目的:探討Toll樣受體9(Toll-like receptor 9,TLR9)在中波紫外線(ultraviolet B,UVB)誘導的人永生化角質(zhì)形成細胞(human immortal keratinocyte,HaCaT)光老化模型中對下游信號分子的調(diào)控作用。方法:實驗分為3組:正常對照組、模型組、A151組。正常對照組予以假照射處理,模型組予以輻照劑量30 m J/cm~2 UVB照射處理,A151組予以輻照劑量30 m J/cm~2 UVB照射并加用TLR9抑制劑進行干預處理。使用衰老相關β半乳糖苷酶法觀察細胞衰老。CCK-8法檢測細胞增殖。Western blot檢測TLR9、磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子(phospho nucler factor-κB,pNF-κB)蛋白表達。RT-PCR法檢測細胞腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA轉(zhuǎn)錄水平。結果:Western blot結果顯示模型組較正常對照組TLR9、pNF-κB蛋白表達量升高(P=0.000,P=0.000),A151組較模型組TLR9、pNF-κB蛋白表達量降低(P=0.010,P=0.000)。RTPCR結果顯示模型組較正常對照組TNF-α、IL-6mRNA轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)(P=0.000,P=0.000),A151組較模型組TNF-αmRNA、IL-6 mRNA轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)(P=0.000,P=0.030)。衰老相關β半乳糖苷酶染色結果顯示模型組較正常對照組染色陽性細胞數(shù)增多(P=0.000),A151組較模型組染色陽性細胞數(shù)減少(P=0.000)。CCK-8結果顯示模型組較正常對照組細胞增殖率降低(P=0.010),A151組較模型組細胞增殖率升高(P=0.045)。結論:UVB通過上調(diào)HaCaT中的TLR9表達,引起核轉(zhuǎn)錄因子磷酸化,促進細胞因子TNF-ɑ、IL-6轉(zhuǎn)錄水平升高,介導細胞炎性反應,從而降低細胞增殖率,誘導細胞衰老。
【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 模型建立及干預
        1.2.3 衰老相關β半乳糖苷酶法檢測細胞衰老
        1.2.4 CCK-8法檢測細胞增殖率
        1.2.5 Western blot法檢測TLR9、p NF-κB的蛋白水平
        1.2.6 PCR檢測TNF-α、IL-6的m RNA轉(zhuǎn)錄水平
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 各組衰老相關β半乳糖苷酶檢測結果
    2.2 CCK-8檢測細胞增殖率
    2.3 各組細胞TLR9及p NF-κB蛋白表達水平檢測結果
    2.4 各組細胞TNF-α、IL-6的m RNA轉(zhuǎn)錄水平檢測
3 討論

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