發(fā)布時間：2020-11-02 02:42

　　 銀屑病是一種常見的多因素誘導(dǎo)的炎癥性慢性皮膚病,發(fā)病率高,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,很難根治。目前認(rèn)為其主要是由輔助性T細(xì)胞(Th細(xì)胞)為主介導(dǎo)的一種自身免疫性疾病,多種炎癥細(xì)胞及細(xì)胞因子參與其中。角質(zhì)形成細(xì)胞(Keratinocyte)在表皮形成中起到非常重要的作用,并且角質(zhì)形成細(xì)胞能夠分泌角質(zhì)蛋白,那么在銀屑病中角質(zhì)形成細(xì)胞會發(fā)生怎樣的改變?研究報道在銀屑病患者皮損處,角質(zhì)形成細(xì)胞所表達(dá)的角蛋白譜會發(fā)生改變,其中包括作為“銀屑病增殖相關(guān)角蛋白”的角蛋白17(Keratin17)表達(dá)水平顯著升高。Keratin17在正常皮膚中表達(dá)量很低或不表達(dá),但在銀屑病患者的皮損處則是高表達(dá),同時其表達(dá)水平與銀屑病發(fā)病過程和嚴(yán)重程度密切相關(guān)。在銀屑病發(fā)生發(fā)展過程中可能存在“自身反應(yīng)性T細(xì)胞——細(xì)胞因子——K17”作用環(huán)路。在這個環(huán)路中自身反應(yīng)性T細(xì)胞被角蛋白17激活,從而分泌細(xì)胞因子如白介素22(IL-22)、γ-干擾素(IFN-γ)等,這些炎癥因子不僅能夠上調(diào)K17的表達(dá),還能引發(fā)局部的表皮增生和免疫炎癥反應(yīng);這將引起自身反應(yīng)性T細(xì)胞進(jìn)一步激活,形成一個正反饋環(huán)路,促進(jìn)銀屑病的發(fā)生發(fā)展。大多數(shù)銀屑病患者采用局部治療,目前治療銀屑病的藥物主要有維生素D3類似物、免疫抑制劑、皮質(zhì)類固醇等,但這些類藥物并沒有取得理想的效果。所以,如何最大程度的發(fā)揮現(xiàn)有藥物的局部治療作用,已成為藥物研發(fā)的嚴(yán)峻考驗。而牛蒡子苷元(Arctigenin)是從菊科植物牛蒡的果實牛蒡子中分離出來的木脂素單體,現(xiàn)代藥理學(xué)證明牛蒡子苷元有抗炎,抗腫瘤,抗氧化,降血糖以及抑制T細(xì)胞增殖的作用等多重功效,但尚無將該藥用于慢性皮膚性疾病的報道,此外如果能局部治療有效,可以盡快實現(xiàn)該藥的臨床轉(zhuǎn)化,減少潛在的肝毒性對機(jī)體的影響。咪喹莫特是一種咪唑喹啉類小分子免疫調(diào)節(jié)劑,主要作用是抗尖銳濕疣、肛周疣、日光性角化病及基底細(xì)胞癌等。咪喹莫特乳膏作用于皮膚時可以引起皮膚的多種免疫學(xué)改變,目前是世界上比較公認(rèn)的建立銀屑病模型的藥物。因此,本課題擬利用咪喹莫特誘導(dǎo)構(gòu)建銀屑病病理模型,并在此基礎(chǔ)上觀察牛蒡子苷元對其治療作用并探討可能的機(jī)制。目的:觀察牛蒡子苷元對咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣皮膚病的治療效果;探討牛蒡子苷元對KC細(xì)胞表達(dá)K17的影響及其具體分子機(jī)制。方法:1)觀察不同滲透促進(jìn)劑對牛蒡子苷元滲透性的影響,篩選滲透性較好的促進(jìn)劑制備牛蒡苷元乳膏;2)采用咪喹莫特誘導(dǎo)銀屑病樣皮膚模型,并用牛蒡子苷元乳膏進(jìn)行涂抹治療;3)通過HE染色觀察組織結(jié)構(gòu)變化,并分析其疾病嚴(yán)重程度;4)取銀屑病小鼠的病變組織進(jìn)行RT-PCR、western-blot檢測,分析牛蒡子苷元對咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣皮膚模型的K17表達(dá)的影響;5)采用MTT法檢測不同濃度的牛蒡子苷元對KC細(xì)胞增殖的影響;通過流式細(xì)胞術(shù)檢測牛蒡子苷元對KC細(xì)胞周期和凋亡的影響;6)用IFN-γ和TNF-α刺激KC細(xì)胞,建立K17高表達(dá)模型,然后用牛蒡子苷元進(jìn)行處理,24h后通過實時定量PCR、western-blot檢測K17的表達(dá)變化。結(jié)果:制備出滲透性較好的牛蒡子苷元乳膏;成功構(gòu)建了咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病小鼠模型;牛蒡子苷元能夠明顯改善疾病嚴(yán)重程度;與模型組相比,牛蒡子苷元治療組K17的蛋白表達(dá)水平明顯降低,而AMPK的磷酸化水平升高。牛蒡子苷元可抑制KC細(xì)胞的增殖,阻滯其周期進(jìn)程,促進(jìn)KC細(xì)胞的凋亡,并呈劑量依賴性。300U/m LIFN-γ和500ng/m L TNF-α刺激使KC細(xì)胞中K17 m RNA及蛋白表達(dá)水平顯著升高,且IFN-γ和TNF-α處理濃度與K17的表達(dá)量之間存在顯著正相關(guān);而牛蒡子苷元處理組,IFN-γ和TNF-α誘導(dǎo)的K17上調(diào)明顯受到抑制。結(jié)論:牛蒡子苷元能夠減緩咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣皮膚發(fā)展,其機(jī)制可能是通過抑制KC細(xì)胞的增殖,促進(jìn)KC細(xì)胞的凋亡。牛蒡子苷元能夠下調(diào)K17的表達(dá),其可能的調(diào)控機(jī)制是通過激活A(yù)MPK來實現(xiàn)的,說明牛蒡子苷元對銀屑病的治療作用可能與K17有關(guān)。本課題系統(tǒng)觀察了牛蒡子苷元對銀屑病樣皮膚的治療效果,并進(jìn)一步闡明其可能的分子機(jī)制,為將該藥應(yīng)用于臨床提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R758.63
【部分圖文】：

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文體 9 上，引起Ⅰ型干擾素 IFN- 和 IFN-β 激活以及分泌。LL37/RNA 復(fù)合物能夠通過Toll 樣受體 7 激活漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞并且通過 Toll 樣受體 8 激活骨髓來源的 DC 細(xì)胞。因此，在銀屑病的模型中發(fā)現(xiàn)骨髓來源的 DC 細(xì)胞能夠被 LL37/RNA 復(fù)合物和Ⅰ型干擾素激活，進(jìn)而促進(jìn) T 細(xì)胞的激活和細(xì)胞因子的分泌[11]。

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文究人員發(fā)現(xiàn)了在銀屑病中使角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答的細(xì)胞因子包括 IL-17、TNF、IFN-γ、IL-1、IFN- 、和 IL-22[42, 43]。這些基因的集合豐富了銀屑病的轉(zhuǎn)錄組。IL-17IFN-γ、IL-22 和 TNF 細(xì)胞因子能夠共同引起角質(zhì)細(xì)胞的增殖以及趨化因子、細(xì)胞因子、AMP 的分泌。這將形成一個反饋環(huán)，并且反過來作用于樹突狀細(xì)胞、T 細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞這將使侵犯皮膚的炎癥過程持續(xù)發(fā)生(圖 2)。

圖 3：K17 與相關(guān)細(xì)胞因子的關(guān)系引自 Jin L, Wang G. Med Res Rev. 2014 Mar;34(2):438-54.5.3 K17 和銀屑病自身反應(yīng)性 T 細(xì)胞在銀屑病的病理學(xué)過程中，K17 是一個主要的目標(biāo)抗原通過自體反應(yīng)性 T 細(xì)胞被識別，因為它有著和鏈球菌相同的表位并且能夠促進(jìn) T 細(xì)胞的增殖以及分泌細(xì)胞因子[55]。銀屑病的皮損發(fā)生還與鏈球菌膜上 M 蛋白有關(guān)[56]，它是銀屑病的外源性致病抗原，能夠激活扁桃體中 T 淋巴細(xì)胞，參與皮膚組織中的炎癥反應(yīng)。角蛋白 17 與鏈球菌膜上 M 蛋白有著相同的 ALEEAN 氨基酸序列，這也是角蛋白 17 被視為銀屑病自身靶抗原的原因[57]。主要是通過進(jìn)一步活化 T 細(xì)胞，引起一系列的應(yīng)答反應(yīng)以及參與銀屑病免疫紊亂的維持，T 細(xì)胞表位對角質(zhì)形成細(xì)胞增殖以及 IFN-γ 的產(chǎn)生具有重要的作用。所以抑制 K17 的表達(dá)，降低角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖速率可以通過 K1反義寡核苷酸（ASODN）來完成[58]。綜上所述，角蛋白 17 可以作為銀屑病的一個新的藥物治療靶點。然而，牛蒡子苷元作為一個具有生物活性的中藥單體是否能夠
【參考文獻(xiàn)】

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1 程欣;馬云淑;張曉雷;閻紅;白一岑;;羌活揮發(fā)油對大黃藤素體外促透皮作用的研究[J];中南藥學(xué);2008年01期

本文編號：2866456