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惡性黑色素瘤中MAPK信號通路及相關(guān)癌基因的研究

發(fā)布時間:2020-11-17 20:50
   背景研究表明在皮膚惡性黑色素瘤中癌基因NRAS的突變率為9-15%,BRAF的突變率為60-66%,而在視網(wǎng)膜惡性黑色素瘤中卻沒有發(fā)現(xiàn)NRAS和BRAF基因的突變。在鼻腔惡性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因的突變率未見報道。本部分實驗旨在研究鼻腔惡性黑色素瘤標本中NRAS和BRAF的突變。 方法:提取12例鼻腔惡性黑色素瘤新鮮組織中的DNA,經(jīng)PCR擴增后,進行基因序列分析并與正常NRAS和BRAF基因序列比較。 結(jié)果:12例標本中,未發(fā)現(xiàn)NRAS基因突變,8例標本中發(fā)現(xiàn)1例BRAF基因突變。 結(jié)論:鼻腔惡性黑色素瘤的NRAS和BRAF突變率遠低于皮膚惡性黑色素瘤。 背景研究表明Ras-Raf-MAPKK-ERK信號通路的持續(xù)活化在皮膚惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用,而這一信號通路的持續(xù)活化與NRAS和BRAF基因的高突變率有關(guān)。在前面的研究中,我們在鼻腔惡性黑色素瘤中未發(fā)現(xiàn)NRAS基因突變,BRAF基因的突變率也很低,那么在鼻腔惡性黑色素瘤中是否存在ERK的持續(xù)活化呢?本部分實驗旨在研究鼻腔惡性黑色素瘤中持續(xù)活化的ERK。 方法:用Western蛋白印跡法檢測12例鼻腔惡性黑色素瘤標本中活化的ERK。 結(jié)果:12例鼻腔惡性黑色素瘤標本中,有8例表達活化的ERK,占66%。 結(jié)論::ERK的持續(xù)活化是鼻腔惡性黑色素瘤的發(fā)病機制之 背景:研究表明ERK的持續(xù)活化在惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用,ERK的激活對于Ras誘導的許多細胞反應、許多轉(zhuǎn)錄因子(Elk1、cEts1、c-Ets2)的激活以及許多激酶(如p90rsk1、MNK1、MNK2)的激活是至關(guān)重要的。在惡性黑色素瘤中激活的ERK究竟參與了哪些細胞反應還有待進一步研究。本部分實驗旨在研究ERK對細胞周期的影響及其機制。 方法:選用持續(xù)活化的ERK細胞株A-375,用MEK抑制劑PD98059阻斷ERK信號通路,觀察細胞生長曲線并用MTT法觀察細胞增殖,用流式細胞儀檢測細胞周期,用Western蛋白印跡法檢測活化的ERK和細胞周期蛋白Cycline D1的表達。 結(jié)果:ERK信號通路阻斷后,G0-1期細胞所占比例明顯增加(p0.01),S期細胞所占比例明顯降低(p0.01),同時細胞周期蛋白Cyclin Dl無表達。 結(jié)論:ERK信號通路阻斷后,細胞阻滯于G0-1期。其機制與細胞周期蛋白Cyclin D1的合成抑制有關(guān)。 背景:研究表明ERK的持續(xù)活化在惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用,同時有研究表明ERK信號轉(zhuǎn)導通路在急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia AML)中起著一定的抗凋亡作用。而ERK信號通路是否在惡性黑色素瘤細胞中也有抗凋亡作用尚無報道。本部分實驗旨在探索活化的ERK信號通路在惡性黑色素瘤細胞中的抗凋亡作用。 方法:用惡性黑色素瘤細胞A-375分別在含血清、含血清加PD98059、無血清、無血清加PD98059培液中培養(yǎng),用流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率,并用熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察凋亡細胞,比較各組細胞間凋亡差異。 結(jié)果:ERK通路激活時,無血清組與含血清組細胞凋亡無顯著性差異,ERK通路阻斷后,含血清組與無血清組細胞凋亡有顯著性差異。 結(jié)論:ERK信號轉(zhuǎn)導通路在惡性黑色素瘤細胞中有一定的抗凋亡作用。
【學位單位】:復旦大學
【學位級別】:博士
【學位年份】:2009
【中圖分類】:R739.5
【文章目錄】:
中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻
第一部分 鼻腔惡性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因突變研究
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻
第二部分 鼻腔惡性黑色素瘤中持續(xù)活化的ERK酶檢測
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻
第三部分 ERK信號通路阻斷后惡性黑色素瘤細胞周期的變化
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻
第四部分 ERK信號通路在惡性黑色素瘤細胞中的抗凋亡作用
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻
全文小結(jié)
綜述
    參考文獻
己發(fā)表文章
致謝

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;MAPK signal pathways in the regulation of cell proliferation in mammalian cells[J];Cell Research;2002年01期



本文編號:2887900

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