本文關鍵詞：MicroRNA-192基因沉默對A375惡性黑色素瘤細胞增殖影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：MicroRNA是真核生物中一類長度約為22個核苷酸的非編碼小分子RNA，是內源性的調控基因，通過結合靶基因從而抑制靶基因的翻譯或降解靶基因來發(fā)揮其作用。microRNA對腫瘤發(fā)生、發(fā)展的影響，是目前研究的熱點之一，有望成為一種對腫瘤診斷和治療的靶點。 惡性黑色素瘤(malignant melanoma，MM)又稱為惡黑，發(fā)病率占皮膚惡性腫瘤的第三位（6.8%～20%），，其惡性度高轉移早，預后差，死亡率高。本實驗應用基因芯片技術對A375惡性黑色素瘤細胞進行了分析，顯示microRNA-192基因在惡性黑色素瘤細胞中高表達，本研究以microRNA-192基因作為實驗目標，研究其在A375惡性黑色素瘤細胞中的作用。 目的：探討microRNA-192抑制物對A375惡性黑色素瘤細胞的作用。為進一步研究microRNA分子在A375惡性黑色素瘤細胞中的作用機制奠定基礎。 方法： 1細胞培養(yǎng) 將A375惡性黑色素瘤細胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基（含青霉素100U/ml，含鏈霉素100U/ml，PH7.2）中，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱內進行常規(guī)傳代培養(yǎng)。 2在倒置光學顯微鏡觀察A375惡性黑色素瘤細胞分化及形態(tài)。 3在MicroRNA-192抑制物（200nmol/L）轉染A375惡性黑色素瘤細胞48小時后用實時定量PCR檢測其microRNA-192基因的表達量與未轉染細胞microRNA-192基因表達量的差異。 4MTT比色分析法檢測不同劑量microRNA-192抑制物（400nml/L,200nmol/L,100nmol/L）轉染A375惡性黑色素瘤細胞后第1天、第2天、第3天對細胞增殖的影響。 5應用Anexin-ⅴ-PI雙染色檢測轉染后第二天A375惡性黑色素瘤細胞早期凋亡的變化，將實驗分為正常細胞組，LipofectamineTM2000對照組，實驗組（200nmol/L）。6運用統(tǒng)計軟件SPSS13.0對數據進行處理，采用單因素方差分析，以ａ=0.05為顯著性差異標準。 結果： 1未經任何處理過的A375惡性黑色素瘤細胞呈梭形或多角形，分布均勻，大小基本一致，增殖旺盛，核固縮現象較少見。 2轉染6小時后，microRNA-192抑制物（100nmol/L、200nmol/L、400nmol/L）轉染效率在80%-90%之間。 3MicroRNA-192抑制物（200nmol/L）轉染A375惡性黑色素瘤細胞48小時后，實時定量PCR結果顯示，與轉染前microRNA-192基因表達量相比明顯降低。表明microRNA-192抑制物已成功轉染A375惡性黑色素瘤細胞并部分沉默microRNA-192基因。 4MTT比色分析法檢測處理因素對A375惡性黑色素瘤細胞增殖的影響。 正常細胞對照組和LipofectamineTM2000對照組之間無明顯差異(P0.05)。3組實驗組與正常細胞對照組和Lipofectamin eTM2000對照組對照均有明顯差異(P0.05)，且隨著microRNA-192抑制物濃度從100nmol/L、200nmol/L到400nmol/L，對細胞增殖的抑制率也增高。 5用Anexin-ⅴ-PI雙染色檢測microRNA-192抑制物（200nmol/L）轉染48小時后對A375惡性黑色素瘤細胞后的早期凋亡率與照組有顯著性差異（P0.05）。 結論： 1MicroRNA-192抑制物對A375惡性黑色素瘤細胞microRNA-192基因表達的抑制效果明顯。 2MicroRNA-192抑制物對A375惡性黑色素瘤細胞增殖有明顯抑制作用。 3用MicroRNA-192抑制物轉染A375惡性黑色素瘤細胞后能誘導A375細胞早期凋亡。microRNA-192抑制物影響A375惡性黑色素瘤細胞的增殖凋亡，但其具體的作用機制需要進一步研究。
【關鍵詞】：LipofectamineTM2000 A375惡性黑色素瘤細胞 microRNA-192抑制物 細胞增殖 細胞凋亡
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-19
• 結果19-21
• 附圖21-30
• 附表30-31
• 討論31-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-37
• 綜述 MicroRNA在惡性黑色素瘤中的研究進展及其臨床診斷意義37-48
• 參考文獻43-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

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本文編號：324616