目的研究皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因啟動子區(qū)CpG島甲基化與其基因表達(dá)的關(guān)系,探討RUNX3基因甲基化在皮膚惡性黑色素瘤發(fā)病機制中的作用。 方法采用半定量PCR(RT-PCR)檢測人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375中的RUNX3基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平、甲基化特異性多聚酶鏈反應(yīng)(MSP)檢測其啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)、Western Blot檢測其蛋白表達(dá)情況;比較經(jīng)不同濃度去甲基化藥物5—雜氮胞苷(5—azac)(0μmol/l,1μmol/l,5μmol/l,10μmol/l,20μmol/l)處理A375細(xì)胞后,RUNX3基因mRNA的表達(dá)水平、啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)及蛋白表達(dá)情況的差異,并用MTT法觀察5—雜氮胞苷對細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果在人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375中,去甲基化藥物5—雜氮胞苷處理前,RUNX3基因表達(dá)缺失,處于失活狀態(tài),且該基因啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)。但經(jīng)不同濃度5—雜氮胞苷處理細(xì)胞后,失活的RUNX3基因得以重新激活,mRNA不同程度恢復(fù)轉(zhuǎn)錄,蛋白亦出現(xiàn)不同程度的表達(dá),且高甲基化的RUNX3基因啟動子區(qū)發(fā)生不同程度去甲基化。MTT示5—雜氮胞苷(5-azac)可在一定程度上抑制A375腫瘤細(xì)胞的生長和增殖。 結(jié)論皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因的失活可能與其啟動子區(qū)高甲基化有關(guān),并可能在惡性黑色素瘤的發(fā)病機制中起著一定的作用。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

RIJNX3mRNA在未用藥組細(xì)胞中未見表達(dá)，經(jīng)l林moFI、5林moUI、10”moUI、20拜m。功的不同濃度5一azac處理后可見 RUNX3mRNA表達(dá)，且隨著濃度的增加表達(dá)逐漸增強(見圖3一3，3一4)。Markero5A圖 1020(林moFI) Marker0151020(林moFI)B圖圖3一 3RT一PCR分析皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375經(jīng)5一azac干預(yù)前后目的基因RUNX3和內(nèi)參照p一 actinmRNA的表達(dá)A圖所示是干預(yù)1d的;B圖所示是干預(yù)3d的 M:DNAMarker，O:未經(jīng)干預(yù)的皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375p一aetin內(nèi)參照(550bp)，RUNX3:目的片段(404bp)

RIJNX3mRNA在未用藥組細(xì)胞中未見表達(dá)，經(jīng)l林moFI、5林moUI、10”moUI、20拜m。功的不同濃度5一azac處理后可見 RUNX3mRNA表達(dá)，且隨著濃度的增加表達(dá)逐漸增強(見圖3一3，3一4)。Markero5A圖 1020(林moFI) Marker0151020(林moFI)B圖圖3一 3RT一PCR分析皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375經(jīng)5一azac干預(yù)前后目的基因RUNX3和內(nèi)參照p一 actinmRNA的表達(dá)A圖所示是干預(yù)1d的;B圖所示是干預(yù)3d的 M:DNAMarker，O:未經(jīng)干預(yù)的皮膚黑色素瘤細(xì)胞株A375p一aetin內(nèi)參照(550bp)，RUNX3:目的片段(404bp)

A375細(xì)胞中RUNX3基因啟動子區(qū)是甲基化的，經(jīng)l林mol/l、5林moFI、10林moUI、20林mo扒不同濃度5一azac處理后甲基化和非甲基化共存，說明部分發(fā)生了去甲基化(見圖3一5)。 opM1pM MMUMU 5pMMU 1opM20pMMU MUH20翎知翔仰M opM1pM MUMU 1opMMU20pMMUHZO姍期期仰F圖圖3一 5MSP示皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375經(jīng)不同濃度5一azac干預(yù)前后RUNX3基因啟動子甲基化狀態(tài)E圖所示是干預(yù)1d的;F圖所示是干預(yù)3d的M:甲基化引物擴增后產(chǎn)物(132bp)U:非甲基化引物擴增后產(chǎn)物(138bp)0剛:未干預(yù)1網(wǎng):1恤01/15一azaes幽:5陽01/15一azae10剛:10靦01/15一 azae20剛:20靦01/15一azae M:DNAMarkerH20:陰性對照2.45一雜氮胞昔處理前后人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375細(xì)胞中RUNx3蛋白表達(dá)情況 westemBlot結(jié)果示A375細(xì)胞中RUNX3蛋白在處理前無表達(dá)，經(jīng)1”mo功、5料moUI、10卜mo叭、20林moFI不同濃度5一azac處理后可見RUNX3蛋白出現(xiàn)不同程度的表達(dá)，且隨著處理藥物濃度的增加表達(dá)逐漸增強。(見圖3一6，3一7)
【共引文獻】

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1 王小瑞;張紅偉;郭春林;王永福;;去甲基化在胃癌中的研究進展[J];國際消化病雜志;2010年05期

2 曾麗;蘇玉文;;銀屑病表觀遺傳修飾的研究[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2008年08期

3 曾麗;蘇玉文;;RUNX3基因甲基化與腫瘤的關(guān)系[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2008年05期

4 何紹亞;韓盛璽;陳和平;;抑癌基因Runx3甲基化研究進展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2010年10期

5 吳明彩;蔣明;李大彩;畢富勇;;5-氮-2'脫氧胞苷對Reh細(xì)胞增殖及RUNX3基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的影響[J];皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年06期

6 Giuseppe ZARDO,Francesco FAZI,Lorena TRAVAGLINI,Clara NERVI;Dynamic and reversibility of heterochromatic gene silencing in human dis-ease[J];Cell Research;2005年09期

7 倪志;劉南植;李林芳;張慶;李秀梅;洪瑋;;5-Aza-CdR對人結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表達(dá)的影響[J];世界華人消化雜志;2006年02期

8 倪志;鮑縵夕;劉南植;趙秋;覃華;楊彥;邱藝堅;王婷婷;;結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞RUNX3基因的表達(dá)與其增殖及凋亡的關(guān)系[J];世界華人消化雜志;2008年07期

9 張愛鳳;張師前;吳喜梅;張琳琳;傅樂樂;;5-氮-2′-脫氧胞苷對人卵巢癌細(xì)胞凋亡及DNA錯配修復(fù)基因表達(dá)的影響[J];中國腫瘤生物治療雜志;2007年01期

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1 任劍珍;結(jié)腸癌T-cadherin基因的表達(dá)及甲基化影響的探討[D];中南大學(xué);2011年

2 何劍鋒;人涎腺腺樣囊性癌中RUNX3的表達(dá)、甲基化狀態(tài)及與腫瘤臨床病理因素和預(yù)后之間的相關(guān)性研究[D];浙江大學(xué);2009年

3 孔令敏;CD147基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制及其表觀遺傳修飾[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 鄭蕓;RUNX3基因甲基化修飾及其下游AKT信號通路在人肺腺癌化療耐藥表型中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

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1 吳衛(wèi)兵;Runx1基因mRNA表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

2 陳建華;Runx3，Smad4及Ki-67蛋白在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)和意義[D];鄭州大學(xué);2010年

3 王煒煒;肝癌細(xì)胞中OY-TES-1基因啟動子甲基化狀態(tài)分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

4 周曉峰;前列腺癌中RUNX3基因的表達(dá)及其CpG島甲基化的臨床意義[D];蘇州大學(xué);2011年

5 康乃馨;人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞株Cx32基因甲基化狀態(tài)及其對蛋白表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2007年

6 楊婷;DNA甲基化及凋亡相關(guān)基因與食管癌的關(guān)系研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2007年

7 孔令敏;CD147啟動子CpG島甲基化的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 倪志;5-氮-2’-脫氧胞苷對人結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表達(dá)的影響[D];華中科技大學(xué);2006年

9 羅霄;LHX6基因的甲基化檢測及其在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)研究[D];西南大學(xué);2008年

10 張松;人胚胎肌肉組織來源的隨機惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的生物學(xué)特性[D];汕頭大學(xué);2008年

本文編號：2853475