本文關(guān)鍵詞：香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過觀察香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性的影響,進(jìn)一步探討在吸煙過程中產(chǎn)生的煙霧及紫外線照射在促使皮膚發(fā)生老化的作用。 方法：采用細(xì)胞舊液與細(xì)胞新液按1：2比例的方法培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞并繪制生長曲線；MTT法檢測CSE對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響；用三種不同濃度的CSE和UVB照射(30mJ/cm2)處理人皮膚成纖維細(xì)胞后采用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測端粒長度的變化,同時采用聚合酶鏈反應(yīng)-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(PCR-ELISA)方法檢測端粒酶活性的變化情況。 結(jié)果：采用細(xì)胞舊液與細(xì)胞新液按1：2比例的方法培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞與常規(guī)培養(yǎng)方法相比較,其倍增時間相對較短,其潛伏期為0-1d,生長期為2-4d,第4d之后細(xì)胞增殖緩慢,進(jìn)入一個比較穩(wěn)定的平臺期；常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞的方法：潛伏期為0-2d,生長增殖期為2-5d,第5d之后則進(jìn)入穩(wěn)定的平臺期；CSE對人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖在低濃度(37.5μL/mL)時具有促進(jìn)作用,在高濃度(75μL/mL)時具有抑制作用,但與未加CSE組相比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05); UVB照射組和CSE聯(lián)合UVB照射處理組人皮膚成纖維細(xì)胞的端粒長度與端粒酶活性的變化情況與未處理組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),且隨著CSE濃度的增加,端粒長度與端粒酶活性的變化情況越明顯。 結(jié)論：采用按細(xì)胞舊液與細(xì)胞新液比例為1：2的方法培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞其倍增時間相對較短,可在較短時間內(nèi)獲得增殖能力較強(qiáng)且生長穩(wěn)定的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；通過MTT法檢測得知,加入CSE處理組細(xì)胞增殖率與未加CSE組相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05); CSE和UVB照射可在縮短人皮膚成纖維細(xì)胞端粒長度的同時降低端粒酶的活性,且呈現(xiàn)濃度-效應(yīng)關(guān)系。故我們推斷CSE和UVB照射可通過影響端粒-端粒酶的變化來促進(jìn)皮膚老化的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：香煙煙霧提取物 細(xì)胞舊液 皮膚成纖維細(xì)胞 UVB照射 端粒長度 端粒酶活性
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R751
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 縮略語/符號說明9-10
• 前言10-12
• 研究現(xiàn)狀、成果10-11
• 研究目的、方法11-12
• 一、細(xì)胞舊液在人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用12-23
• 1 材料與方法12-23
• 1.1 材料12-16
• 1.1.1 主要儀器12
• 1.1.2 主要試劑12-13
• 1.1.3 主要試劑的處理與配制13
• 1.1.3.1 胎牛血清的處理13
• 1.1.3.2 10%培養(yǎng)基的配置及常用液體的分裝13
• 1.1.3.3 PBS緩沖液的配制13
• 1.1.4 方法13-16
• 1.1.4.1 細(xì)胞的復(fù)蘇14
• 1.1.4.2 細(xì)胞的換液14
• 1.1.4.3 細(xì)胞的傳代14-15
• 1.1.4.4 細(xì)胞的凍存15
• 1.1.4.5 人皮膚成纖維細(xì)胞生長曲線的繪制及形態(tài)學(xué)觀察15
• 1.1.4.6 MTT檢測細(xì)胞舊液對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響15-16
• 1.2 結(jié)果16-20
• 1.2.1 人皮膚成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察16-18
• 1.2.2 人皮膚成纖維細(xì)胞的生長曲線18-19
• 1.2.3 MTT檢測細(xì)胞舊液對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響19-20
• 1.3 討論20-22
• 1.4 小結(jié)22-23
• 二、香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細(xì)胞端粒長度的影響23-36
• 2 材料與方法23-36
• 2.1 材料23-28
• 2.1.1 主要儀器23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.1.3 方法24-28
• 2.1.3.1 香煙煙霧提取物的制備24
• 2.1.3.2 實(shí)驗(yàn)步驟與實(shí)驗(yàn)分組24-25
• 2.1.3.3 MTT法檢測香煙煙霧提取物對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響25-26
• 2.1.3.4 RT-PCR法檢測端粒長度的變化情況26-28
• 2.2 結(jié)果28-33
• 2.2.1 香煙煙霧提取物對人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響28-29
• 2.2.2 RT-PCR檢測端粒長度的變化結(jié)果29-33
• 2.2.2.1 端粒長度與內(nèi)參36B4的溶解曲線及擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線29-32
• 2.2.2.2 RT-PCR相對定量結(jié)果32-33
• 2.3 討論33-35
• 2.4 小結(jié)35-36
• 三、香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細(xì)胞端粒酶活性的影響36-41
• 3 材料與方法36-41
• 3.1 材料36
• 3.1.1 主要儀器36
• 3.1.2 主要試劑36
• 3.2 方法36-37
• 3.3 結(jié)果37-39
• 3.4 討論39-40
• 3.5 小結(jié)40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 綜述46-54
• 吸煙、端粒與皮膚老化的研究進(jìn)展46-51
• 綜述參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：310126