一、背景與目的毛囊生長是一個復雜的周期性過程,包括毛發(fā)生長期、退行期、休止期。雖然調(diào)控毛發(fā)周期的機制還未完全闡明,目前已明確:毛乳頭與鄰近毛囊上皮、毛母質(zhì)、外毛根鞘之間的相互作用調(diào)控著每個周期的延續(xù)和過渡。間質(zhì)來源的毛乳頭位于毛囊的底部,外周由毛母質(zhì)包繞,它在體內(nèi)和體外具有誘導毛囊生長的特性。來源于毛乳頭細胞的信號可以直接影響鄰近毛母質(zhì)細胞和外毛根鞘細胞的生長,并且可以調(diào)控毛囊生長周期。這些信號包括sonic hedgehog(Shh)途徑、胰島素樣生長因子(IGF-1)、wnt/β-catenin途徑、骨形成蛋白(BMP)、成纖維細胞因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)和肝細胞生長因子(HGF)等。雄激素性脫發(fā)(AGA)是最常見的男性脫發(fā)疾病,發(fā)病機制涉及局部雄激素分泌增多、雄激素受體(AR)表達量增多、II型5α還原酶和旁分泌等,而雙氫睪酮(DHT)目前被認為是雄激素性脫發(fā)主要致病因素。睪酮在II型5α還原酶的作用下可形成活性更強的DHT,II型5α還原酶的致病作用已經(jīng)非常明確,男性雄激素性脫發(fā)的首選治療方案是長期口服II型5α還原酶抑制劑,它可降低患者血清和頭皮的DHT濃度,目前DHT誘導的雄激素性脫發(fā)的發(fā)病機制尚未完全明確。既往研究發(fā)現(xiàn)DHT促進AGA患者頂部毛乳頭細胞分泌TGF-β,從而抑制毛囊上皮細胞的生長,DHT同時也可以促進胡須部毛乳頭細胞分泌IGF-1,從而促進毛囊上皮細胞的生長。本實驗將進一步研究DHT誘導的旁分泌途徑,初步探索FGF2及FGF7是否參與男性雄激素性脫發(fā)的發(fā)病。二、方法和結(jié)果1、從人頭皮中分離出毛乳頭,體外培養(yǎng)毛乳頭細胞,檢測各代毛乳頭細胞中AR的表達。結(jié)果:體外傳代培養(yǎng)時,第6代毛乳頭細胞AR蛋白表達量明顯低于第3代毛乳頭細胞。2、構(gòu)建AR腺病毒載體并轉(zhuǎn)染毛乳頭細胞,RT-PCR、Western blot、免疫熒光檢測AR的表達,CCK-8法檢測AR腺病毒對人毛乳頭細胞增殖的影響。結(jié)果:對照組(未轉(zhuǎn)染腺病毒的毛乳頭細胞)、空載體組、AR過表達組各組之間毛乳頭細胞的增殖無統(tǒng)計學差異。3、以下步驟均在過表達AR的毛乳頭細胞中進行,根據(jù)實驗是否加入DHT、0.01%乙醇進行分組,脫發(fā)區(qū)頂部毛乳頭細胞組包括:0M(0mol/L)-DHT組、0.01%乙醇組、10n M(10nmol/L)-DHT組;枕部毛乳頭細胞組包括:0M-DHT組、0.01%乙醇組、10n M-DHT組。RT-PCR、Western blot、ELISA檢測FGF7及FGF2的表達。結(jié)果:頂部毛乳頭細胞中,0.01%乙醇組FGF7m RNA表達水平高于10n M-DHT組[(1.58±0.15)vs(0.83±0.18)P=0.018],0M-DHT組FGF2m RNA表達量高于10n MDHT組[(0.90±0.19)vs(0.41±0.11)P=0.22]。枕部毛乳頭細胞中,FGF7及FGF2m RNA表達量差異無統(tǒng)計學意義。細胞內(nèi)FGF7及FGF2的蛋白檢測:脫發(fā)區(qū)毛乳頭細胞中,0M-DHT組FGF7蛋白表達水平高于10n M-DHT組[(0.393±0.060)vs(0.282±0.019)P=0.038],10n M-DHT組FGF2蛋白表達水平高于0.01%乙醇組[(0.294±0.019)vs(0.201±0.058)P=0.021]。枕部毛乳頭細胞中,10n M-DHT組FGF7蛋白表達水平高于0M-DHT組[(0.207±0.025)vs(0.108±0.038)P=0.038],FGF2蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義。分泌型FGF7及FGF2蛋白檢測:頂部毛乳頭細胞中,與0n M-DHT組相比,當使用含10n M-DHT的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)頂部毛乳頭細胞時,FGF7外分泌量從216.446pg/m L上升至249.942pg/m L,FGF2外分泌量從123.125pg/m L下降至51.667 pg/m L,而與0.01%乙醇組相比,當加入10n M-DHT時,FGF2外分泌量從12.381pg/m L上升至51.667 pg/m L。三、結(jié)論1、體外傳代培養(yǎng)毛乳頭細胞時,AR蛋白表達量不穩(wěn)定。2、AR重組腺病毒對毛乳頭細胞的增殖無顯著性影響。3、DHT可抑制細胞內(nèi)FGF7蛋白的表達,促進分泌型FGF7及FGF2蛋白的表達。本研究初步證明FGF7及FGF2有可能參與了AGA發(fā)病,為進一步深入研究提供了依據(jù)。
【學位單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R758.71
【文章目錄】：
縮略語表
英文摘要
中文摘要
第一章 前言
第二章 各代毛乳頭細胞雄激素受體的表達
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論
第三章 雄激素受體基因腺病毒載體的構(gòu)建及其對人毛乳頭細胞增殖的影響
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗方法
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
第四章 雙氫睪酮對人毛乳頭細胞分泌FGF2 及FGF7 的影響
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
    4.3 實驗結(jié)果
    4.4 討論
全文總結(jié)
參考文獻
文獻綜述 毛囊的生長及調(diào)控
    參考文獻
碩士期間發(fā)表文章
致謝

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本文編號：2886928