一、背景與目的毛囊生長(zhǎng)是一個(gè)復(fù)雜的周期性過(guò)程,包括毛發(fā)生長(zhǎng)期、退行期、休止期。雖然調(diào)控毛發(fā)周期的機(jī)制還未完全闡明,目前已明確:毛乳頭與鄰近毛囊上皮、毛母質(zhì)、外毛根鞘之間的相互作用調(diào)控著每個(gè)周期的延續(xù)和過(guò)渡。間質(zhì)來(lái)源的毛乳頭位于毛囊的底部,外周由毛母質(zhì)包繞,它在體內(nèi)和體外具有誘導(dǎo)毛囊生長(zhǎng)的特性。來(lái)源于毛乳頭細(xì)胞的信號(hào)可以直接影響鄰近毛母質(zhì)細(xì)胞和外毛根鞘細(xì)胞的生長(zhǎng),并且可以調(diào)控毛囊生長(zhǎng)周期。這些信號(hào)包括sonic hedgehog(Shh)途徑、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)、wnt/β-catenin途徑、骨形成蛋白(BMP)、成纖維細(xì)胞因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)等。雄激素性脫發(fā)(AGA)是最常見(jiàn)的男性脫發(fā)疾病,發(fā)病機(jī)制涉及局部雄激素分泌增多、雄激素受體(AR)表達(dá)量增多、II型5α還原酶和旁分泌等,而雙氫睪酮(DHT)目前被認(rèn)為是雄激素性脫發(fā)主要致病因素。睪酮在II型5α還原酶的作用下可形成活性更強(qiáng)的DHT,II型5α還原酶的致病作用已經(jīng)非常明確,男性雄激素性脫發(fā)的首選治療方案是長(zhǎng)期口服II型5α還原酶抑制劑,它可降低患者血清和頭皮的DHT濃度,目前DHT誘導(dǎo)的雄激素性脫發(fā)的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。既往研究發(fā)現(xiàn)DHT促進(jìn)AGA患者頂部毛乳頭細(xì)胞分泌TGF-β,從而抑制毛囊上皮細(xì)胞的生長(zhǎng),DHT同時(shí)也可以促進(jìn)胡須部毛乳頭細(xì)胞分泌IGF-1,從而促進(jìn)毛囊上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步研究DHT誘導(dǎo)的旁分泌途徑,初步探索FGF2及FGF7是否參與男性雄激素性脫發(fā)的發(fā)病。二、方法和結(jié)果1、從人頭皮中分離出毛乳頭,體外培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞,檢測(cè)各代毛乳頭細(xì)胞中AR的表達(dá)。結(jié)果:體外傳代培養(yǎng)時(shí),第6代毛乳頭細(xì)胞AR蛋白表達(dá)量明顯低于第3代毛乳頭細(xì)胞。2、構(gòu)建AR腺病毒載體并轉(zhuǎn)染毛乳頭細(xì)胞,RT-PCR、Western blot、免疫熒光檢測(cè)AR的表達(dá),CCK-8法檢測(cè)AR腺病毒對(duì)人毛乳頭細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染腺病毒的毛乳頭細(xì)胞)、空載體組、AR過(guò)表達(dá)組各組之間毛乳頭細(xì)胞的增殖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、以下步驟均在過(guò)表達(dá)AR的毛乳頭細(xì)胞中進(jìn)行,根據(jù)實(shí)驗(yàn)是否加入DHT、0.01%乙醇進(jìn)行分組,脫發(fā)區(qū)頂部毛乳頭細(xì)胞組包括:0M(0mol/L)-DHT組、0.01%乙醇組、10n M(10nmol/L)-DHT組;枕部毛乳頭細(xì)胞組包括:0M-DHT組、0.01%乙醇組、10n M-DHT組。RT-PCR、Western blot、ELISA檢測(cè)FGF7及FGF2的表達(dá)。結(jié)果:頂部毛乳頭細(xì)胞中,0.01%乙醇組FGF7m RNA表達(dá)水平高于10n M-DHT組[(1.58±0.15)vs(0.83±0.18)P=0.018],0M-DHT組FGF2m RNA表達(dá)量高于10n MDHT組[(0.90±0.19)vs(0.41±0.11)P=0.22]。枕部毛乳頭細(xì)胞中,FGF7及FGF2m RNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞內(nèi)FGF7及FGF2的蛋白檢測(cè):脫發(fā)區(qū)毛乳頭細(xì)胞中,0M-DHT組FGF7蛋白表達(dá)水平高于10n M-DHT組[(0.393±0.060)vs(0.282±0.019)P=0.038],10n M-DHT組FGF2蛋白表達(dá)水平高于0.01%乙醇組[(0.294±0.019)vs(0.201±0.058)P=0.021]。枕部毛乳頭細(xì)胞中,10n M-DHT組FGF7蛋白表達(dá)水平高于0M-DHT組[(0.207±0.025)vs(0.108±0.038)P=0.038],FGF2蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分泌型FGF7及FGF2蛋白檢測(cè):頂部毛乳頭細(xì)胞中,與0n M-DHT組相比,當(dāng)使用含10n M-DHT的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)頂部毛乳頭細(xì)胞時(shí),FGF7外分泌量從216.446pg/m L上升至249.942pg/m L,FGF2外分泌量從123.125pg/m L下降至51.667 pg/m L,而與0.01%乙醇組相比,當(dāng)加入10n M-DHT時(shí),FGF2外分泌量從12.381pg/m L上升至51.667 pg/m L。三、結(jié)論1、體外傳代培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞時(shí),AR蛋白表達(dá)量不穩(wěn)定。2、AR重組腺病毒對(duì)毛乳頭細(xì)胞的增殖無(wú)顯著性影響。3、DHT可抑制細(xì)胞內(nèi)FGF7蛋白的表達(dá),促進(jìn)分泌型FGF7及FGF2蛋白的表達(dá)。本研究初步證明FGF7及FGF2有可能參與了AGA發(fā)病,為進(jìn)一步深入研究提供了依據(jù)。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R758.71
【文章目錄】：
縮略語(yǔ)表
英文摘要
中文摘要
第一章 前言
第二章 各代毛乳頭細(xì)胞雄激素受體的表達(dá)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
第三章 雄激素受體基因腺病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)人毛乳頭細(xì)胞增殖的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
第四章 雙氫睪酮對(duì)人毛乳頭細(xì)胞分泌FGF2 及FGF7 的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 毛囊的生長(zhǎng)及調(diào)控
    參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表文章
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本文編號(hào)：2886928