制定的微量液基稀釋法M-38A和M27-A2，并稍作修改后，對43株經(jīng)鑒定為球形孢子絲菌菌株的兩種形態(tài)（菌絲相及酵母相）在不同溫度（30℃、35℃）進行體外藥物敏感試驗，測定的抗真菌藥物為：氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬、酮康唑、益康唑、伏立康唑、咪康唑、兩性霉素B。計算其最小抑菌濃度（MIC），MIC50、MIC90、GM，利用統(tǒng)計學軟件比較其差異性。 結(jié)果： 1、比較CTAB法、異硫氰酸胍沸騰法、堿裂解法、試劑盒法四種方法所提取的球形孢子絲菌的DNA，結(jié)果顯示堿裂解法提取的DNA純度最好。 2、使用CL1，CL2A引物對43株臨床孢子絲菌基因組DNA擴增后可獲得約770bp左右大小的CAL基因片段，經(jīng)序列測定和比對后，確定43株臨床分離孢子絲菌均為球形孢子絲菌。系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示，各地區(qū)球形孢子絲菌與文獻已確證的球形孢子絲菌（AM399002、AM39004、AM399005、AM399015、KC190217、KC121565、KC190218、KC190219、AM399015、GU456632）位于同一group中，且分為兩個cluster，推測球形孢子絲菌可能存在兩個亞組。 3、體外雙相不同溫度藥物敏感性試驗結(jié)果： （1）TBF抗真菌活性最好，MIC值0.03-0.25μg/ml，GM值為0.04μg/ml，其次為MCZ、ECZ和KCZ的抗真菌活性較好，MIC值分別為0.03-1.0μg/ml、0.03-1.0μg/ml、0.03-4.0μg/ml，但是不同溫度及不同時相MIC值稍有波動; （2）統(tǒng)計學結(jié)果顯示，，不同地區(qū)藥敏結(jié)果差別均無統(tǒng)計學意義（P0.01）。菌絲相不同溫度（30℃、35℃）及酵母相35℃MIC值差別有統(tǒng)計學意義（P0.05），菌絲相的MIC值較酵母相的高，其中MIC值菌絲相35℃介于菌絲相30℃和酵母相之間。 結(jié)論： 1、堿裂解法是一種適于球形孢子絲菌DNA提取的簡便方法。 2、中國各個省市地區(qū)均以球形孢子絲菌為主要致病菌種，多數(shù)來源于環(huán)境，球形孢子絲菌的基因型別無明顯地區(qū)差異。 3、不同地區(qū)球形孢子絲菌對TBF最為敏感，其次為MCZ、ECZ、KCZ和ICZ，而對FCZ、VCZ及AMB都顯示出了耐藥性，地區(qū)差異并不明顯。球形孢子絲菌體外藥敏試驗受溫度和時相影響，除TBF外，菌絲相MIC值普遍較酵母相高，其中菌絲相30℃MIC值最高，依次為菌絲相35℃、酵母相35℃。
【關(guān)鍵詞】：球型孢子絲菌 鈣調(diào)蛋白基因 藥物敏感性試驗
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R440;R756
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-14
• 第1章 緒論14-15
• 第2章 綜述15-21
• 2.1 申克孢子絲菌復合體的基因分型15-19
• 2.1.1 基因分型與地理分布的關(guān)系17
• 2.1.2 基因分型和臨床型別的關(guān)系17-18
• 2.1.3 基因分型和藥物敏感性關(guān)系18-19
• 2.2 展望19-21
• 第3章 球形孢子絲菌基因組 DNA 提取方法優(yōu)化21-30
• 3.1 材料與方法21-24
• 3.1.1 實驗材料21-22
• 3.1.2 實驗方法22-24
• 3.2 實驗結(jié)果24-28
• 3.2.1 DNA 濃度及純度24-27
• 3.2.2 PCR 擴增27
• 3.2.3 瓊脂凝膠電泳27-28
• 3.3 小結(jié)28
• 3.4 討論28-30
• 第4章 不同地區(qū)孢子絲菌的基因分型和系統(tǒng)進化分析30-38
• 4.1 材料與方法30-31
• 4.1.1 實驗材料30
• 4.1.2 實驗方法30-31
• 4.2 實驗結(jié)果31
• 4.3 討論31-38
• 第5章 不同地區(qū)球形孢子絲菌藥物敏感性試驗38-48
• 5.1 材料與方法38-42
• 5.1.1 實驗材料38-39
• 5.1.2 實驗方法39-42
• 5.2 統(tǒng)計學方法42-43
• 5.3 結(jié)果43-47
• 5.3.1 43株球形孢子絲菌菌絲相及酵母相藥敏結(jié)果43
• 5.3.2 43株球形孢子絲菌不同地區(qū)藥敏結(jié)果MIC值比較43
• 5.3.3 43株球形孢子絲菌雙相、不同溫度藥敏結(jié)果MIC值比較43-47
• 5.4 討論47-48
• 第6章 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-55
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果55-56
• 致謝56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白永宏;陳國梁;閆冬;張向前;;幾種食用菌子實體總DNA提取方法的比較研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2011年19期

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3 蘇海輝;羅慶錄;李若瑜;;不同抗真菌藥物對申克孢子絲菌的體外敏感性研究進展[J];中國麻風皮膚病雜志;2006年07期

4 譚靜文;劉偉;萬U

本文編號：329496