目的研究皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化與其基因表達(dá)的關(guān)系,探討RUNX3基因甲基化在皮膚惡性黑色素瘤發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法采用半定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375中的RUNX3基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平、甲基化特異性多聚酶鏈反應(yīng)(MSP)檢測(cè)其啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)、Western Blot檢測(cè)其蛋白表達(dá)情況;比較經(jīng)不同濃度去甲基化藥物5—雜氮胞苷(5—azac)(0μmol/l,1μmol/l,5μmol/l,10μmol/l,20μmol/l)處理A375細(xì)胞后,RUNX3基因mRNA的表達(dá)水平、啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)及蛋白表達(dá)情況的差異,并用MTT法觀察5—雜氮胞苷對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果在人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375中,去甲基化藥物5—雜氮胞苷處理前,RUNX3基因表達(dá)缺失,處于失活狀態(tài),且該基因啟動(dòng)子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)。但經(jīng)不同濃度5—雜氮胞苷處理細(xì)胞后,失活的RUNX3基因得以重新激活,mRNA不同程度恢復(fù)轉(zhuǎn)錄,蛋白亦出現(xiàn)不同程度的表達(dá),且高甲基化的RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生不同程度去甲基化。MTT示5—雜氮胞苷(5-azac)可在一定程度上抑制A375腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。 結(jié)論皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因的失活可能與其啟動(dòng)子區(qū)高甲基化有關(guān),并可能在惡性黑色素瘤的發(fā)病機(jī)制中起著一定的作用。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

RIJNX3mRNA在未用藥組細(xì)胞中未見表達(dá)，經(jīng)l林moFI、5林moUI、10”moUI、20拜m。功的不同濃度5一azac處理后可見 RUNX3mRNA表達(dá)，且隨著濃度的增加表達(dá)逐漸增強(qiáng)(見圖3一3，3一4)。Markero5A圖 1020(林moFI) Marker0151020(林moFI)B圖圖3一 3RT一PCR分析皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375經(jīng)5一azac干預(yù)前后目的基因RUNX3和內(nèi)參照p一 actinmRNA的表達(dá)A圖所示是干預(yù)1d的;B圖所示是干預(yù)3d的 M:DNAMarker，O:未經(jīng)干預(yù)的皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375p一aetin內(nèi)參照(550bp)，RUNX3:目的片段(404bp)

RIJNX3mRNA在未用藥組細(xì)胞中未見表達(dá)，經(jīng)l林moFI、5林moUI、10”moUI、20拜m。功的不同濃度5一azac處理后可見 RUNX3mRNA表達(dá)，且隨著濃度的增加表達(dá)逐漸增強(qiáng)(見圖3一3，3一4)。Markero5A圖 1020(林moFI) Marker0151020(林moFI)B圖圖3一 3RT一PCR分析皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375經(jīng)5一azac干預(yù)前后目的基因RUNX3和內(nèi)參照p一 actinmRNA的表達(dá)A圖所示是干預(yù)1d的;B圖所示是干預(yù)3d的 M:DNAMarker，O:未經(jīng)干預(yù)的皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375p一aetin內(nèi)參照(550bp)，RUNX3:目的片段(404bp)

A375細(xì)胞中RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)是甲基化的，經(jīng)l林mol/l、5林moFI、10林moUI、20林mo扒不同濃度5一azac處理后甲基化和非甲基化共存，說明部分發(fā)生了去甲基化(見圖3一5)。 opM1pM MMUMU 5pMMU 1opM20pMMU MUH20翎知翔仰M opM1pM MUMU 1opMMU20pMMUHZO姍期期仰F圖圖3一 5MSP示皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375經(jīng)不同濃度5一azac干預(yù)前后RUNX3基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)E圖所示是干預(yù)1d的;F圖所示是干預(yù)3d的M:甲基化引物擴(kuò)增后產(chǎn)物(132bp)U:非甲基化引物擴(kuò)增后產(chǎn)物(138bp)0剛:未干預(yù)1網(wǎng):1恤01/15一azaes幽:5陽(yáng)01/15一azae10剛:10靦01/15一 azae20剛:20靦01/15一azae M:DNAMarkerH20:陰性對(duì)照2.45一雜氮胞昔處理前后人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375細(xì)胞中RUNx3蛋白表達(dá)情況 westemBlot結(jié)果示A375細(xì)胞中RUNX3蛋白在處理前無表達(dá)，經(jīng)1”mo功、5料moUI、10卜mo叭、20林moFI不同濃度5一azac處理后可見RUNX3蛋白出現(xiàn)不同程度的表達(dá)，且隨著處理藥物濃度的增加表達(dá)逐漸增強(qiáng)。(見圖3一6，3一7)
【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2853475