本文關(guān)鍵詞：MiR-486-3p抑制角蛋白17表達在銀屑病發(fā)病機制中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：銀屑病是一種容易反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性皮膚病，其發(fā)病機制尚不明確。目前認為它是一種由環(huán)境因素和遺傳因素共同導(dǎo)致的以固有免疫和適應(yīng)性免疫功能紊亂所致的疾病。其中Th1和Th17細胞及其分泌的多種細胞因子參與了疾病的發(fā)生。 銀屑病的病理改變是由于角質(zhì)形成細胞（KC）的增殖過快、分化受阻所致，而異常增殖的KC中角蛋白17（K17）表達高于正常KC。K17在正常的皮膚不表達或低表達，而在傷口愈合周圍組織等部位高表達，并且我們前期的研究發(fā)現(xiàn)在銀屑病存在“K17自身反應(yīng)性T細胞細胞因子”的通路，此通路的惡性循環(huán)在銀屑病皮損的發(fā)生與維持中發(fā)揮重要作用。除了多種細胞因子可調(diào)控K17的表達外，K17轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制尚不清楚。 MiRNA作為轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的重要分子，參與了細胞的增殖、分化、遷移等各種生理活動，本研究通過生物信息學預(yù)測與文獻回顧分析發(fā)現(xiàn)miR-486-3p可能參與了K17轉(zhuǎn)錄后抑制作用，并通過影響KC的增殖與遷移而參與銀屑病的發(fā)病過程。 目的：探索K17轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制，對參與K17調(diào)控的miRNA分子在銀屑病皮損中進行驗證，并進一步研究其對KC功能的影響以及在銀屑病發(fā)病過程中的作用。 方法：生物信息學預(yù)測與文獻回顧篩選可能參與K17轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的miRNA。利用RT-PCR的方法對篩選出的miRNA進行臨床樣本驗證。用Western Blot方法檢測銀屑病皮損和正常皮膚中K17表達情況。對HaCaT細胞分別轉(zhuǎn)染miR-486-3p的類似物（mimics）和無關(guān)片段（NC片段）后，用Western Blot檢測K17蛋白表達，RT-PCR檢測K17mRNA表達。構(gòu)建含有K173UTR區(qū)種子序列、突變1為種子序列缺失片段、突變2為種子序列點突變的片段、突變3為種子序列重復(fù)的片段質(zhì)粒，利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測miR-486-3p對K17表達抑制作用機制。通過對過表達K17的HaCaT細胞轉(zhuǎn)染miR-486-3p的類似物后利用CCK8檢測其增殖能力的變化，利用細胞劃痕試驗觀察其遷移能力的變化。 結(jié)果：生物信息學預(yù)測結(jié)果顯示miR-486-3p有8個堿基能夠與K17的3UTR區(qū)的種子序列結(jié)合，并且在文獻的基因芯片結(jié)果中也顯示miR-486-3p在銀屑病皮損中為正常皮膚的39%； RT-PCR檢測10例銀屑病患者的皮損和10例健康對照皮膚中miR-486-3p表達水平，銀屑病皮損中miR-486-3p表達水平為0.211±0.120，低于健康對照的0.555±0.425，銀屑病皮損為健康對照的0.380，（t=2.616，υ=9，，p0.05）；Western Blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染mimics組較轉(zhuǎn)染NC片段組K17表達水平明顯降低；雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測結(jié)果含有K173UTR種子序列組與突變3組熒光強度分別為65.31±6.32和54.18±10.01，低于對照組，（p0.05），突變1組和突變2組熒光強度分別為114.77±16.14和110.21±12.99與對照組無明顯差異（p0.05）；CCK8檢測細胞增殖結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染mimics組吸光度值為1.005±0.099，轉(zhuǎn)染NC片段組為1.235±0.119，t=2.860，p0.05，轉(zhuǎn)染mimics組較轉(zhuǎn)染NC片段組細胞增殖速度明顯減慢；細胞劃痕實驗觀察結(jié)果顯示過表達K17的HaCaT細胞轉(zhuǎn)染mimics后較轉(zhuǎn)染NC組遷移速度明顯減慢。 結(jié)論：銀屑病皮損中miR-486-3p表達較正常皮膚顯著降低；miR-486-3p對K17表達具有負向調(diào)控作用，miR-486-3p對K17的負向調(diào)控作用是通過與其3UTR區(qū)的種子序列特異性結(jié)合發(fā)揮的；miR-486-3p抑制K17表達后能夠顯著抑制角質(zhì)形成細胞的增殖和遷移。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 角蛋白17 miRNA miR-486-3p 增殖 遷移
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語表5-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 文獻回顧15-26
• 1 材料26-32
• 1.1 主要儀器26-27
• 1.2 主要試劑27-29
• 1.3 主要試劑配制方法29-31
• 1.4 實驗中所使用的細胞31
• 1.5 實驗中所使用的質(zhì)粒31-32
• 1.6 實驗中所使用的 miR-486-3p 類似物和無關(guān)片段32
• 1.7 實驗中所使用的菌種32
• 2 方法32-43
• 2.1 預(yù)測并篩選出參與 K17 轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的 miRNA 并進行臨床驗證32-35
• 2.2 miR-486-3p 對 K17 表達的抑制作用及機制研究35-39
• 2.3 用雙熒光素酶報告系統(tǒng)研究 miR-486-3p 抑制 K17 表達的機制39-42
• 2.4 miR-486-3p 抑制 K17 表達對 KC 功能的影響42-43
• 2.5 統(tǒng)計方法43
• 3 結(jié)果43-48
• 3.1 銀屑病皮損與正常皮膚 miR-486-3p 表達差異檢測43-44
• 3.2 miR-486-3p 對 K17 調(diào)控作用及機制44-45
• 3.3 雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測 miR-486-3p 對 K17 的抑制作用45-46
• 3.4 miR-486-3p 抑制 K17 表達后對 HaCaT 細胞功能的影響46-48
• 4 討論48-52
• 小結(jié)52-53
• 參考文獻53-61
• 附錄61-63
• 個人簡歷和研究成果63-64
• 致謝64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 全國銀屑病流行調(diào)查組;邵長庚;張國威;包寅德;蔣仲元;韓國柱;顧恒;;全國1984年銀屑病流行調(diào)查報告[J];皮膚病與性病;1989年01期

2 丁曉嵐;王婷琳;沈佚葳;王曉艷;周城;田珊;劉盈;彭光輝;周俊娥;薛樹旗;王仁利;唐英;孟雪梅;裴廣德;白云花;劉青;李航;張建中;;中國六省市銀屑病流行病學調(diào)查[J];中國皮膚性病學雜志;2010年07期

  本文關(guān)鍵詞：MiR-486-3p抑制角蛋白17表達在銀屑病發(fā)病機制中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：313860