本文關鍵詞：香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細胞端粒長度和端粒酶活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過觀察香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細胞端粒長度和端粒酶活性的影響,進一步探討在吸煙過程中產生的煙霧及紫外線照射在促使皮膚發(fā)生老化的作用。 方法：采用細胞舊液與細胞新液按1：2比例的方法培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞并繪制生長曲線；MTT法檢測CSE對人皮膚成纖維細胞增殖的影響；用三種不同濃度的CSE和UVB照射(30mJ/cm2)處理人皮膚成纖維細胞后采用實時定量聚合酶鏈反應技術(RT-PCR)檢測端粒長度的變化,同時采用聚合酶鏈反應-酶聯(lián)免疫吸附試驗(PCR-ELISA)方法檢測端粒酶活性的變化情況。 結果：采用細胞舊液與細胞新液按1：2比例的方法培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞與常規(guī)培養(yǎng)方法相比較,其倍增時間相對較短,其潛伏期為0-1d,生長期為2-4d,第4d之后細胞增殖緩慢,進入一個比較穩(wěn)定的平臺期；常規(guī)培養(yǎng)細胞的方法：潛伏期為0-2d,生長增殖期為2-5d,第5d之后則進入穩(wěn)定的平臺期；CSE對人皮膚成纖維細胞的增殖在低濃度(37.5μL/mL)時具有促進作用,在高濃度(75μL/mL)時具有抑制作用,但與未加CSE組相比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05); UVB照射組和CSE聯(lián)合UVB照射處理組人皮膚成纖維細胞的端粒長度與端粒酶活性的變化情況與未處理組差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05),且隨著CSE濃度的增加,端粒長度與端粒酶活性的變化情況越明顯。 結論：采用按細胞舊液與細胞新液比例為1：2的方法培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞其倍增時間相對較短,可在較短時間內獲得增殖能力較強且生長穩(wěn)定的細胞用于后續(xù)實驗；通過MTT法檢測得知,加入CSE處理組細胞增殖率與未加CSE組相比較,差異無統(tǒng)計學意義(p0.05); CSE和UVB照射可在縮短人皮膚成纖維細胞端粒長度的同時降低端粒酶的活性,且呈現(xiàn)濃度-效應關系。故我們推斷CSE和UVB照射可通過影響端粒-端粒酶的變化來促進皮膚老化的發(fā)生。
【關鍵詞】：香煙煙霧提取物 細胞舊液 皮膚成纖維細胞 UVB照射 端粒長度 端粒酶活性
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R751
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 縮略語/符號說明9-10
• 前言10-12
• 研究現(xiàn)狀、成果10-11
• 研究目的、方法11-12
• 一、細胞舊液在人皮膚成纖維細胞培養(yǎng)中的應用12-23
• 1 材料與方法12-23
• 1.1 材料12-16
• 1.1.1 主要儀器12
• 1.1.2 主要試劑12-13
• 1.1.3 主要試劑的處理與配制13
• 1.1.3.1 胎牛血清的處理13
• 1.1.3.2 10%培養(yǎng)基的配置及常用液體的分裝13
• 1.1.3.3 PBS緩沖液的配制13
• 1.1.4 方法13-16
• 1.1.4.1 細胞的復蘇14
• 1.1.4.2 細胞的換液14
• 1.1.4.3 細胞的傳代14-15
• 1.1.4.4 細胞的凍存15
• 1.1.4.5 人皮膚成纖維細胞生長曲線的繪制及形態(tài)學觀察15
• 1.1.4.6 MTT檢測細胞舊液對人皮膚成纖維細胞增殖的影響15-16
• 1.2 結果16-20
• 1.2.1 人皮膚成纖維細胞的形態(tài)學觀察16-18
• 1.2.2 人皮膚成纖維細胞的生長曲線18-19
• 1.2.3 MTT檢測細胞舊液對人皮膚成纖維細胞增殖的影響19-20
• 1.3 討論20-22
• 1.4 小結22-23
• 二、香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細胞端粒長度的影響23-36
• 2 材料與方法23-36
• 2.1 材料23-28
• 2.1.1 主要儀器23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.1.3 方法24-28
• 2.1.3.1 香煙煙霧提取物的制備24
• 2.1.3.2 實驗步驟與實驗分組24-25
• 2.1.3.3 MTT法檢測香煙煙霧提取物對人皮膚成纖維細胞增殖的影響25-26
• 2.1.3.4 RT-PCR法檢測端粒長度的變化情況26-28
• 2.2 結果28-33
• 2.2.1 香煙煙霧提取物對人皮膚成纖維細胞增殖的影響28-29
• 2.2.2 RT-PCR檢測端粒長度的變化結果29-33
• 2.2.2.1 端粒長度與內參36B4的溶解曲線及擴增標準曲線29-32
• 2.2.2.2 RT-PCR相對定量結果32-33
• 2.3 討論33-35
• 2.4 小結35-36
• 三、香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細胞端粒酶活性的影響36-41
• 3 材料與方法36-41
• 3.1 材料36
• 3.1.1 主要儀器36
• 3.1.2 主要試劑36
• 3.2 方法36-37
• 3.3 結果37-39
• 3.4 討論39-40
• 3.5 小結40-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-45
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明45-46
• 綜述46-54
• 吸煙、端粒與皮膚老化的研究進展46-51
• 綜述參考文獻51-54
• 致謝54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前8條

1 何秀珍,夏隆慶;吸煙與皮膚[J];國外醫(yī)學.皮膚性病學分冊;2000年03期

2 黃開,章慶國;端粒長度及變化規(guī)律[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2003年06期

3 黃倩;徐叢劍;;尼古丁抗雌激素作用的研究進展[J];國外醫(yī)學.藥學分冊;2006年03期

4 朱雅新,麻浩;端粒和端粒酶的結構與功能及其應用[J];湖南農業(yè)大學學報(自然科學版);2005年01期

5 王曦,李利;成纖維細胞與皮膚老化[J];中國美容醫(yī)學;2005年02期

6 金曼林，童坦君;成纖維細胞生長因子研究進展[J];生理科學進展;1994年02期

7 鄭軍,黃曉元,韋星;重組人表皮生長因子促進大鼠皮膚創(chuàng)面愈合的研究[J];中華整形外科雜志;2005年05期

8 劉國寧;陳斌;錢雯;李燃;閆寧;李雙鳳;;香煙煙霧提取物對成纖維細胞Fibulins家族的影響及黃芪甲苷干預作用[J];中國中西醫(yī)結合皮膚性病學雜志;2013年02期

  本文關鍵詞：香煙煙霧提取物聯(lián)合UVB照射對人皮膚成纖維細胞端粒長度和端粒酶活性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：310126